杨海宁
- 作品数：16 被引量：28H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 汉坦病毒基因分型方法的建立及应用
- 目的:现今国内对汉坦病毒(HV)的分型主要依据血清学方法,但都存在一些问题:空斑减少中和实验(PRNT)、血凝抑制实验(HI),较费时且费用较高,结果判定和解释有困难,因此,难以推广;比较可靠、经济的方法是以单克隆抗体(...
- 贾继辉于修平王勇卞继峰赵蔚明周亚滨栾怡齐眉杨海宁张茂修
- 关键词：汉坦病毒基因分型方法
- 文献传递
- p73基因的研究进展被引量：1
- 2001年
- 1997年 Kaghad等在 1p36区发现了 p73基因 ,其编码的 p73蛋白在结构与功能上与 p5 3蛋白均具有相似性 ,遂被认为是一候选的抑癌基因。但此后的一些研究资料对此又提出质疑。究竟 p73是 p5 3的“兄弟”还是“披着羊皮的狼”?
- 杨海宁
- 关键词：P73P53抑癌基因基因结构基因分型
- HPV58 E6体外降解p53蛋白作用的研究
- 2002年
- 通过PCR方法从人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)全基因克隆中扩增出HPV5 8E6基因片段 ,克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游 ,并在体外转录成mRNA后 ,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中成功表达了含有生物素标记的HPV5 8E6蛋白 ,并在体外成功发现HPV5 8E6能够降解p5 3蛋白 ,从而推断结合并降解p5 3蛋白是其致癌作用的关键环节 。
- 杨海宁于修平卞继峰JasonJChen赵蔚明贾继辉周亚滨刘颖栾怡齐眉
- 关键词：体外降解P53蛋白乳头状瘤病毒抑癌蛋白
- HPV58E6基因的克隆表达及其体外降解p53蛋白作用的研究
- 目的:中国妇女宫颈癌标本中HPV58型的检出率极高,但国际上多重视于HPV16和18型的研究,而对HPV58型的研究却较少,尤其是对HPV58E6及其致癌性的研究亦未见报道。我们克隆并体外表达入乳头瘤病毒58型(HPV5...
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- 关键词：生物素标记P53体外降解
- 文献传递
- HPV58 E6基因的克隆及体外表达被引量：2
- 2001年
- 目的 :克隆并体外表达HPV5 8E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础。方法 :通过PCR方法从HPV5 8全基因克隆中扩增出HPV5 8E6基因片段 ,利用基因重组技术 ,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游 ,体外转录成mRNA后 ,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV5 8E6蛋白 ,化学发光法检测 ,X光胶片曝光显影鉴定。结果 :酶切电泳证实质粒构建正确 ,SDS PAGE电泳显示在相当于HPV5 8E6分子量约 18.8kD的位置出现条带 ,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带。结论 :成功表达了含有生物素标记的HPV5 8E6蛋白 。
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- 关键词：乳头状瘤病毒分子克隆基因表达基因克隆
- 山东地区汉坦病毒重要基因序列进化关系树的构建
- 目的:根据卫生部自然疫源性疾病专家咨询委员会对山东肾综合症出血热(HFRS)持续高发原因的考察报告显示,山东近十年每年发病数均居全国各省(自治区、直辖市)之首位,尤其是1986年、1995年和1996年三年病例数超过了全...
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- 关键词：汉坦病毒基因组序列基因序列
- 文献传递
- 减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建被引量：7
- 2002年
- 目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 。
- 卞继峰于修平赵蔚明耿昭杨海宁于瑾李静胡海燕卢翌张茂修姜广水
- 关键词：人乳头状瘤病毒DNA疫苗沙门氏菌属
- 牛乳头瘤病毒E6蛋白与p73蛋白的相互作用被引量：2
- 2002年
- 为进一步探讨和阐明E6蛋白的致癌机制以及充分认识新发现的抑癌基因p73的作用 ,在体外通过免疫共沉淀法研究p73和牛乳头瘤病毒 1型E6蛋白 (BPV 1E6 )的相互结合情况 ,后将表达p73和BPV 1E6的质粒导入SAOS 2细胞内 ,进一步研究细胞内E6蛋白对p73蛋白的诱导凋亡和转录活化功能等生物学活性的影响。结果发现 ,BPV 1E6与p73蛋白结合较弱 ,且未检测到E6能诱导p73蛋白的降解。在SAOS 2细胞内 ,BPV 1E6蛋白确实能部分抑制p73蛋白的诱导细胞凋亡的功能 ,并且E6蛋白对p73蛋白的转录激活作用也有影响 ,但这种影响作用颇弱。
- 杨海宁于修平Yi hui HongMinjie DuJasonJ. Chen卞继峰赵蔚明
- 关键词：乳头瘤病毒E6蛋白P73蛋白致癌机制
- 牛乳头瘤病毒E6蛋白与p73蛋白作用的研究
- 2001年
- 杨海宁于修平Jason J.Chen卞继峰
- 关键词：乳头瘤病毒E6蛋白P73蛋白
- 人乳头瘤病毒16型野毒株L1-E7融合基因重组腺病毒载体构建及在293细胞中表达嵌合病毒样颗粒的研究被引量：5
- 2001年
- 目的 制备人乳头瘤病毒HPV16L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法 以HPV16型的野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术制备HPV16L1 E7融合基因pUC19L1 E7,含L1的 1～ 30 1氨基酸 (AA)和E7的 1～ 6 0AA的编码DNA序列 ;并转入腺病毒穿梭质粒pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10共转染 2 93细胞 ,筛选重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7。以PCR、ELISA和Westernblot方法鉴定重组病毒及其表达的L1 E7蛋白 ,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP ,电镜观察VLP的形态结构。结果 PCR DNA序列分析表明成功构建了HPV16L1 E7重组质粒pUC19L1 E7;并获得HPV16重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,在 2 93细胞中可高效表达L1 E7蛋白 ,并形成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论 构建的重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7可有效表达HPV16L1 E7cVLP ,可进一步用于动物实验 。
- 卞继峰于修平赵蔚明杨海宁王芸胡海燕周亚滨贾继辉栾怡齐眉耿昭
- 关键词：乳头状瘤病毒病毒样颗粒腺病毒载体
