目的:观察右归丸、淫羊藿、淫羊藿苷含药血清对成骨细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的作用。方法:获取新生SD乳鼠的成骨细胞,体外培养至第3代细胞,分对照组、右归丸组、淫羊藿组、淫羊藿苷组共4组,分别在含药血清培养后1、3、5、7、9d时用WST法测细胞增殖情况;培养48h后,以In-cell western blot的方法检测各组成骨细胞wnt3a、wnt7b、β-catenin蛋白的表达情况。结果:与对照组比较各组均能促进成骨细胞的增殖,右归丸组在5d、7d、9d时差异有统计学意义,淫羊藿组在7d、9d时差异有统计学意义,淫羊藿苷组在9d时差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,右归丸组能显著提高成骨细胞Wnt3a、Wnt7b、β-catenin蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿组及淫羊藿苷组虽能提高Wnt7b的蛋白表达,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。同时,淫羊藿组、淫羊藿苷与右归丸组比较,在对Wnt3a、Wnt7b、β-catenin蛋白表达的作用上比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:右归丸、淫羊藿、淫羊藿苷三者均能促进体外培养的大鼠成骨细胞的增殖,以右归丸作用最显著;右归丸可显著促进wnt3a、wnt7b、β-catenin蛋白的表达。
目的:建立人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞共育系,观察人脐静脉内皮细胞在共育系中对人成骨细胞功能的影响,进一步探讨人脐静脉内皮细胞对成骨细胞骨形成能力的影响。方法:采用二维共培养模型建立人内皮细胞/成骨细胞(1∶1)共育系,运用噻唑蓝比色法(MTT),分别在1d、3d、5d、7d时观察人脐静脉内皮细胞与成骨细胞单体培养以及共育系中的增殖情况;同时,运用蛋白免疫印迹方法(In cell western blot)分别测定人成骨细胞单体培养和共育系中骨保护素/破骨细胞分化因子配体(OPG/RANKL)蛋白的表达情况。采用方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:从第3天开始,共育系中人成骨细胞的增殖能力明显优于成骨细胞单体培养;两者比较差异有统计学意义(P<0.05);于细胞培养第8天时分别测定人成骨细胞单体培养组和共育系中OPG/RANKL蛋白的表达,观察到共育系中(10.82±1.08)OPG蛋白表达量明显优于人成骨细胞单体培养组(6.65±0.43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);而共育系中(7.33±0.22)RANKL蛋白的表达含量与人成骨细胞单体培养(7.37±0.85)时表达无差异。结论:人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞具有良好的相容性,两种细胞之间具有相互协同效应;人脐静脉内皮细胞可能通过促进OPG蛋白的表达来促进成骨细胞骨形成的作用。
