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GPI修饰的ESAT-6核酸疫苗的构建及其免疫功能初探被引量：2: 2011年; 目的构建糖基化磷脂酰肌醇(GPI)修饰的结核杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)核酸疫苗,初步分析其免疫功能。方法利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi重组体,转染B16F10细胞,G418筛选阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光检测转染细胞的ESAT-6抗原表达情况;采集ESAT-6核酸疫苗免疫鼠血清,分别检测抗体滴度和CDC效应,免疫磁珠法分选CD4+和CD8+T细胞,CFSE/7-AAD细胞毒实验分析CTL细胞毒活性。结果测序正确的重组体pIRES-ESAT-6-gpi转染细胞后,ESAT-6表达于细胞膜表面。ESAT-6核酸疫苗免疫血清和CD8+T细胞分别通过CDC效应和细胞毒作用杀伤膜表达ESAT-6的B16F10细胞。结论构建的GPI修饰的ESAT-6核酸疫苗能够诱导免疫鼠产生体液和细胞免疫反应,杀伤膜表达ESAT-6的B16F10细胞,为进一步基于该法构建B16F10瘤苗的抗肿瘤免疫效应及机制研究奠定了基础。; 何向锋王净余方流赵枫姝张洪义陈峻崧陈登宇曹文虎窦骏; 关键词：B16F10 ESAT-6 GPI 核酸疫苗

B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗抑制小鼠黑色素瘤肺转移效应与机制初探: 研究背景:采用基因工程方法对肿瘤细胞进行改造,去除或减弱其致瘤性,保留及加强免疫原性,是瘤苗构建的常用方法。本课题组前期构建的膜表达异种抗原结核杆菌早期分泌靶抗原6KD(ESAT-6)和分泌表达IL-21的小鼠黑色素瘤B...; 何向锋谭清和王建红赵枫姝陈登宇曹文虎刘玉荣窦骏; 关键词：B16F10 ESAT-6 GPI IL-21

ZEB1-shRNA1对鼠黑色素瘤细胞EMT、增殖性、致瘤性的影响: 研究背景:上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)与上皮细胞恶性肿瘤的发生与发展有重要的关系,细胞出现EMT而获得迁移能力。EMT发生与多种因素有关,其中锌指增强子结合蛋...; 刘玉荣曹文虎赵枫姝刘云婧张洪义窦骏; 文献传递

上调miR-200c对鼠黑色素瘤细胞B16F10 CSC致瘤性及侵袭性、增殖性的影响: 研究背景:miR-200c是上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)-间质上皮转化(Mesenchymal-Epithelial Transition,MET)反馈调节环...; 曹文虎陈登宇赵枫姝刘玉荣陈峻崧窦骏; 关键词：MIR-200C

表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗的构建及其活性鉴定被引量：4: 2011年; 为构建膜表达糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的结核杆菌早期分泌靶抗原6 kD(ESAT-6)和分泌IL-21的B16F10瘤苗并鉴定其活性,利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒,以脂质体转染重组质粒到B16F10细胞,G418筛选出阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光、FCM和Western blot检测瘤苗细胞靶抗原表达,用瘤苗细胞培养上清刺激小鼠CD8+T细胞,检测瘤苗所分泌IL-21的生物学活性。结果表明,pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒DNA测序正确,B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗细胞目的基因ESAT-6表达于瘤苗细胞表面,增殖能力未受外源基因导入影响,分泌的IL-21具有生物学活性,为研究膜表达ESAT-6和分泌表达IL-21瘤苗的抗瘤效应奠定了基础。; 何向锋王净余方流赵枫姝张洪义曹文虎窦骏; 关键词：B16F10 IL-21 ESAT-6 GPI

米托蒽醌处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征及其诱导的抗肿瘤免疫反应初探被引量：1: 2012年; 背景与目的:蒽环类药物处理可使肿瘤细胞免疫原性增加。本文旨在分析米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征,初步探讨该瘤苗诱导的抗肿瘤免疫反应。方法:MIT处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗后,用吖啶橙/嗅化乙啶(AO/EB)染色法观察瘤苗细胞形态,流式细胞仪(FCM)检测其粒度及凋亡比例,荧光显微镜观察瘤苗凋亡后细胞膜表面结核杆菌早期分泌靶抗原6KD(ESAT-6)的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测瘤苗经MIT处理后IL-21的表达。瘤苗免疫小鼠后,FCM检测了补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)及细胞毒T细胞(cytotoxicT lymphocyte,CTL)活性。结果:经MIT处理后,瘤苗停止分裂,细胞逐渐增大,数日内可保持生物活力,并表达IL-21。瘤苗细胞凋亡后,ESAT-6成点簇状分布于胞膜表面。MIT处理的瘤苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫应答,免疫鼠血清和CD8+T细胞可分别通过CDC和CTL杀伤野生型B16F10细胞。结论:MIT处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗失去增殖能力,但仍能表达IL-21且具有免疫原性,能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫反应。; 何向锋施文赵枫姝谭清和王建红陈登宇曹文虎窦骏; 关键词：米托蒽醌 ESAT-6 GPI IL-21

靶向上皮性卵巢癌SKOV3细胞ZEB1-shRNA重组体构建及功能研究被引量：3: 2012年; 目的:利用RNA干扰技术,降低人上皮性卵巢癌SKOV3细胞中锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)基因的表达,观察ZEB1低表达对SKOV3细胞的生长影响。方法:用pSUPER-EGFP1载体构建针对人ZEB1基因的干扰质粒shZEB1,脂质体转染SKOV3细胞,G418筛选稳定转染细胞株,通过RT-PCR和Western blot检测ZEB1在SKOV3细胞中表达。用克隆形成、划痕试验、RT-PCR和致瘤试验分别检测转染细胞克隆能力、迁移力、miR-200c表达水平和在裸鼠的致瘤性。结果:成功构建shZEB1,稳定转染细胞株shZEB1-SKOV3内ZEB1表达下降,导致shZEB1-SKOV3细胞miR-200c表达增高,克隆能力、迁移力及致瘤性下降。结论:用RNA干扰技术可靶向降低卵巢癌细胞株SKOV3内ZEB1的表达,使其致瘤性降低,提示ZEB1可作为分子靶点用于上皮性卵巢癌靶向治疗。; 陈登宇陈峻崧王净曹文虎张洪义杨翠萍张云霞窦骏; 关键词：上皮性卵巢癌

利用巢式PCR扩增目的基因构建hsa-miR-200c真核表达载体及鉴定: 2012年; 目的用巢式PCR从人类基因组获取miR-200c及侧翼序列,构建hsa-miR-200c重组体,转染卵巢癌细胞系SKOV3,检测其对E-钙粘蛋白表达的影响,为miR-200c对肿瘤细胞基因表达调控奠定基础。方法据microRNA数据库设计人miR-200c及侧翼引物,提取人细胞基因组进行PCR和巢式PCR获得miR-200c及侧翼共307个碱基序列,连接到pIRES2-EGFP载体中,测序鉴定后再将的miR-200c基因经慢病毒载体系统转染SKOV3细胞,检测miR-200c过表达对卵巢癌细胞E-钙粘蛋白表达的影响。结果成功扩增出miR-200c及侧翼共307个碱基序列,构建的重组体pIRES2-EGFP-miR-200c测序正确,转染SKOV3细胞后miR-200c过表达引起E-钙粘蛋白表达增多。结论巢式PCR技术能有效地从基因组中扩取miR-200c及侧翼片段用以构建miR-200c表达载体,miR-200c过表达可引起卵巢癌SKOV3细胞E-钙粘蛋白表达增多,可能导致细胞间黏附性增高。; 陈登宇陈峻崧王净曹文虎张洪义杨翠萍窦骏; 关键词：巢式PCR MIR-200C SKOV3细胞

MicroRNA与肿瘤干细胞调控的研究现状: MicroRNA(miRNA)是一类大小为20~25nt左右的内源性非编码单链 RNA,具有调节基因表达活性的功能,其异常表达常与肿瘤等各种重大疾病的发生、发展密切相关。近年来,肿瘤干细胞(CSCs)的发现、确认和特性研...; 曹文虎窦骏; 关键词：MICRORNA 肿瘤干细胞癌基因抑癌基因上皮-间质转化; 文献传递

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曹文虎