夏俊刚
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 一种采用基因工程菌发酵产酶制备利巴韦林的方法
- 一种采用基因工程菌发酵产酶制备利巴韦林的方法，首先利用分子生物学技术构建高效表达具有高酶活力的低分子量三聚体嘌呤核苷磷酸化酶的基因工程菌<I>E.coli</I>XL-Blue（pPNP<Sub>816</Sub>），然...
- 陈宁谢希贤夏俊刚徐庆阳刘淑云
- 文献传递
- 一种微生物产酶发酵酶法生产抗病毒药物利巴韦林的工艺
- 一种利用基因工程菌产酶发酵，微生物酶法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺。构建高效表达冷适应嘌呤核苷磷酸化酶的基因工程菌DH5α(pQF-XmPNP)，优化冷适应酶表达条件，采用该工程菌，以葡萄糖、酵母膏、豆浓、玉米浆、磷...
- 陈宁夏俊刚谢希贤徐庆阳刘淑云
- 文献传递
- 鸟苷的生产研究进展
- 鸟苷在食品、医药、化工等领域有着广泛的应用。本文列举了鸟苷的主要应用、检测方法及生产方法，重点介绍了工业生产上占主导地位的发酵法生产鸟苷的菌种选育与发酵工艺的最新研究进展。本文为工业生产鸟苷提供了一定理论的依据。
- 何逵夫夏俊刚谢希贤徐庆阳
- 关键词：鸟苷发酵工艺菌种选育
- 微生物酶法生产利巴韦林研究进展被引量：1
- 2011年
- 本文介绍了利巴韦林理化性质、应用和主要生产方法,重点介绍了最具工业化发展潜力的微生物酶法生产原理及最新研究进展。
- 夏俊刚王光路谢希贤徐庆阳陈宁
- 关键词：利巴韦林
- 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质研究及在利巴韦林酶法合成中的应用被引量：5
- 2010年
- 利用PCR技术从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出其编码嘌呤核苷磷酸化酶的两种基因deoD和punA,构建工程菌并采用金属螯合层析纯化PNP702和PNP816,酶学性质研究表明：二者具有一致的最适反应温度（60℃）和最适反应pH值（7~8）,PNP816磷酸解肌苷的催化效率（kcat/Km）比PNP702高出11.12倍。底物特异性试验表明：PNP702为高分子量的六聚体,而PNP816为低分子量的三聚体。分别以纯化酶和工程菌菌体为酶源,以肌苷或鸟苷为核糖基供体,TCA（1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺）为底物,酶法合成核苷类抗病毒药物利巴韦林,PNP816和工程菌XL-B lue（pPNP816）较PNP702和工程菌XL-Blue（pPNP702）具有更高的催化速度和底物转化率,表明来源于微生物的低分子量的三聚体PNP在核苷类药物和中间体微生物酶法合成中具有更高的应用价值。
- 夏俊刚何逵夫谢希贤徐庆阳陈宁
- 关键词：枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质利巴韦林
- 冷适应嘌呤核苷磷酸化酶温敏型高效表达载体的构建及在大肠杆菌中的热诱导表达
- 目的：构建冷适应嘌呤核苷磷酸化酶(XmPNP)重组蛋白温敏型高效表达载体,热诱导XmPNP在大肠杆菌中表达。方法：经PCR从重组子pXMH上克隆XmPNP编码基因deoD,构建XmPNP重组蛋白温敏型高效表达工程菌,热诱...
- 夏俊刚何逵夫谢希贤徐庆阳
- 关键词：抗病毒药物嘌呤核苷磷酸化酶大肠杆菌
- 假交替单胞菌XM2107嘌呤核苷磷酸化酶基因克隆表达、重组蛋白纯化及酶学性质被引量：4
- 2010年
- 【目的】嘌呤核苷磷酸化酶(PNP,EC.2.4.2.1)在酶法合成核苷类药物及中间体中具有广泛应用。本文研究的目标是,获得极地嗜冷菌假交替单胞菌Pseudoa lteromonas sp.XM2107嘌呤核苷磷酸化酶编码基因,并对该酶酶学性质进行研究,以考察该酶在核苷类中间体及药物合成中的潜在应用价值。【方法】利用同源序列PCR技术从Pseudoa lteromonas sp.XM2107基因组DNA中扩增出其编码嘌呤核苷磷酸化酶基因,测序获得编码序列。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达以及金属螯合层析纯化,对其酶学性质进行初步研究。【结果】经过测序获得了该酶编码基因序列,全长702 bp,共编码233个氨基酸,大小为25 kDa,Genbank登录号为GQ475485。酶学性质研究发现,该重组酶最适反应温度为50℃,最适酶促反应pH为7.6(25 mmol/L磷酸盐缓冲液),最适酶促反应底物为肌苷(Km值0.389 mmol/L,37℃),且对底物腺苷和鸟苷也有磷酸解活性,在普通温度下具有较高催化活性和较好热稳定性。【结论】来源于Pseudoa lteromonas sp.XM2107的嘌呤核苷磷酸化酶在普通温度条件下具有较高的催化活性及良好热稳定性性质,在核苷类中间体和药物合成中具有较广泛的应用价值。
- 王光路夏俊刚谢希贤徐庆阳陈宁
- 关键词：假交替单胞菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质
