孙玉宁
- 作品数：33 被引量：121H指数：6
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金新世纪高等教育教学改革工程更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 犬转铁蛋白受体基因的沉默及稳定感染细胞系的建立
- 2016年
- 目的通过构建沉默犬转铁蛋白受体(TfR)基因慢病毒载体并感染Walter Reed犬(WRD)细胞,建立稳定感染沉默犬TfR基因的细胞系。方法构建2条针对犬TfR基因的特异性短发夹RNA(shRNA),用慢病毒载体转染HEK293T细胞,包装、收集病毒并测定其滴度。用包装好的慢病毒感染WRD细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot法检测TfR的mRNA和蛋白的表达水平以评价干扰效率,筛选沉默效果较好的靶点,并建立稳定沉默TfR基因的WRD/TfR-细胞系。结果成功构建出TfR小干涉RNA慢病毒载体,成功包装2种不同靶点的沉默TfR基因的RNA干扰慢病毒,测定其病毒滴度均达到1×108转导单位(TU)/m L。选用沉默效果较好的p GMLV-TfR A2载体,建立TfR小干涉RNA慢病毒载体稳定感染的WRD/TfR-细胞系。结论成功构建TfR小干涉RNA慢病毒载体并建立了稳定感染WRD/TfR-细胞系。
- 白鲁根李芳张薇闫琰朱燕妮孙玉宁
- 关键词：TFRRNA干扰慢病毒载体
- 迁移侵袭抑制蛋白MIIP基因K167E位点突变体的构建和表达
- 2014年
- 目的构建人迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)蛋白K167E突变体的原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP(K167E)并进行表达和纯化,为MIIP的后续功能研究提供有效工具。方法以pGEX-4T-1-MIIP重组质粒为模板,PCR扩增得到人MIIP基因(K167E)突变体的cDNA全长,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中诱导表达,纯化获得GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结果酶切鉴定和测序结果显示,pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体构建成功。经诱导表达及纯化后,成功获得的GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结论成功构建了pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体,并获得了GST-MIIP(K167E)融合蛋白。
- 高玉婧马晓东芦晓红姚青裴秀英杨怡李建宁张茜孙玉宁
- 关键词：融合蛋白
- 沉默信息调节因子1慢病毒表达载体的构建及其在视网膜神经节细胞中的表达
- 2016年
- 目的构建沉默信息调节因子1（sirtl）过表达慢病毒载体，观察其在体外培养的视网膜神经节细胞（RGC）中的表达。方法构建大鼠sirtl cDNA的过表达慢病毒载体，采用PCR鉴定其是否构建成功。同时将其与OenBank 上 sirtl cDNA标准序列进行对比分析。将鉴定后的慢病毒重组表达质粒pLV5 sirtl与包装质粒共转染293T细胞，制备携带siftl的慢病毒pLV5-sirtl。体外培养Sprague-Dawley大鼠的RGC，应用pLV5-sirtI感染细胞设为sirtl过表达慢病毒组，同时设未感染组和空载体感染组。采用荧光显微镜观察细胞感染效率，实时PCR和蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测sirtlmRNA和蛋白表达水平。结果PCR鉴定结果显示，在1680碱基对处有扩增条带，表达的DNA条带与sirtl目的片段大小一致。与GenBank上sirtlcDNA标准序列进行对比分析，测序结果显示其含有与设计相同的靶序列。荧光显微镜观察发现，空载体感染组和sirtl过表达慢病毒组均可看到绿色荧光，感染效率在90％以上。实时PCR检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtlmRNA表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtl蛋白表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建的大鼠sirtl过表达慢病毒载体能够在体外有效感染大鼠RGC，提高sirtl在RGC中的表达水平。
- 姚青张继荣杨怡张茜李建宁孙玉宁
- 关键词：酿酒酵母视网膜神经节细胞慢病毒感染细胞
- 犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。
- 闫琰张茜马婧李建宁张薇孙玉宁
- 关键词：多克隆抗体
- PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病合并视网膜病变的相关性研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨浆细胞膜糖蛋白(PC-1)基因K121Q多态性与2型糖尿病合并视网膜病变的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,对2型糖尿病合并视网膜病变(DR组,n=48)、2型糖尿病未合并视网膜病变(NDR组,n=56)进行PC-1基因K121Q多态性分型及研究,并与正常组(对照组组,n=56)对照分析。结果 DR组和NDR组KQ基因型频率、K等位基因频率均显著高于对照组组,差异有统计学意义(P<0.05);DR组和NDR组比较,KK型与KQ型基因型构成频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病相关,但其可能不是糖尿病视网膜病变发生的主要原因。
- 邹晓燕孙玉宁谢晓敏李仁达李玲刘惠莉史静侯庆宁牛旭东强丹
- 关键词：糖尿病视网膜病变
- 高温环境下运动对人体血清HPS70、IgA及IgG水平的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨高温环境下运动对人体生理生化指标的影响。方法对8名身体健康的大学生,在常温及高温条件下,进行跑台运动后测定受试者的体温、心率、血压及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、热休克蛋白70(HPS70)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)的含量变化。结果高温环境下运动可明显增加受试者的心率,血清SOD、MDA及HPS70的含量显著升高,血清IgA、IgG的含量无明显变化。结论高温环境下运动可引起机体生理生化指标的明显变化。
- 郝战军刘宏鹏李光华孙玉宁
- 关键词：高温环境热休克蛋白70
- Sirt-1和Hif-1α在慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中的表达及其意义被引量：11
- 2015年
- 目的:检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中沉默信息调节子(Sirt-1)和缺氧诱导因子1α(Hif-1α)的表达,探讨Sirt-1和Hif-1α的表达在COPD发生发展中的作用。方法:应用肺功能仪对COPD急性加重期组(n=20)、COPD稳定期组(n=22)和对照组(n=20)的研究对象进行肺功能指标测定,采用Real-time PCR和Western blotting法检测3组研究对象PBMCs中Sirt-1和Hif-1αmRNA和蛋白表达,并分析Sirt-1和Hif-1α表达水平与肺功能的关系。结果:与对照组比较,COPD急性加重期组、COPD稳定期组患者第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV1/FVC%)均降低(P<0.05);与COPD稳定期组比较,COPD急性加重期组患者FEV1%和FEV1/FVC%降低(P<0.05)。COPD急性加重期组、COPD稳定期组患者PBMCs中Sirt-1mRNA和蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05或P<0.01);与COPD稳定期组比较,COPD急性加重期患者PBMCs中Sirt-1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01);与对照组比较,COPD患者Hif-1αmRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),COPD急性加重期患者其表达水平升高更明显(P<0.01);与COPD稳定期组比较,COPD急性加重期组患者PBMSCs中Hif-1αmRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。Pearson直线相关法分析,Sirt-1mRNA(蛋白)表达水平与患者FEV1%(rmRNA=0.61,r蛋白=0.545)和FEV1/FVC%(rmRNA=0.513,r蛋白=0.491)呈正相关关系,Hif-1αmRNA(蛋白)表达水平与FEV1%(rmRNA=-0.812,r蛋白=-0.781)和FEV1/FVC%(rmRNA=-0.661,r蛋白=-0.674)呈负相关关系(P<0.05)。结论:COPD患者PBMCs中Sirt-1基因表达水平下降,Hif-1α基因表达水平上调,二者的表达变化可能与COPD的发生发展密切相关。
- 李芳关文霞任飞仝雪霞孙玉宁
- 关键词：缺氧诱导因子1慢性阻塞性肺疾病外周血单个核细胞
- 慢病毒介导的犬WRD细胞p53基因沉默及稳定感染细胞系的建立被引量：2
- 2014年
- 目的构建靶向犬p53基因慢病毒干扰载体,建立稳定沉默p53基因的WRD/p53-细胞系。方法设计并构建4条针对犬p53基因的特异性shRNA干扰质粒。将构建的慢病毒表达载体(p GMLV-p53)和包装质粒(packaging mix)组成的包装系统共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超滤浓缩,并测定滴度。包装好的慢病毒感染WRD细胞,Western blot和实时荧光定量PCR方法检测不同靶点RNA干扰载体对p53基因的干扰效果,确定有效靶点。针对有效靶点慢病毒颗粒以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染WRD细胞,puromycin抗生素筛选稳定感染细胞系WRD/p53-。结果结果显示p53 RNAi慢病毒载体构建成功,成功包装四种不同靶点的p53基因RNA干扰慢病毒,病毒滴度均达到1×109TU/ml。四种干扰载体慢病毒均具有较好的干扰效果,选用沉默效果最好的p GMLV-p53A1为最优靶点,成功建立p53 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系WRD/p53-。结论成功构建p53 RNAi慢病毒载体,并有效干扰WRD细胞中p53 mRNA和蛋白表达,同时成功筛选并建立p53RNAi慢病毒稳定感染WRD/p53-细胞系。
- 李芳闫琰张茜李建宁姚青高玉婧杨怡孙玉宁
- 关键词：P53慢病毒载体P53
- 三七总皂苷对糖尿病早期大鼠视网膜功能的保护作用被引量：10
- 2014年
- 目的观察三七总皂苷对糖尿病大鼠早期视网膜电图(ERG)及视网膜组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法采用链脲佐菌素(65 mg·kg-1)一次性腹腔注射SD大鼠建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、三七总皂苷组(35 mg·kg-1)及导升明组(167 mg·kg-1),另设正常对照组。灌胃给药,20周后测定ERG后应用免疫组织化学法、蛋白印迹和逆转录PCR法检测大鼠视网膜中GFAP蛋白及mRNA的表达。结果糖尿病大鼠视网膜ERG a波、b波和OPs振幅降低,a波潜伏期延长,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。三七总皂苷组大鼠视网膜ERG b波和OPs的振幅明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。同时,与正常组相比,糖尿病大鼠视网膜GFAP蛋白及mRNA的表达明显增加;与糖尿病模型组相比,三七总皂苷可降低糖尿病大鼠视网膜中GFAP蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。结论三七总皂苷能够保护糖尿病大鼠视网膜,这一作用可能是通过降低视网膜GFAP的表达来实现的。
- 姚青马晓东张茜杨怡李建宁高玉婧芦小红孙玉宁
- 关键词：糖尿病视网膜病变三七总皂苷胶质原纤维酸性蛋白
- 提高医学院校非医学类导师基础医学专业水平的探讨与思考被引量：4
- 2018年
- 目前,医学院校中非医学专业背景的教师占比很高,如何通过各种各样的方式,弥补医学专业知识的不足,同时充分利用自身的科研优势,从而促进教学研究工作和研究生培养质量的提高,是关系到基础医学教学质量和医学专业人才培养质量的重要因素,本文就相关问题进行了简要的分析和探讨。
- 张琳娜高媛媛孙玉宁韩怀钦柯亨宁周永伟李光华
- 关键词：医学院校硕士研究生导师
