刘荻萩
- 作品数：15 被引量：53H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 马鼻肺炎被引量：6
- 2013年
- 马鼻肺炎是由马疱疹病毒1型和4型引起马属动物的一种急性热性传染病，临床表现为发热、白细胞减少、呼吸道症状、流产、脑脊髓炎等神经症状，世界各地普遍存在。聚合酶链式反应（PCR）是检测该病原灵敏、有效的方法。目前，针对本病并无有效的治疗手段，接种疫苗同时加强饲养管理可有效抑制发病和大规模流行。
- 马月刘荻萩王晓钧
- 关键词：聚合酶链式反应热性传染病白细胞减少呼吸道症状马属动物
- 马疱疹病毒1型调控蛋白对SV40早期启动子的调控
- 2016年
- 为研究马疱疹病毒1型(EHV-1)6种调控蛋白(极早期调控蛋白IEP、早期调控蛋白EICP0、EICP22、EICP27、IR2P和晚期调控蛋白ETIF)对猴空泡病毒40(SV40)早期启动子(SV40EIp)的调控作用,本研究将这6种EHV-1调控蛋白真核表达重组质粒分别与SV40EIp萤火虫荧光素酶重组报告质粒共转染RK13细胞,并同时转染作为内控的海肾荧光素酶报告质粒,通过检测两种独立的报告酶与对应底物反应后的发光强度,得到SV40EIp活性相对值。从而评价EHV-1 6种调控蛋白对SV40EIp活性影响。结果表明:ETIF对SV40EIp活性影响不显著;IR2P对SV40EIp活性具有下调作用;IEP、EICP0、EICP22、EICP27对SV40EIp活性均具有上调作用;而对于含增强子的SV40EIp(SV40EIp E),这4种调控蛋白也能够上调SV40EIp E活性,其中EICP22上调作用最强。而且,EICP22和EICP27能够协同上调SV40EIp的活性。此外,EICP22与EHV-1早期基因启动子转录因子TBP、EICP27与TBP及EICP22与EICP27的免疫共沉淀试验(Co-IP)结果表明:仅EICP27可以与TBP发生相互作用,提示EICP22并非与EICP27或者TBP直接结合而实现协同上调作用,其协同上调作用还存在其他的作用方式。
- 高俊刘荻萩马月王晓钧
- 马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用被引量：2
- 2020年
- [目的]对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测.[方法]利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断.利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证.与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析.[结果]各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1-17.因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致.利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL.其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性.利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行�
- 郭奎王宁王金慧初晓雨赵语婷郭巍刘荻萩胡哲王晓钧
- 关键词：马流产沙门氏菌微量凝集
- 犬ANP32蛋白多态性及其对A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响被引量：2
- 2022年
- 【目的】探索犬酸性核磷蛋白32(canis acidic(leucine-rich)nuclear phosphoprotein 32 ku,caANP32)对不同物种A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)RNA聚合酶活性的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR方法分析caANP32家族基因(caANP32A、caANP32B及caANP32E)的组织分布并对其进行扩增和克隆,评估caANP32家族蛋白对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的支持作用。【结果】caANP32家族基因在不同组织中分布相似,其中caANP32B基因组织丰度显著或极显著高于caANP32A和caANP32E基因(P<0.05;P<0.01),在心脏、盲肠和大脑中caANP32E基因组织丰度极显著或显著高于caANP32A基因(P<0.01;P<0.05),在肝脏、肺脏等组织中caANP32E与caANP32A基因丰度均无显著差异(P>0.05)。在犬心脏组织和MDCK细胞中发现,caANP32A基因仅存在1个转录本,caANP32B基因存在3个不同剪接变体:caANP32B_X1、caANP32B_X2和caANP32B_X3;caANP32E基因具有2个不同剪接变体:caANP32E_X1和caANP32E_X2。通过分析ANP32家族蛋白对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响发现,caANP32A和caANP32B均能支持犬流感病毒(H3N2_(GD11))和马流感病毒(H3N8_(JL89))RNA聚合酶活性,而对禽流感病毒(H9N2_(ZJ12))RNA聚合酶活性支持较低。caANP32B_X2剪接变体对哺乳动物流感病毒RNA聚合酶活性的支持能力显著高于caANP32B_X1和caANP32B_X3(P<0.05);而caANP32E不支持A型流感病毒RNA聚合酶活性。【结论】本研究初步解析了caANP32家族蛋白的组织分布及序列多态性,阐明了其对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的支持作用,为解析MDCK细胞作为流感病毒分离和疫苗生产细胞系的分子机制提供了新的借鉴。
- 张媛于萌萌孙留克郭兴那雷刘荻萩姜骞张海丽王晓钧
- 关键词：MDCK细胞
- 溶瘤病毒的治疗进展被引量：4
- 2017年
- 目前治疗肿瘤常用方法包括手术治疗、放射治疗和化学治疗,但这些手段对某些癌症却不起作用,因此新的癌症治疗手段有待探索。溶瘤病毒在肿瘤治疗方面已经成为一种新兴制剂。溶瘤病毒疗法联合免疫激活已成为有吸引力的肿瘤治疗手段,同时也具有原位肿瘤疫苗的作用。而且,溶瘤病毒可以构建成具有肿瘤特异性、可强化免疫激活途径或可与其他肿瘤治疗药物联合使用的制剂。
- 孙礼媛刘荻萩王晓钧张广美
- 关键词：肿瘤溶瘤病毒免疫治疗重组病毒
- 猪链球菌2型对PK-15细胞的黏附动力学被引量：5
- 2008年
- 为研究携带不同毒力因子的猪链球菌2型对细胞侵袭作用的差异,本实验室从全国各地分离100多株猪链球菌,PCR鉴定出10株链球菌2型,其中携带毒力因子菌株为7-4[MRP+EF+]、8-3[MRP+EF-]、ZH-1[MRP-EF+],另外选择1株LN-2[MRP-EF-]与PK-15细胞进行黏附动力学试验,结果表明MPR毒力因子与菌株对PK-15细胞黏附具有密切相关性。
- 姜成刚刘荻萩蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌2型PK
- 新型染料EvaGreen双重荧光定量PCR检测马疱疹病毒感染的研究
- 引言Ⅰ型和Ⅳ型马疱疹病毒(EHV-1,EHV-4)是引起马呼吸道疾病、流产和神经系统疾病的主要病原。由疱疹病毒引起的疾病在临床上也称之为马鼻肺炎。该病毒在世界范围内的传播对马业的发展造成了严重的影响。对我国马疱疹病毒感染...
- 胡哲朱超常浩郭巍刘荻萩相文华王晓钧
- 文献传递
- 基因芯片技术及其应用被引量：7
- 2006年
- 基因芯片是一种高通量、快速、平行核酸序列测定及定量分析技术。它是将大量特定序列的核酸片段有序地固定在载体上作为探针与标记核酸分子进行杂交,检测杂交信号的强弱,进而判断样品中靶分子的组成及数量。目前基因芯片技术广泛应用于基因序列测定、基因表达研究、动植物疾病诊断及生物药物筛选等领域,是一种发展前景良好的新兴检测手段。文章介绍了基因芯片技术的概念、工作原理、种类和制备过程,重点介绍了该技术在基因测序,基因表达水平检测,基因多态性检测,药物筛选,以及在预防兽医中的应用。
- 孙凯王秀荣刘丽玲刘荻萩王忠华陈维多
- 关键词：基因芯片基因
- 马泰勒虫和弩巴贝斯虫双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2021年
- 马梨形虫病(EP)是由巴贝斯虫属的驽巴贝斯虫(B.caballi)和泰勒虫属的马泰勒虫(T.equi)感染引起的蜱传马属动物疾病。为建立EP两种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中T.equi和B.caballi 18S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,经过反应体系和条件优化,建立了能够同时检测T.equi和B.caballi的双重荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示该方法与马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1),马疱疹病毒Ⅳ型(EHV-4),马流产沙门氏菌(S.abortus equi),马链球菌(S.equi),马传染性贫血病毒(EIAV)均无交叉反应,特异性强。敏感性试验结果显示,该方法对T.equi和B.caballi的质粒标准品的检测下限均为100拷贝/μL,敏感性高;将T.equi和B.caballi的质粒标准品10倍倍比稀释为1×10^(8)拷贝/μL~1×10^(4)拷贝/μL共5个稀释度,进行组内、组间重复性试验,结果显示该方法的组内、组间变异系数均小于5%,重复性好。利用本实验建立的方法对2019年我国北方西部地区200份马属动物全血样品进行检测,结果显示T.equi的阳性率为47%(94/200),B.caballi的阳性率为2.5%(5/200),其中T.equi和B.caballi混合感染率为1%(2/200),该方法与套式PCR的符合率为97.5%,且该方法具有耗时较短、易操作等特点。本研究首次建立的EP双重荧光定量PCR检测方法对T.equi和B.caballi的鉴别检测、病原监测、流行病学调查等均具有重要的意义。
- 陈克伟胡哲郭奎刘荻萩戚亭郭巍杨光璞杜承王晓钧
- 关键词：驽巴贝斯虫
- 马疱疹病毒1型(EHV-1)gC蛋白的原核表达及其免疫原性分析被引量：1
- 2016年
- 目的马鼻肺炎由马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)引起,但是二者存在广泛的抗原交叉反应,给两型病毒感染的鉴别诊断带来困难。EHV-1gC糖蛋白(gC1)具有凝集马红细胞的功能,而EHV-4gC糖蛋白不具有此特性,因此获得纯化的gC蛋白有助于建立马鼻肺炎鉴别诊断方法以及进一步研究马疱疹病毒感染的免疫分子机制。方法提取病毒基因组DNA,用特异性引物对目的基因片段进行扩增,对正确扩增的基因片段以及克隆载体pET30a(+)分别进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将所得目的基因片段插入表达载体pET30a(+)中,构建重组质粒pET30a-gC1。经双酶切和序列鉴定为阳性的重组质粒pET30a-gC1转化入大肠埃希菌表达菌株Rosseta中,经IPTG诱导表达目的蛋白并对表达条件进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒转化菌经IPTG诱导表达60ku的目的蛋白,大小与预期相符,且在诱导温度为25℃时蛋白呈可溶性表达,诱导温度为30℃时蛋白以包涵体的形式表达。将包涵体电泳后切胶纯化回收,纯化效率相对较好,纯度较高。Western blot检测目的蛋白能被EHV-1和EHV-2感染马血清识别。结论成功构建EHV-1gC基因表达载体,其表达产物具有反应原性,为进一步开展EHV感染的分子诊断奠定了基础。
- 王美月胡哲何佳刘荻萩王晓钧
- 关键词：原核表达
