张德礼
- 作品数：27 被引量：49H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建
- 2010年
- 目的:利用Red系统构建肠出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突变株。方法:选取本实验室预测并经过实验验证的sRNA基因,根据NCBI上相应的序列,设计2对引物分别扩增该sRNA基因的上下游分别长464和455bp的同源臂,经PCR扩增,构建到相应的载体,最后以构建好的含上下游同源臂和卡那霉素抗性基因的长约2500bp的线性片段作为打靶片段,在Red重组系统的作用下与sRNA基因E40的上下游同源区域发生同组,从而把sRNA基因从基因组上置换下来,之后利用质粒pCP20将FRT位点间的卡那霉素抗性基因消除。结果与结论:构建了出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突变株,为进一步研究sRNA基因在出血性大肠杆菌O157:H7生长及致病过程中所起的功能奠定了良好的基础。
- 王刚王刚宋兰马延周围张德礼岳俊杰
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7SRNARED重组系统
- 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达
- 2011年
- 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。
- 孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼
- 关键词：克隆原核表达真核表达
- BCL-G的研究进展和意义被引量：1
- 2012年
- 细胞凋亡（Apoptosis）也称为＂程序性细胞死亡＂或＂细胞自杀＂,是由基因介导的一系列变化,是存在于所有哺乳动物细胞中的保守途径。细胞凋亡是调节生物体正常发育和生命活动的一种不可缺少的机制,该调节一旦失败,可能导致机体疾病、畸形甚至死亡。对免疫系统而言,细胞凋亡不仅是免疫系统发育过程中必不可少的一个环节,而且是免疫系统行使功能的一种方式。
- 蒋朋飞张德礼
- 关键词：程序性细胞死亡哺乳动物细胞细胞自杀基因介导正常发育
- 病毒编码miRNA与宿主免疫被引量：1
- 2014年
- MicroRNA（miRNA）是一类不编码的,长度为19～25nt的小RNA分子,通过与靶基因形成完全或者不完全互补的双链来抑制靶基因的翻译或者降解靶蛋白,也可通过调控促进蛋白表达.MiRNA首次于1993年由Ambros及其同事在模式生物线虫中发现[1],通过基因组研究,证实miRNA为一种具有发卡结构的小RNA,通过与其靶标转录本3‘UTR结合抑制靶标的转录后翻译[2].本来miRNA被认为只在线虫特异性存在,后来证实这些线虫miRNA在其他的多细胞生物比如人体内保守存在[3].
- 李登云张德礼
- 关键词：MIRNA宿主免疫RNA分子多细胞生物模式生物小RNA
- 猪CCL17基因的克隆与原核和真核表达被引量：1
- 2010年
- 【目的】克隆猪胸腺活化调节趋化因子CCL17基因,研究其在原核及真核系统中的表达。【方法】提取仔猪脾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增CCL17,并将其与已知序列的CCL17进行同源性比较;CCL17基因经测序验证后,将其分别克隆入表达载体pET-32a和pEGFP-C1,构建该基因的重组原核表达载体pET-CCL17和真核表达载体pEGFP-CCL17,分别进行双酶切和测序鉴定;前者在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至猪血管内皮细胞(SUVECs),通过绿色荧光标记和Western blot检测细胞中CCL17基因的表达水平。【结果】PCR扩增得到CCL17309bp的DNA片段;重组表达质粒pET-CCL17和pEGFP-CCL17经双酶切鉴定和测序分析证明,载体构建成功。pET-CCL17经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达CCL17融合蛋白,分子质量约32ku,与其理论分子质量基本相符;pEGFP-CCL17转染SUVECs,经Westernblot检测,证实导入的CCL17基因得到了表达。【结论】克隆了猪的CCL17基因,利用大肠杆菌成功表达了CCL17重组蛋白,真核重组质粒在SUVECs中也得到了表达。
- 李燕丽孙柏张亚杰张德礼
- 关键词：胸腺活化调节趋化因子分子克隆原核表达真核表达
- PLptn真核载体的构建 表达及其趋化活性测定被引量：2
- 2010年
- 柳超蒋朋飞曹金锁张德礼
- 关键词：趋化因子真核载体活性测定免疫反应
- 兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。
- 郭娟娟彭金美彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军
- 关键词：抗体
- 猪免疫抑制因子MNSFβ的克隆、表达与组织分布
- 2013年
- MNSFβ(Monoclonal nonspecific suppressor factorβ)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道。文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβcDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列。将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析。结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子。生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成。对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91%以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守。荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布。组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用。
- 王静娜蒋朋飞亢展展李登云华琳琳张洋张淑霞张德礼
- 关键词：真核表达
- 基于蛋白质相互作用网络挖掘物种内的功能相似蛋白质被引量：2
- 2011年
- 本文基于图论(graph theory)思想挖掘功能相似蛋白质。将蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPI)转化为图,使用1-hop方法把相互作用网络拆分为子图。应用最短路径法,依次把拆分得到的每一个子图与所有子图进行两两比对,寻找最优比对结果,挖掘物种内有相似功能的蛋白质。应用该方法对构建的人类蛋白质相互作用网络进行比对,共挖掘到1081对功能相似蛋白质。该方法的特点是数据量偏小、较可靠。计算结果中还出现了一些序列相似度较低、用序列比对的方法难以挖掘到的功能相似蛋白质。通过对结果的分析可以发现,趋同进化和同源有时很难区分。本实验的全部数据、程序和结果可在网站http://bina.biositemap.com上查询。
- 宋宝兴桑青王芬张德礼
- 关键词：同源蛋白质相互作用网络
- 一种猪新基因BCL-G<Sub>L</Sub>多克隆抗体的制备方法
- 本发明公开了一种猪新基因BCL-G<Sub>L</Sub>多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：A1：猪BCL-G<Sub>L</Sub>基因的克隆；A2：原核表达载体pET32a-BCL-G<Sub>L</Sub>的构建...
- 蒋朋飞张德礼
- 文献传递
