- ScFv及重组TNF-α双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测
- 2005年
- 目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达。方法:在构建融合蛋白之前,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5′端,其3′与人的肿瘤坏死因子TNFα基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFvTNFα基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC/ScFvTNFα,以PCR,RTPCR以及Westernblotting对ScFvTNFα基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定。结果:运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFvTNFαDNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用ANTHEPROTV5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFvTNFα)SN,并获得高滴度产毒细胞株,以及Westernblotting分析证明ScFvTNFα基因融合蛋白的表达。结论:利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。
- 刘璐
- 关键词：单链抗体肿瘤坏死因子融合蛋白
- 石榴籽油抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究被引量：5
- 2015年
- 目的研究石榴籽油与乳腺癌细胞增殖、凋亡行为之间的关系。方法使用气相色谱法检测油脂脂肪酸组成成分;使用乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系进行干预,MTT法观察细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测细胞内相关增殖及凋亡蛋白的表达。结果石榴籽油中主要的脂肪酸为石榴酸(74.41%);石榴籽油可抑制两种乳腺癌细胞系的增殖,显著导致其细胞凋亡,与对照组相比,差异具有显著性意义;石榴籽油可显著下调细胞中Cox-2、Bcl-2的表达水平,上调Bax、胱天蛋白酶(caspase)-3(酶解)的表达水平,上调MCF-7中P53的表达水平或下调在MDA-MB-231中的表达水平。结论石榴籽油中的石榴酸可能是抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的功能性物质,石榴籽油抑制乳腺癌细胞增殖活性,促进其凋亡作用可能是通过调节细胞中Cox-2、Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶-3(酶解)以及P53的表达来实现的。
- 付国强刘璐张磊高源徐孝娜谢锋王枫
- 关键词：石榴籽油乳腺癌MCF-7MDA-MB-231凋亡
- 棕榈酸促进肝癌细胞侵袭转移的分子机制被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨棕榈酸(Palmiticacid,PA)对人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭转移能力的影响,并通过检测肝癌细胞系中CD147-MMPs信号通路在PA影响下的变化,初探PA影响肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:PA(0、20、50、100μM)作用SMMC-7721细胞后(8、16、24h),MTT法检测细胞增殖,划痕及Transwell实验评价细胞迁移侵袭能力,Western-blot及real-time PCR检测CD147蛋白及其mRNA的水平,ELISA检测基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的水平。结果:与对照组相比,PA作用SMMC-7721细胞后,细胞存活率无显著差异(P>0.05);细胞迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05);CD147蛋白及其mRNA的表达显著增高(P<0.05);培养上清中MMP-9的浓度显著增高(P<0.05),MMP-2的水平则无变化。不同的梯度组之间相比较,细胞迁移和侵袭能力、CD147的表达水平(蛋白及其mRNA)以及培养上清中MMP-9的浓度均随PA作用时间和作用剂量的增大而产生更显著的增高。结论:PA通过活化CD147-MMPs信号通路促进SMMC-7721细胞的迁移侵袭。
- 刘璐张先娇权晓娟罗苗张磊徐孝娜王枫刘寒强
- 关键词：棕榈酸肝癌CD147基质金属蛋白酶
- EPA诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及端粒酶活性调控机制研究
- 2015年
- 目的:探究二十碳五烯酸(Eicosa Pentaenoic Acid.EPA)对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡、端粒逆转录酶h TERT的调控作用及端粒酶表达活性的影响。方法:体外培养SMMC-7721人肝癌细胞,用不同浓度的EPA(0μM、25μM、50μM、100μM、200μM)作用于SMMC-7721肝癌细胞(24 h、48 h、72 h)后,显微镜下观察其形态学变化;应用MTT法检测SMMC-7721肝癌细胞细胞增殖变化情况;Western-blot法检测h TERT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化;Real Time-PCR检测h TERTm RNA的表达变化;ELISA法检测SMMC-7721肝癌细胞端粒酶活性的表达水平。结果:EPA可诱导肝癌细胞SMMC-7721发生细胞凋亡,具有明显的时间计量依赖关系。在此过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白表达上调,同时端粒酶逆转录酶h TERT蛋白及其m RNA的表达水平和端粒酶活性均明显降低。结论:抑制端粒酶逆转录酶基因(h TERTm RNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导癌细胞凋亡,可能是EPA的抗癌作用机制之一。
- 张磊刘寒强杨瑞华刘璐徐孝娜王枫
- 关键词：EPA肝细胞癌凋亡
