姚文龙
- 作品数：43 被引量：69H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅青年科技人才基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同统计学指标评价体外循环心内直视术后患者早期认知功能障碍的比较被引量：1
- 2007年
- 目的 通过神经心理测验观察体外循环心内直视术前、术后患者认知功能的变化，比较不同统计学指标评价体外循环心内直视术后早期认知功能障碍的发生率，为临床应用提供参考。方法 择期体外循环心内直视术患者47例，ASAⅡ或Ⅲ级，年龄15～45岁。分别在术前第1天和术后第7天行神经心理测验。另选取健康志愿者40名，间隔7d行神经心理测验2次，作为对照，采用标准差指数（SDI）、可信改变指数（RCI）和改良可信改变指数（MRCI）评价各项测验中认知功能损害的发生率及总认知功能障碍的发生率。结果 采用SDI、RCI和MRCI判断的总认知功能障碍发生率分别为14．9％、8．5％、19．1％，差异有统计学意义（P〈0．05）。与SDI比较，视觉再生测验中RCI和MRCI评价的认知功能损害发生率降低，数字符号测验中MRCI评价的认知功能损害发生率升高（P〈0．05）；与MRCI比较，数字符号测验中SDI、RCI评价的认知功能损害发生率降低（P〈0．05）。结论 对体外循环心内直视术患者，MRCI是分析术后早期认知功能较合理的统计学指标。
- 李显华张传汉姚文龙陈林王建伟田玉科
- 关键词：统计学心肺转流术心脏外科手术神经心理学测验间期
- 局灶性脑缺血大鼠永生化神经前体细胞移植的可行性被引量：2
- 2006年
- 目的:观察局灶性脑缺血大鼠移植永生化神经前体细胞在脑内的存活情况,为进一步研究细胞移植及转基因治疗脑缺血提供有意义的数据及图像资料。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室进行。①选取健康雄性SD大鼠18只,随机数字表法分为假手术组、脑缺血对照组、细胞移植组,6只/组。②脑缺血对照组、细胞移植组采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血模型。假手术组仅分离血管,不进行脑缺血处理。③应用无血清Neurobasal培养基进行INPC培养,移植前加入BrdU,使终浓度为10μmol/L,标记3d,然后取出细胞爬片,无水甲醇固定10min,SP法检测BrdU标记细胞阳性率。④将BrdU标记3d的永生化神经前体细胞用胰蛋白酶消化,离心重悬后使细胞密度达到2×1010L-1,细胞移植组于大鼠脑缺血后3d取5μL永生化神经前体细胞移植到右侧纹状体缺血半暗带区,以前囟为零点,即A:-0.5mm,R:2.5mm,V:-4.5mm。脑缺血对照组仅注射等量磷酸盐缓冲液。⑤各组分别于缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1周对大鼠进行Longa神经功能评价(0～4分,分数越高表示神经功能损伤越严重),缺血后6h神经功能评分≥1分视为模型成功。⑥细胞移植后1周处死各组大鼠,取脑组织制作冰冻切片,通过免疫组织化学SP法检测BrdU的表达,观察移植的永生化神经前体细胞在脑内缺血半暗带区的存活情况。结果:18只大鼠均进入结果分析。①体外检测移植细胞BrdU标记阳性率:永生化神经前体细胞加入BrdU标记3d后,免疫组化检测阳性细胞胞核呈棕黄色,细胞阳性率达95%以上。②造模后不同时间点各组大鼠神经功能评价:缺血后6h,脑缺血对照组与细胞移植组每只大鼠神经功能Longa评分均≥1分,表明造模成功,且Longa评分均明显高于假手术组[(1.70±0.48)分,(1.60±0.52)分,0分,P<0.05]。缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1�
- 姚文龙张传汉钱巍祝畅桂伶俐刘志恒
- 关键词：干细胞脑缺血
- 永生化小鼠小胶质细胞P_2X_4siRNA靶点的筛选被引量：5
- 2008年
- 目的筛选永生化小鼠小胶质细胞特异性P2X4siRNA。方法转染FAM-siRNA16h后,激光扫描共聚焦显微镜检测永生化小鼠小胶质细胞转染效率;将3条特异性siRNA经lipofectamine2000介导转染永生化小鼠小胶质细胞;72h后半定量RT-PCR观察干扰前后P2X4基因mRNA水平表达,比较对应不同位点的三对siRNA片段对P2X4基因的干扰效果,分析RNA干扰的特异性,从中筛选出特异性最高的一条siRNA;转染该序列72h后Western blot检测P2X4基因蛋白表达。结果激光扫描共聚焦显微镜显示转染效率达80%;三对siRNA片段中siRNA-F1的沉默效率最高,最大干扰效率达72.2%;Western blot显示转染siRNA-F1后P2X4基因蛋白表达下调。结论siRNA-F1可有效下调永生化小鼠小胶质细胞中P2X4基因mRNA表达水平,并且能明显下调P2X4蛋白表达。
- 彭伟张咸伟田学愎邓乾姚文龙曹菲田玉科
- 关键词：小胶质细胞RNA干扰
- 突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定
- 2013年
- 背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变。经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。
- 李立石小云张登文张传汉姚文龙
- 关键词：CDH1定点突变聚合酶联反应真核表达质粒神经损伤修复
- 转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株的构建被引量：2
- 2006年
- 目的掏建转IΚBα突变型基因水生化神经前体细胞抹(INPCs)。方法限制性内切酶双酶切含IΚBα突变型基因的质粒pBluescript/CNP/IΚBαM,得到目的基因片断IΚBα突变型基因,克隆入真核表达载体pcDNA3．1中,酶切反应及DNA测序鉴定莆组载体pcDNA3．1/IΚBαM。利用脂质体介导的基因转染技术分别将载体pcDNA3．1及pcDNA3．1/IΚBαM转染INPCs．经G418(150μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养．2周后用RT-PCR和Western blot检测阳性细胞株中IΚBα的表达,用受NF-ΚB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测阳性细胞株中NF-κB的活性。结果经限制性酶切分析及DNA测序证实重组载体pcDNA3．1/IκBαM中含有IκBα突变型基因．转pcDNA3．1/IκBαM永生化神经前体细胞中IκBα的总mRNA表达增高,Western blot可检测到突变型IκBα蛋白的表达,且细胞中NF-κB活性下降。结论成功构建了,转IκBα突变型基因INPCs。
- 刘志恒祝畅桂伶俐姚文龙张传汉
- 关键词：神经元基因表达
- GFAP特异性启动IκBα突变型基因真核表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体。方法用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和GFAP特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBluescript-SK中,酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM。用脂质体法分别将载体SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM转入永生化星形胶质细胞株和PC12细胞株中,经潮霉素(150μg/mL)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养,Westernblot检测阳性细胞株中IκBα的表达,以NF-κB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测细胞中NF-κB的活性。结果限制性酶切分析证实重组载体成功,稳定转染SK-hyg和SK-hyg-GFAP/IκBαM的PC12细胞内IκBα蛋白质表达及细胞中NF-κB活性无差异,稳定转染SK-hyg-GFAP/IκBαM的永生化星形胶质细胞内有突变型IκBα的蛋白质表达,而转染SK-hyg的永生化星形胶质细胞内则没有,且前者细胞内NF-κB活性下降。结论GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体构建成功。
- 祝畅刘志恒张传汉姚文龙桂伶俐
- 关键词：启动子胶原纤维酸性蛋白IKBΑ
- 原代缺氧缺糖损伤神经元模型Cdh1及其下游底物的表达被引量：1
- 2015年
- 背景:课题组前期实验已证实Cdh1在大鼠海马、皮质均有大量表达,且体外实验发现神经元中Cdh1表达高于神经干细胞,可能与神经干细胞向神经元分化有关。但细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1在缺血性神经元损伤中的作用,尚不明确。目的:体外构建原代缺氧缺糖损伤神经元模型,观察Cdh1及其下游底物表达变化。方法:取出生24 h内乳鼠大脑皮质,体外培养原代神经元并通过免疫荧光染色进行鉴定。使用无糖Earle’s液替代细胞培养液,利用三气培养箱充以氮气建立原代神经元缺氧缺糖模型,缺氧处理1 h后复氧。于缺氧前、缺氧缺糖损伤后6 h、1 d,3 d,7 d采用实时荧光定量PCR检测神经元Cdh1及其下游底物Skp2、Cyclin B1的表达。结果与结论:体外缺氧缺糖损伤后,原代神经元Cdh1及其下游底物Cyclin B1表达上调(P<0.05),Skp2表达均下调(P<0.05)。提示,体外缺氧缺糖损伤后神经元Cdh1表达升高,可能通过泛素化降解Skp2参与缺氧性神经元凋亡等病理过程。
- 钱巍邱瑾祁月红姚文龙张雪张传汉
- 关键词：CDH1缺氧缺糖SKP2
- 瑞马唑仑复合丙泊酚在无痛内镜逆行胰胆管造影术中的应用
- 2023年
- 目的:观察与比较瑞马唑仑、丙泊酚单用及合用在经内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)麻醉中的效果及安全性。方法:择期行ERCP治疗的120例患者按随机数字表分为丙泊酚组(P组)、瑞马唑仑组(R组)、瑞马唑仑联合丙泊酚组(RP组),每组各40例,3组按指定的用药方案(P组用丙泊酚;R组用瑞马唑仑;RP组瑞马唑仑联合丙泊酚)完成麻醉。比较3组患者的一般资料、手术时间和苏醒时间及麻醉前(T_(0))、麻醉后(T_(1)),置镜时(T_(2))、十二指肠乳头切开(T_(3))、支架或鼻胆管置入(T_(4))的血氧饱和度(SpO_(2))、心率(HR)、平均动脉压(MAP)、呼吸频率(RR)、脑电双频指数(BIS),Ramsay镇静评分;记录与比较术中加药总次数,体动、肠蠕动过快人次数;呼吸、心血管相关不良事件和麻醉相关的术后并发症。结果:3组患者一般资料、手术时间、苏醒时间,Ramsay镇静评分,手术医师、患者满意度及麻醉相关的术后并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05);与P组比较,R组和RP组注射痛、低血压、心动过缓和呼吸抑制、胆心反射发生率低;麻醉后RR及BIS值高,差异有统计学意义(P<0.05)。与R组比较,P组和RP组加药总次数、体动和肠蠕动过快人次数少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:瑞马唑仑联合丙泊酚用于ERCP麻醉效果可,过程平稳,不良反应少,值得在临床推广应用。
- 郑红波姚文龙罗爱林周碧云
- 关键词：经内镜逆行胰胆管造影术丙泊酚
- 氧糖剥夺对体外培养大鼠星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨氧糖剥夺对星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及其机制。方法①体外纯化培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,随机分为对照组、氧糖剥夺1h复氧组、氧糖剥夺6h复氧组,Western blot检测Cdh1及Skp2蛋白的表达变化;②将体外纯化培养的星形胶质细胞随机分为对照组、氧糖剥夺6h组、单纯缺氧6h组,Western blot检测Cdh1蛋白的表达变化,血糖仪检测培养液中葡萄糖含量的变化。结果①与对照组相比,氧糖剥夺1h复氧组、氧糖剥夺6h复氧组Cdh1蛋白表达均下降,Skp2蛋白表达均增加(P<0.05),氧糖剥夺1h复氧组与氧糖剥夺6h复氧组组间Cdh1、Skp2蛋白表达差异无统计学意义;②与对照组相比,氧糖剥夺6h组Cdh1蛋白表达明显下降,单纯缺氧6h组没有明显变化,氧糖剥夺6h组与单纯缺氧6h组组间差异有统计学意义(P<0.05);③单纯缺氧6h组细胞外液葡萄糖摄取率低于对照组(即常氧组)[(21.43±6.74)%vs.(26.98±9.21)%,P<0.05]。结论氧糖剥夺后星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达减少,其变化与细胞外液中缺少葡萄糖有关。
- 邱瑾姚文龙张玥邹姮婧燕琳张传汉
- 关键词：氧糖剥夺星形胶质细胞
- Cdh1-APC在中枢神经系统中的作用
- 2006年
- 姚文龙柳璐张传汉
- 关键词：中枢神经系统APC细胞周期调控诺贝尔奖获得者生物学效应
