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中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆与表达研究被引量：2: 2008年; 从中国明对虾中成功克隆到抗脂多糖因子(ALF)的cDNA。该cDNA全长594bp,编码由123个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白分子量为13694.02Da,等电点pI为10.24,有25个氨基酸的信号肽。RT-PCR研究表明,ALF基因在中国明对虾血细胞和鳃中有高水平的组成型表达,在细菌刺激后,ALF基因在各组织中的表达均增加,尤其在心脏和胃中表达上调明显。从表达模式可以推测,中国明对虾的抗脂多糖因子,作为一种抗菌肽类效应分子,在清除病原的防御反应中可能起着重要的作用。; 周文杰王帅杜欣军王金星; 关键词：中国明对虾 CDNA克隆

棉铃虫组织蛋白酶B多克隆抗体制备及鉴定被引量：4: 2004年; 介绍了用重组的棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)制备兔多克隆抗体的方法。用已经克隆得到的pGEX 4T 1 HCB重组质粒转化的大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1菌株进行诱导表达 ,获得融合表达的包涵体产物。经过变性、复性等方法处理包涵体 ,获得可溶性融合蛋白。用凝血酶裂解融合蛋白 ,再经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化目的蛋白HCB ,用做抗原免疫家兔。产生的抗血清经硫酸铵沉淀 ,最后得到了抗棉铃虫组织蛋白酶B的多克隆抗体。用间接酶联免疫吸附测定法测得该抗体对重组表达的组织蛋白酶B和棉铃虫体内的组织蛋白酶B的效价分别为 1∶5 1 2 0 0和 1∶2 5 60 0。通过免疫印迹检测证明此抗体不仅可以识别重组表达的棉铃虫组织蛋白B ,而且可以识别棉铃虫卵巢匀浆液中的棉铃虫组织蛋白酶B。; 安晓萌邵红莲杜欣军赵小凡王金星; 关键词：棉铃虫组织蛋白酶B 多克隆抗体免疫印迹

中国明对虾先天免疫的模式识别与效应分子: 本研究通过淘选噬菌体展示文库、同源克隆和抑制性消减杂交的方法从中国明对虾中分别克隆得到了围食膜蛋白基因、脂多糖-β-1，3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)和三种抗菌肽(crustin)基因，并对这些基因的性质做了进一步研究。...; 杜欣军; 关键词：先天免疫抗菌肽模式识别效应分子

中国明对虾T7噬菌体展示文库的构建与免疫相关基因的淘选被引量：1: 2007年; 利用淘选噬菌体展示文库的方法,获取中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的免疫相关基因.首先用中国明对虾的血细胞mRNA构建了其T7噬菌体展示文库,文库滴度达到1.1×1011pfu/cm3,然后用不同的配体(脂多糖/几丁质/不同的细菌)进行文库淘选.淘选3轮后随机挑取数个噬菌斑,用T7 select 10-3b载体引物扩增插入片段,将不同长度的片段克隆入pMD 18-T载体后进行测序.把基因序列在GenBank数据库进行BLAST搜索比对,同时在ExPASy进行编码蛋白质的结构和性质的预测.经不同配体淘选,获得了16个基因片段,其中围食膜蛋白、蛋白质精氨酸N端转甲基酶、血小板反应素、RNA结合蛋白、核自身免疫精蛋白等基因,首次在中国明对虾中发现.; 刘宁杜欣军赵小凡王金星; 关键词：先天免疫病原相关分子模式中国明对虾

中国明对虾中甲壳肽基因的分子克隆与性质研究: 甲壳肽是十足类动物先天免疫中的一类效应分子。我们从中国明对虾中克隆得到了三条甲壳肽基因(Fc-crus1,Fc-crus 2和Fc-crus 3)。其中,甲壳肽Fc-crus 2和Fc-crus3的cDNA序列全长分别为...; 孙晨杜欣军徐文腾张洪伟赵小凡王金星; 关键词：中国明对虾抗菌活性先天免疫

中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达与性质分析被引量：15: 2008年; 溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子,参与机体多种免疫反应,在溶菌过程中形成一个水解体系,破坏和消除侵入体内的病原,从而实现机体的免疫防御。从中国明对虾中克隆得到了溶菌酶基因(称为FcLyz基因),该基因全长709bp,其完整的阅读框为477bp,编码158个氨基酸,前18个氨基酸(-1^-18)为信号肽,成熟肽由140个氨基酸组成(1-140aa),其分子量为16.2kD。经SMART分析,该基因具有1个溶菌酶1(LYZ1)结构域(19-130aa)。半定量RT-PCR分析结果表明溶菌酶虽在多种组织中有较低水平的组成性表达,但在细菌诱导的血细胞、心脏、肝胰腺和鳃等多种组织中表达上调。将中国明对虾溶菌酶基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),再进行诱导表达和亲和纯化,得到了纯化的重组溶菌酶,并进行了抑菌活性检测。结果表明,重组对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌的抑菌能力较强,最小抑菌浓度达到3.43μmol/L,但对革兰氏阴性菌抑制作用较小。上述结果表明,该溶菌酶作为一种重要的免疫效应分子,参与了对虾的免疫防御反应。; 卜兴江杜欣军周文杰赵小凡王金星; 关键词：中国明对虾溶菌酶先天免疫

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2004年; 分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB c小鼠 ,选择血清抗体滴度高的免疫小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 0骨髓瘤细胞进行细胞融合 .经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞 ,共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞 3株 ,分别命名为 9D5 ,10 0E2和10 0H6 .以ELISA法和Westernblotting法对 3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定 ,其中 9D5和10 0E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B ,而 10 0H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B .; 杨晓梅侯立静康翠洁邵红莲张新昌杜欣军王金星赵小凡; 关键词：棉铃虫组织蛋白酶B 单克隆抗体 WESTEM BLOTTING

中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆与表达研究: 从中国明对虾中成功克隆到抗脂多糖因子(ALF)的cDNA.该cDNA全长594 bp,编码由123个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白分子量为13694.02 Da,等电点pI为10.24,有25个氨基酸的信号肽.RT-PER研...; 周文杰王帅杜欣军王金星; 关键词：中国明对虾 CDNA克隆基因表达; 文献传递

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杜欣军