刘雅
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- NEDD4-l对前列腺癌PC3细胞TrkA泛素化的影响
- 2014年
- 目的检测前列腺癌PC3细胞中泛素连接酶NEDD4-l(neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1,NEDD4-1)对酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)泛素化作用的研究,探讨NEDD4-l调节前列腺癌PC3细胞侵袭及迁移的机制。方法采用脂质体瞬时转染法将NEDD4-l质粒转染入前列腺癌PC3细胞中,应用蛋白免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合免疫印迹(immunoblotting,IB)法,观察外源的NEDD4-l和TrkA的相互作用;共表达NEDD4-l和ubiquitin,用Co-IP结合IB法检测NEDD4-1对TrkA的泛素化作用;共表达NEDD4-l和ubiquitin的同时,用蛋白酶体抑制剂MG132处理,观察TrkA水平的改变。结果转染NEDD4-1质粒后,外源性表达的NEDD4-l可与TrkA共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin后,NEDD4-1对内源的TrkA有泛素化作用,TrkA能与泛素共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin,用蛋白酶体抑制剂MGl32处理后,TrkA的泛素化降解被抑制。结论在前列腺癌PC3细胞中,TrkA是NEDD4-1的底物之一;NEDD4-1可调节TrkA的泛素化作用,促进其在蛋白酶体降解。
- 汪治宇李幸郭晓金邢联萍刘雅单保恩
- 关键词：前列腺癌NEDD4-1TRKA泛素化
