李佳楣
- 作品数：11 被引量：39H指数：3
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据 BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体 pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF。结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合。结论构建的重组逆转录病毒表达载体 pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源。
- 李佳楣龙大宏冷水龙罗秀梅黄文燕宣爱国
- 关键词：脑源性神经营养因子逆转录病毒载体基因重组
- 建构主义教学理论在局部解剖学教学中的应用及反思被引量：2
- 2008年
- 李佳楣龙大宏洪乐鹏
- 关键词：建构主义局部解剖学教学思想
- 神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元和学习记忆能力的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:基底前脑是老年性痴呆患者脑皮质下神经元丢失最严重的区域,实验拟验证经神经干细胞移植治疗后老年痴呆鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化以及对其空间学习记忆能力方面的影响。方法:实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物:清洁级SD雄性大鼠28只,随机数字表法分为3组:正常对照组8只、模型对照组8只、细胞移植组12只。另取10只新生SD鼠用于神经干细胞的分离培养。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:模型对照组、细胞移植组大鼠切断左侧穹隆海马伞,建立老年性痴呆动物模型。利用无血清培养技术获得鼠基底前脑神经干细胞,吸取2.5×1010L-1细胞悬液4μL,术后即刻细胞移植组损伤侧行细胞移植,坐标为前囟+0.6mm,外侧+0.6mm插入,腹侧-5.5mm。③实验评估:移植后4周,采用Y型迷宫对各组动物进行学习记忆能力检测。麻醉后取脑制备组织切片,ABC法免疫组化染色结合图像分析观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化。结果:①对空间学习记忆能力的影响:细胞移植组空间学习能力、记忆能力均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),基本达到正常水平(P>0.05)。②对小白蛋白阳性神经元的影响:与正常对照组比较,模型对照组损伤侧内侧隔核和斜角带核的小白蛋白阳性神经元数目分别减少62.5%和30.4%;细胞移植组降低幅度明显小于模型对照组(P<0.01)。与正常对照组比较,模型对照组损伤侧内侧隔核、斜角带核小白蛋白阳性神经元的面积、周长、灰度均显著降低(P<0.05或0.01);细胞移植组上述指标较模型对照组均显著增加(P<0.05或0.01)。③相关性分析:小白蛋白阳性神经元数目与大鼠在Y型迷宫中的学习次数呈显著负相关(r=-0.76^-0.79,P<0.01),与记忆能力呈显著正相关(r=0.78~0.84,P<0.01)。结论:神经干细胞移植对老年性�
- 谷海刚龙大宏李晓滨张贵平苏涛李佳楣冷水龙
- 关键词：神经干细胞老年性痴呆
- 神经生长因子基因重组逆转录病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建神经生长因子(NGF)基因重组逆转录病毒表达载体,研究NGF在神经干细胞(NSC)中的表达情况。方法从大鼠海马组织提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得编码大鼠β-NGF的基因片段,应用基因重组技术,将大鼠β-NGF基因片段克隆到逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1中,通过脂质体Lipofectamine2000转染包装细胞PT67,经G418筛选后,收集阳性克隆病毒上清,用于感染神经干细胞(NSC),观察该NSC表达的NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果限制性内切酶酶切分析鉴定表明为正确重组子,β-NGF基因在NSC中获得表达,该NSC的培养上清液可以促进PC12细胞突起生长。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-NGF构建成功,β-NGF基因可在NSC中表达并具有生物学活性。
- 何峻峰龙大宏李佳楣冷水龙谷海刚宣爱国潘学兵
- 关键词：神经生长因子逆转录病毒载体神经干细胞基因重组阿尔茨海默病
- 穹窿海马伞损伤对大鼠学习记忆和海马GFAP阳性神经胶质细胞的影响被引量：18
- 2002年
- 为探讨穹隆海马伞损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞之间的关系 ,切断 SD成年大鼠左侧穹窿海马伞 ,用 Y迷宫和免疫组织化学结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的变化状况及它们的相互关系。结果显示 :损伤 2周后 ,损伤组损伤侧海马 CA1 区辐射层和齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的数密度较正常组分别增多 3 0 .2 9%和 3 0 .15 % (都为 P<0 .0 1) ,胞体面积分别增加 16.0 4%和 19.42 % (都为 P<0 .0 1) ,齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞体密度增大 19.40 % (P<0 .0 5 )。经相关分析 ,大鼠学习记忆能力与海马 CA1 区胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数密度呈负相关 (r=-0 .83 6,P<0 .0 1) ,与齿状回数密度呈负相关 (r=-0 .792 ,P<0 .0 1)。
- 龙大宏杨丹迪李佳楣许孟杰汪华侨
- 关键词：学习记忆胶质纤维酸性蛋白神经元损伤
- 5-IAF标记兔心肌肌钙蛋白C的荧光特性
- 2008年
- 背景:心肌肌钙蛋白在检测心肌梗死的诊断中有极其重要的临床意义。目的:将荧光标记物5-iodoaccetamidofluorescein(5-IAF)应用于心肌肌钙蛋白,观察其是否可用作与收缩调节蛋白之间相互作用的研究。设计、时间及地点:随机对照实验,于2002-01/2005-12在广州医学院人体解剖教研室完成。材料:成年兔,由广州医学院实验动物中心提供。方法:利用反转录-聚合酶链反应技术制备兔心肌肌钙蛋白C的基因片段,应用基因重组技术将兔心肌肌钙蛋白C基因片段克隆到pET表达载体,根据PCR定点诱变的方法,取得突变型的兔cTnC(C35S),分别将5-IAF和2-(4’-(iodoacetamido)anilino)naphthalene-6sulfonic acid(IAANS)标记在兔肌钙蛋白C(C35S),并进行恒态荧光测定和时间-分辨荧光测定。主要观察指标:兔cTnC(C35S)-IAF及cTnC(C35S)-IAANS的荧光特性。结果:5-IAF标记的兔肌钙蛋白C在波长491nm处进行激发,其发射峰值出现在波长520nm处,加入饱和的镁离子可导致荧光强度减少35%,继续用饱和的钙离子滴定,其荧光强度再减少35%,而且波峰向蓝光方向移动3nm。IAANS标记的cTnC(C35S)在加进镁离子和钙离子后引起的荧光反射的跃迁,并不出现在用5-IAF标记的cTnC上。然而,不管使用哪一种荧光标记物,钙引起cTnC的构象变化这个作用并没有改变。钙滴定实验表明,两种荧光标记物标记的荧光发射结合参数是一致的。结论:5-IAF标记可以应用于心肌肌钙蛋白与其他收缩调节蛋白之间相互作用的研究。
- 叶秉坤冷水龙李佳楣
- 正电子发射断层成像与计算机断层扫描的“异机二维”图像融合实验
- 2011年
- 目的:尝试一种基于体表定位的二维图像配准方法,实现"正电子发射断层成像"(PT)和"计算机断层扫描"(CT)异机图像的精确融合。方法:输入PT/CT原始数据后采用数字化格式转换,设计"9点3面"立体定位法进行配准,在实时工作站Mimics按照信息交互自动融合模式,通过讯号叠加技术完成图像融合结果:以肺癌患者的躯干冠状面为实例试验[PT+CT]二维图像的异机融合,生成了同时呈现躯干结构和代谢状况的互补影像,快捷而清晰。结论:图像融合具有明确放射诊断以及量化治疗方案的临床意义;在[PT+CT]联机设备尚未普及的情况下,异机融合是同机融合功用的技术补充。
- 彭鳒侨李新春罗秀梅李佳楣郭志华韩佩张善娟卢伟杰
- 关键词：电成像计算机断层扫描定位配准
- 穹窿海马伞损伤对成年鼠学习记忆和海马GFAP阳性细胞的影响被引量：1
- 2001年
- 目的:探讨穹窿海马伞(ＦＦ)损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维性蛋白(ＧＦＡＰ)阳性细胞之间的关系。方法:切断ＳＤ成年大鼠左侧ＦＦ,用Ｙ迷宫和免疫组化结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马ＧＦＡＰ阳性细胞的变化情况及相互关系。结果:损伤２周后,损伤组损伤侧海马ＣＡ１区辐射层和齿状回分子层ＧＦＡＰ阳性细胞数密度(Ｎｖ)较正常组分别增多３０．２９%和３０．１５%(均Ｐ＜０．０１),胞体面积分别增加１６．０４%和１９．４２%(均Ｐ＜０．０１),齿状回分子层体密度(ＶｃｖＢ)增大１９．４０%(Ｐ＜０．０５)。经相关分析,大鼠学习记忆能力与海马ＣＡ１区ＧＦＡＰ阳性细胞Ｎｖ呈负相关(ｒ＝－０．８３６,Ｐ＜０．０１),与齿状回Ｎｖ呈负相关(ｒ＝－０．７９２,Ｐ＜０．０１)。结论:海马星形胶质细胞可能参与学习记忆过程。
- 龙大宏杨丹迪李佳楣
- 关键词：学习记忆
- 侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究被引量：2
- 2006年
- 建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。
- 罗秀梅龙大宏潘学兵杨丹迪宣爱国李佳楣
- 关键词：老年性痴呆胆碱能神经元学习记忆
- 不同体外诱导培养条件下新生鼠基底前脑神经干细胞增殖和分化为神经元的能力被引量：3
- 2008年
- 目的：研究神经干细胞的增殖、迁移和分化可为揭示神经系统的发生、发育过程提供可靠依据。观察表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外刺激新生鼠基底前脑神经干细胞的增殖情况，及其各自诱导神经干细胞分化成神经元的能力。方法：实验于2005-12／2006—07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物：清洁级新生24h内的SD大鼠30只，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：新生鼠在无菌条件下取脑，分离出基底前脑，胰蛋白酶消化，离心过滤制备单细胞悬液，接种于含B27的DMEM／F12培养基培养瓶中，每瓶40-60万个细胞，加入终浓度均为10μg／L的表皮生长因子和碱性成纤维生长因子刺激生长，在体外进行神经干细胞的克隆培养，传代培养过程中加入终浓度为6mg／LBrdU用于标记神经球，设立3组，各自加入体积分数为0．1的小牛血清、终浓度均为10μg／L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子，对培养得到的神经干细胞进行诱导分化。③实验评估：免疫荧光染色检测神经干细胞巢蛋白抗原的表达，并用BrdU标记和免疫荧光证实其增殖能力。免疫荧光染色检测不同诱导条件下神经干细胞向神经元分化的能力。结果：①细胞形态观察：从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞，原代培养呈透亮的圆球形，2—3d后细胞数目明显减少，部分细胞开始分裂。1周左右培养瓶中出现许多由数十到数百个细胞组成的悬浮生长的细胞球，球中的细胞形态规则，边界清楚，折光性较强，胞浆颜色较深，核，浆比较大。该细胞具有连续增殖能力，可以传代培养。②巢蛋白抗原的表达：传代神经球中的细胞均呈巢蛋白抗原阳性。③BrdU标记检测：克隆球中的细胞均为BrdU阳性，表明克隆球是由不断分裂增殖的细胞组成。④诱导分化结果：在体
- 谷海刚龙大宏李晓滨张贵平罗媚李佳楣冷水龙
- 关键词：神经干细胞神经元基底前脑碱性成纤维生长因子
