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慢病毒载体法制备转基因动物研究进展被引量：3: 2008年; 慢病毒能够感染分裂细胞和非分裂细胞,因而被发展成为重要的转基因载体,已成为制备转基因动物的一种工具,转基因效率明显提高。该文介绍了制备转基因动物的技术方法,比较了慢病毒载体制备转基因动物的特点和优势,介绍了慢病毒载体安全设计的发展,并将近年来国内外利用慢病毒载体法制备转基因动物的研究进行了概述。; 刘吉宏李峰郝子悦李碧春陈学进; 关键词：慢病毒转基因动物安全性

味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在小鼠雌性生殖系统的表达被引量：1: 2014年; 为了检测味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin基因在雌性生殖系统的表达,探讨2种G蛋白在雌性生殖机能中可能发挥的作用及其在生殖医学方面的潜在应用。用RT-PCR和超敏ABC免疫组化方法,检测Gγ13和α-gustducin在6周龄间情期小鼠卵巢、子宫、输卵管组织中的基因表达和蛋白分布。结果表明,在小鼠雌性生殖系统中均发现Gγ13和α-gustducin基因的转录子,免疫组化研究进一步证实了Gγ13和α-gustducin确实在小鼠卵巢颗粒黄体细胞、卵母细胞、子宫外膜、子宫内膜腺体、子宫肌层、输卵管浆膜和输卵管黏膜处存在阳性分布。本试验表明味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在雌性小鼠生殖系统中广泛分布,预示着雌性生殖系统也可能对味觉物质进行感知,为进一步研究味觉受体在雌性生理机能中可能发挥的调控功能奠定初步的研究基础,同时也为味觉的细胞生物学研究提供新方向。; 王雪蒋满喜马政文王美珊孔彭成唐澜陈学进李和平李峰; 关键词：卵巢子宫输卵管 G蛋白

利用Red同源重组系统构建兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因打靶载体被引量：1: 2008年; 利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道。实验首先在已经筛选到含有兔全长HPRT基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,通过Gap-Repair方式从此克隆上将一段47kb无启动子的HPRT基因组片段(不含有第1个外显子)克隆到pBACLinkSp质粒上,产生pBACLinkSp-rHPRT质粒。然后基于pBACLinkSp-rHPRT质粒,设计不同的同源臂,从而删除了HPRT基因的不同编码区,成功构建了三个不同的HPRT基因打靶载体。同时对利用同源重组技术敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。基于实验所构建的三个不同的兔HPRT基因打靶载体,为探索兔成纤维细胞和胚胎干细胞基因打靶的适宜条件,及进一步获得兔HPRT基因敲除动物疾病模型奠定了基础。; 张传山李峰姚刚郭毅鲍柳君陈学进; 关键词：RED重组基因敲除

利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除被引量：9: 2007年; 利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。; 薛可李峰罗光彬黄玮玮陈学进; 关键词：同源重组基因敲除

成体兔转基因成纤维细胞的克隆分离及其核移植研究被引量：3: 2009年; 哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培养板分离培养法获得来源于单个转基因成纤维细胞克隆.由于单个成纤维细胞克隆在新鲜DMEM培养液中生长比较困难或缓慢,采用由DMEM/F12制备的条件性培养液进行筛选.以转基因成纤维细胞为供体细胞进行核移植,囊胚率为23.5%,与来源于成体兔正常成纤维细胞相比较差异不显著.并且利用PCR或多重PCR方法鉴定筛选的转基因细胞克隆及其核移植胚胎中整合的NeoR基因和常染色体β-actinDNA.为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法,缩短了转基因动物的研制周期,降低生产成本,同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件.; 张传山郭毅谷瑞环李善刚李峰王伟丁雷邢凤英姚刚陈学进; 关键词：细胞分离多重PCR 核移植转基因检测

短时低频电刺激体外培养许旺细胞髓鞘的形成被引量：1: 2010年; 背景:周围神经系统损伤后,短时低频电刺激已被证明可显著促进轴突再生和选择性功能修复,但目前对电刺激是否影响周围神经髓鞘的形成还知之甚少,而电刺激发挥作用究竟是通过神经元还是许旺细胞还有待证实。目的:建立体外背根神经元与许旺细胞联合培养模型,观察短时低频电刺激对许旺细胞髓鞘形成的影响。方法:体外培养背根神经元,纯化后预先施予电刺激(20Hz,100μs,3V),持续作用1h,24h后再加入许旺细胞悬液制成背根神经元/许旺细胞联合培养模型。在此基础上,用L-ascorbicacid诱导髓鞘形成,分别于诱导后第7,14天观察培养体系中髓鞘的形成。结果与结论:电刺激增强背根神经元分泌脑源性神经营养因子(P<0.05),经电刺激作用的背根神经元再与许旺细胞联合培养,最终表现为髓鞘形成增多以及髓鞘蛋白表达上调(P<0.05)。提示短时低频电刺激对体外许旺细胞髓鞘的形成具有促进作用,初步认为该作用至少通过刺激神经元分泌脑源性神经营养因子增多导致。; 万丽丹丁文龙李峰夏蓉朱浩刘德明林雪群; 关键词：电刺激髓鞘许旺细胞

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李峰