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吴玉娟

作品数：12 被引量：48H指数：5
供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
发文基金：江苏省教育厅自然科学基金江苏省卫生厅医学科技发展基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

合作作者

文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 3篇生物学
  • 2篇农业科学
  • 1篇轻工技术与工...
  • 1篇环境科学与工...

主题

  • 5篇蛋白
  • 4篇荧光
  • 4篇基因
  • 3篇农药
  • 3篇细胞
  • 3篇小球藻
  • 3篇活性
  • 3篇分离纯化
  • 3篇DDT
  • 3篇纯化
  • 2篇荧光蛋白
  • 2篇荧光素
  • 2篇荧光素酶
  • 2篇受体
  • 2篇糖蛋白
  • 2篇转基因
  • 2篇转基因细胞
  • 2篇污染
  • 2篇污染物
  • 2篇绿色荧光

机构

  • 12篇扬州大学
  • 4篇江南大学

作者

  • 12篇吴玉娟
  • 10篇李湘鸣
  • 5篇祝娉婷
  • 5篇陈秀云
  • 5篇魏文志
  • 4篇夏文水
  • 4篇陈春波
  • 3篇罗方妮
  • 2篇卜仕金
  • 2篇李碧春
  • 2篇李华玲
  • 1篇陈国宏
  • 1篇卜平
  • 1篇张唯立

传媒

  • 2篇环境与健康杂...
  • 1篇上海水产大学...
  • 1篇食品科学
  • 1篇中国中药杂志
  • 1篇中国环境科学
  • 1篇浙江大学学报...
  • 1篇食品与机械
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇环境与职业医...
  • 1篇扬州大学学报...
  • 1篇毒理学杂志

年份

  • 7篇2007
  • 5篇2006
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达被引量：1
2006年
采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系,可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pM P 206/ERE启动子CYC 1的下游,用GFP取代L ac Z基因,并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC 1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因(hER cDNA)和GFP基因特异条带,说明hER cDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒,表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后,与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比,以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁,也不需要底物,可在96孔板中完成,这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。
李湘鸣罗方妮陈春波张唯立吴玉娟祝娉婷
关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组绿色荧光蛋白
转虫荧光素酶基因细胞在亲电性化学污染物监测中的应用研究被引量：2
2007年
目的用亲电性反应元件(EPRE)调控的转虫荧光素酶基因细胞快速评价环境的污染程度。方法采用分子生物学的方法,将EPRE与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)的基因相融合,构建成EPRE调控的LUC稳定表达载体,将其转染于HeLa细胞,经G418筛选出稳定的细胞株。该细胞经不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)、氯化镉(CdCl2)、氯化汞(HgCl2)和顺丁烯乙酸二乙酯(DEM)作用后,用荧光素酶试剂盒物测LUC的表达量。结果DNA测序显示,EPRE调控的LUC稳定表达载体结构框架正确;LUC的表达量与受试物具有一定的剂量-效应关系,其中DEM的剂量-效应关系最明显。结论EPRE调控的转LUC基因细胞构建成功。
李湘鸣罗方妮陈春波陈秀云吴玉娟李华玲
关键词：环境污染物虫荧光素酶转基因细胞
用于筛选化学预防剂的报告载体的构建被引量：1
2007年
构建以TK为基本启动子,其上游由抗氧化反应元件(ARE)调控的报告载体pARE-TK-GFP以期用于化学预防剂的筛选.应用重组PCR技术,分别经3次PCR获得重组TK启动子并克隆入pMD18-T载体中,经酶切和测序鉴定正确后连入pEGFP中构建载体pTK-GFP.人工合成的ARE插入TK基本启动子上游,成功构建报告载体pARE-TK-GFP.脂质体转染HepG2细胞并在荧光显微镜下观察有绿色荧光.该载体的成功构建可为各种天然或人工合成的化学预防剂的筛选奠定基础.
魏文志吴玉娟李湘鸣李碧春夏文水
关键词：重组PCR
DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应被引量：5
2006年
[目的]研究DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应。[方法]用重组人雌激素受体（hER）基因酵母细胞（W303—1A／hER—ERE—LacZ）评价DDT农药同分异构体和同系物的雌激素活性。将终浓度为10^-4-10^-15的17β-雌二醇、终浓度为10^-3-10^-9的p，p＇-DDT、o，p＇-DDT和p，p＇-DDD、p，p＇-DDE加入酵母细胞培养液，作用4h，通过定量测定β-半乳糖苷酶的活性表示DDT农药的雌激素作用强度。[结果]o，p-DDT和p，p＇-DDD能像配体一样与hER结合，发挥雌激素效应，并且具有剂量效应关系，回归方程分别为^y=1．4553x^2＋47．366x＋333．31和^y=-0．1658x^3．6506x^2—23．176x-25．809。同分异构体间比较，o，p＇-DDT相对雌激素活性较强，EC50为2．04×10^-7mol／L，而p，p-DDT的EC50为3．71×10^-4mol／L，两者雌激素作用呈协同效应，联合效应相加指数（AI）=0.74（〉0）；同系物间比较，P，P＇-DDD雌激素活性明显较强，EC50为2．78×10^-7mol／L，而p，p＇-DDE的EC50为5．88×10^-5mol／L，两种同系物的雌激素作用呈拮抗效应．AI=-1．13（〈0）。[结论]o，p-DDT和p，p＇-DDD是经雌激素受体（ER）介导的环境雌激素，o，p-DDT与p，p＇-LDDT同分异构体间雌激素活性具有协同效应，p，p-DDD和p，p-DDE同系物间雌激素活性呈拮抗效应。
陈秀云陈春波祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金
用于化学预防剂筛选的转基因细胞模型的建立
2007年
建立TK启动子以及抗氧化反应元件(ARE)增强子调控报告基因GFP在HepG2细胞中稳定表达的细胞模型。人工合成ARE增强子序列,经退火和磷酸化后插入pTK-GFP载体的TK启动子上游,构建pARE-TK-GFP重组质粒。PCR法扩增TK和ARE-TK目的片段克隆到pEGFP-N1上,构建TK启动子启动以及上游由ARE增强子调控的报告基因表达载体pTK-GFP/Neo和pARE-TK-GFP/Neo。脂质体转染法转染人HepG2肝癌细胞后加G418筛选出阳性克隆。经扩大培养的克隆细胞中加入化学预防剂PDTC和香菇多糖作用48h后检测细胞中GFP荧光强度,结果显示pARE-TK-GFP/Neo表达载体中的GFP基因受ARE增强子的调控,其表达水平高于对照载体且在一定范围内与化学预防剂的浓度呈剂量效应关系,从而表明所构建的细胞模型可用于各种天然或人工合成的化学预防剂的初步筛选。
吴玉娟魏文志李湘鸣李碧春陈国宏
关键词：GFP
小球藻糖蛋白的分离纯化与抗氧化活性评价被引量：21
2006年
小球藻经热水抽提、脱蛋白、醇析得粗糖蛋白,再经葡聚糖凝胶层析得到两种糖蛋白组分(CGPⅠ和CGPⅡ),经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,证明为电泳纯物质,分子量分别为63.7,21.0kDa。利用α-脱氧核糖法、连苯三酚自氧化法进行抗氧化实验,结果显示:CGPⅠ和CGPⅡ均有一定抗氧化能力,且CGPⅡ高于CGPⅠ。
魏文志夏文水吴玉娟
关键词：小球藻糖蛋白分离纯化抗氧化活性
小球藻糖蛋白的分离纯化与性质测定被引量：8
2006年
小球藻经热水抽提、脱蛋白、乙醇沉淀得粗糖蛋白,粗糖蛋白经Sephadex-75层析得到糖蛋白纯品。糖蛋白纯品经Sephadex-200层析证明为单一物质。紫外可见光谱只出现280nm和195nm的单峰。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示糖蛋白分子量为63.7kDa。气相色谱分析表明该糖蛋白单糖组成主要是葡萄糖、半乳糖、鼠李糖。β-消去反应证明糖和蛋白是O-糖肽键连接的。
魏文志夏文水李湘鸣吴玉娟
关键词：小球藻糖蛋白分离纯化
DDT类农药的拟雌激素活性研究被引量：5
2007年
目的研究DDT类农药(p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE)的拟雌激素活性。方法用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W303-1A-hER-ERE-LacZ)评价DDT类农药的拟雌激素活性。将终浓度为10-9～10-15mol/L的17β-雌二醇、终浓度为10-3～10-9mol/L的p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE加入酵母细胞培养液,作用4h,通过定量测定β-半乳糖苷酶的活力表达DDT类农药的雌激素作用强度。结果DDT类农药能像配体一样与hER结合,发挥雌激素效应,并具有剂量-效应关系;o,p′-DDT雌激素活性较强,EC50为5.30×10-7mol/L,p,p′-DDE雌激素活性较弱,EC50为9.28×10-5mol/L,同分异构体间(o,p′-DDT、p,p′-DDT)雌激素活性具有协同效应,联合效应相加指数(AI)为1.5;同系物间(p,p′-DDD、p,p′-DDE)雌激素活性具有拮抗效应,AI=-1.38;4种DDT类农药联合雌激素效应呈协同作用,回归方程为y^=2.6006x2-28.079x-21.757,EC50为2.57×10-8mol/L,AI=0.83。结论DDT类农药是经雌激素受体(ER)介导的环境雌激素,p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE联合效应拟雌激素活性呈协同激活作用。
陈秀云祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金
关键词：农药酵母细胞
小球藻蛋白质的分离、纯化及抗氧化特性被引量：8
2007年
从小球藻中提取蛋白质,并研究了小球藻蛋白质抗氧化特性。通过反复冻融、细胞破碎、离心、盐析和凝胶层析,从小球藻中得到两种蛋白质(ProⅠ和ProⅡ),获得率分别为0.280%和0.664%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单条带,分子量分别为20.2 ku和20.4 ku。紫外可见光谱显示,ProⅠ在280 nm有一特征吸收峰,ProⅡ在280 nm和675 nm处各有一特征吸收峰。体外设计清除超氧阴离子自由基(O2?.)和羟自由基(.OH)实验,结果显示两种蛋白质能清除超氧阴离子自由基,黑暗条件下能清除羟自由基,但光照条件下生成羟自由基。
魏文志夏文水吴玉娟
关键词：小球藻蛋白质分离纯化抗氧化活性
基因重组细胞监测重金属污染物的实验研究被引量：1
2007年
研究用基因重组细胞快速评价重金属污染物对健康的危害,采用分子生物学方法,将亲电性化学反应元件(EPRE)与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)基因相融合,构建成EPRE调控的LUC报告载体,将其转染于HeLa细胞.并将该细胞作用于不同浓度的NaAsO2、CdCl2和HgCl2,用荧光素酶试剂盒物测量LUC的表达量.结果表明,EPRE调控的LUC报告载体框架正确;LUC的表达量与3种受试物具有明显的剂量效应关系,细胞对3种受试物敏感性为As3+>Cd2+>Hg2+.
李湘鸣罗方妮陈春波吴玉娟李华玲
关键词：重金属污染物虫荧光素酶
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