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MNNG诱导的DNA损伤对人肺癌H1299细胞中FOXO1亚细胞定位的影响被引量：1: 2013年; 目的探讨甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对DNA造成损伤后,对人叉头蛋白转录因子(FOXO1)核质分布的影响。方法体外培养人肺腺癌细胞系H1299,经不同浓度MNNG处理细胞后,采用彗星电泳、细胞免疫荧光、Western blot等方法,对细胞DNA损伤程度、FOXO1核质定位情况及GADD45蛋白表达变化进行检测。结果 H1299细胞DNA损伤程度随MNNG处理浓度增加而显著增强,伴随DNA损伤程度的加深,FOXO1转录因子在核内的分布逐渐增加,且在细胞DNA发生损伤4h后GADD45表达升高。结论 MNNG能造成H1299细胞DNA损伤,并促进FOXO1转录因子的核转位,从而启动损伤修复过程。; 徐韬钧张洪开肖莎于爱鸣; 关键词：FOXO1 DNA损伤甲基硝基亚硝基胍人肺癌

肺癌中PI3K/AKT信号通路对Skp2调控机制的研究被引量：7: 2010年; 目的探讨肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT信号通路对S期激酶相关蛋白2(Skp2)的调控机制。方法体外培养4种类型肺癌细胞系H460、LK2、H446和A549,经LY294002处理细胞24 h后实时RT-PCR法检测Skp2基因表达变化;Western blot检测E2F1蛋白表达变化。结果实时RT-PCR显示LY294002作用后4种肺肿瘤细胞系中Skp2基因表达均下降;Western blot结果表明在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中E2F1蛋白表达降低,肺腺癌中E2F1蛋白未表达。结论肺癌中PI3K/AKT通路可在转录水平调节Skp2表达,在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中此种调节可能通过转录因子E2F1发挥作用,而肺腺癌中E2F1不参与此种调节。; 解智慧孙秀华柯丹张洪开于爱鸣; 关键词：肺肿瘤磷脂酰肌醇-3-激酶 S期激酶相关蛋白2

PI3K和MAPK信号通路通过FOXO1转录因子诱导A549细胞周期的阻滞和凋亡的研究被引量：8: 2012年; 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK信号通路通过FOXO1转录因子对细胞周期及凋亡的调节及其分子机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及2种抑制剂联合处理细胞之后,采用Westernblot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及其下游蛋白Bim、p27kip表达的变化;流式细胞术分析对细胞周期的影响;Annexin-FITC双染方法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示:与对照组相比,FOXO1的蛋白水平未见明显变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim、p27kip的表达相应增加。与对照组相比,LY294002和UO126均可促进A549细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡。LY294002和UO126联合作用较2种药物单独作用时,A549细胞凋亡明显增加。结论抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路可共同激活FOXO1转录因子的活性,协同促进细胞周期的阻滞,诱导细胞的凋亡。; 张洪开徐韬钧具英花于爱鸣; 关键词：FOXO1 磷脂酰肌醇-3-激酶丝裂原活化蛋白激酶

LY294002对LK2和H460肺肿瘤细胞系细胞增殖及SKP2和p27表达的影响被引量：1: 2010年; 目的:探讨PI3K抑制剂LY294002对肺肿瘤细胞增殖影响及其分子机制。方法:培养肺癌细胞系LK2和H460,LY294002阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;FCM分析细胞周期变化;实时RT-PCR、蛋白印迹法分别观察PI3K信号下游蛋白SKP2、p27mRNA及蛋白表达变化。结果:与对照组相比,处理组细胞生长速率受抑制,细胞周期阻滞于G1期。实时RT-PCR及蛋白印迹结果显示,LY294002处理后SKP2mRNA、蛋白表达水平均降低,2种细胞中基因降低量分别为42%和41%,蛋白降低量为65%和55%,p27mRNA表达水平增加了49%和36%,但蛋白表达水平不变。结论:肺肿瘤细胞LK2和H460中PI3K通路通过SKP2,但并不经由p27调节细胞周期,调控细胞增殖。; 解智慧孙秀华柯丹张洪开于爱鸣; 关键词：肺肿瘤细胞增殖

非小细胞肺癌中PI3K/Akt信号通路通过Cdh1调控Skp2表达的机制研究: 2011年; 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Cdc20同源蛋白1(Cdh1)参与磷脂酰肌醇三羟基激酶(PI3K)/Akt信号通路对S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达调控的机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549、LK2和H460,LY294002特异性阻断PI3K/Akt信号通路后,Western blot检测Skp2、Cdh1及p-Akt蛋白表达的变化,免疫荧光(IF)检测Cdh1在NSCLC中的定位变化。结果 LY294002处理后,与对照组相比3种细胞中Skp2蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低(P<0.01),Cdh1在3种细胞的核内表达均增多。结论 NSCLC中PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002使Skp2蛋白表达下调与Cdh1由细胞质向细胞核转位有关。; 孙秀华张洪开李玉于爱鸣; 关键词：肺肿瘤 S期激酶相关蛋白2

IGF-1在人非小细胞肺癌细胞增殖中的作用: 2010年; 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法 MTT比色法检测0.1,1,10,100 ng/ml IGF-1对非小细胞肺癌系腺癌A549、鳞癌LK2、大细胞肺癌H460细胞增殖的影响,流式细胞术(FCM)、Western blot分析IGF-1处理前后各肺癌细胞的细胞周期变化,S期激酶相关蛋白2(SKP2)和CDC20同源蛋白1(CDH1)的表达变化。结果在非小细胞肺癌系A549、LK2、H460中,不同浓度的IGF-1均显示有促进细胞增殖的作用(P<0.05),其中1 ng/ml IGF-1作用后细胞增殖率达到峰值;与DMSO组相比,处理组S期细胞增加(P<0.01),SKP2蛋白表达增加(P<0.05),但CDH1蛋白表达却无明显变化(P>0.05)。结论非小细胞肺癌细胞中IGF-1可能是通过SKP2蛋白表达的增强,负性调控p27作用,加速细胞周期的进程。; 孙秀华胡海洋张洪开解智慧于爱鸣; 关键词：胰岛素样生长因子1 肺癌 S期激酶相关蛋白2 细胞增殖

PI3K与ERK信号通路通过FOXO1调控A549细胞周期和凋亡的研究: 目的：　　肺癌是全球范围内因癌症死亡的首要原因,我国每年大约有60万人死于肺癌,其中非小细胞肺癌(non-smallcelllungcarcinoma,NSCLC)约占肺癌总数的80%～85%。肿瘤发生是涉及原癌基因...; 张洪开; 关键词：磷脂酰肌醇-3激酶 ERK信号通路

PI3K和MAPK信号通路对A549细胞FOXO1蛋白表达及其亚细胞定位的调节被引量：4: 2012年; 目的探讨非小细胞肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶MAPK/ERK信号通路对Forkhead转录因子(Fox蛋白家族)FOXO1活性的影响及分子机制。方法体外培养人非小细胞肺癌系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及两种抑制剂联合处理细胞之后,MTT比色法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及信号下游蛋白Bim表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在A549细胞中亚细胞的定位的变化。结果与对照组相比,LY294002和UO126都能明显地抑制A549细胞的增殖,且具有时间依赖性。Western blot结果显示,FOXO1的蛋白水平未见显著性变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim的表达相应增加。免疫荧光结果显示,FOXO1在A549细胞中的核转位增多。LY294002和UO126联合处理A549细胞时,较药物单独作用效果明显增加。结论 PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路能调节FOXO1磷酸化水平,且具有协同作用,抑制其转录活性。FOXO1通过激活Bim蛋白,促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖。; 张洪开具英花徐韬钧孙秀华于爱鸣; 关键词：FOXO1 PI3K MAPK

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张洪开

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