刘柱
- 作品数：15 被引量：70H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家转基因植物研究与产业化专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程环境科学与工程更多>>
- 极端污染条件下草苷膦抗性及降解基因的克隆
- 文章介绍了在长期受草苷磷污染的极端环境中,获取具有高效耐受或降解草苷磷能力的微生物菌株,克隆拥有自主知识产权的草苷磷抗性及降解基因.
- 陈明徐玉泉张维朱玉刘柱四川大学生命科学院(成都)林敏
- 关键词：克隆微生物降解基因工程降解基因
- 文献传递
- 一个高抗草苷膦新基因的克隆
- 从被草苷膦极度污染的土壤中分离到一株极端抗草苷膦菌HTG7,经16s rDNA鉴定其为可变盐单胞菌(Halomonas varabilis).它能在强碱、高盐的环境下或草苷膦浓度为200mmol/L至450mmol/L的...
- 刘柱徐玉泉张维刘光全平淑珍陈明陆伟杨志荣林敏
- 关键词：编码基因
- 文献传递
- 抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响
- 2003年
- 为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8％;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。
- 朱建清刘柱胡新文杨志荣
- 关键词：定点突变遗传密码子
- 可变盐单胞菌高抗草苷膦的EPSP合酶及其编码序列
- 本发明提供了一种新的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(简称为“EPSP合酶”)，编码EPSP合酶的多核苷酸和经重组技术产生这种EPSP合酶的方法。本发明还公开了编码这种EPSP合酶的多核苷酸的用途。
- 林敏刘柱
- 文献传递
- 籼型红米雄性不育系红宝石的选育及其特性被引量：7
- 2004年
- 为了对红米红宝石实现三系配套 ,回交转育了红宝石 A,并对红宝石 A进行了以下分析 :不同细胞质来源的野败型不育系珍汕 97A、印尼水田谷型不育系 - 32 A、D型不育系 D6 2 A、G型不育系 G4 6 A、红宝石 A(来源于 D6 2 A)育性基因具有等位性。而 Bg1 6 39、R5 2 7、R881、2 5 0 (CDR2 2 / Bg4 0 3)具有的恢复这几个不育系的恢复基因等位。通过考种分析 ,发现在每产量上红宝石 A的 F1 杂种显著大于常规稻红宝石 ,最大每公顷能增产 2 392 .5 kg,证明了红宝石 A具有强的配合力和杂种优势 。
- 廖金花朱建清刘柱杨志荣
- 关键词：雄性不育系红宝石选育配合力杂种优势
- 可变盐单胞菌高抗草苷膦的EPSP合酶及其编码序列
- 本发明提供了一种新的5－烯醇丙酮酸莽草酸－3－磷酸合酶(简称为“EPSP合酶”)，编码EPSP合酶的多核苷酸和经重组技术产生这种EPSP合酶的方法。本发明还公开了编码这种EPSP合酶的多核苷酸的用途。
- 林敏刘柱
- 文献传递
- 萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2002年
- 根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。
- 刘柱胡新文朱建清杨志荣
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 利用易错PCR随机突变技术突变EPSPs基因研究草甘膦抗性机理被引量：2
- 2004年
- 运用易错PCR介导的随机突变技术使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶(5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate，EPSPs)基因发生随机突变，转入EPSPs基因缺陷型的大肠杆菌ER2799中，通过互补试验获得对草甘膦抗性明显降低的突变株AZ100。测序结果发现AZ100的EPSPs基因与未突变基因相比，碱基序列发生了两个位点变化，第792位的碱基由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)，第1203位的碱基由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G)。氨基酸序列也发生了相应的变化，第264位由甘氨酸(Gly)突变为缬氨酸(Val)，第401位由丙氨酸(Ala)突变为甘氨酸(Gly)。二级结构预测显示此两个突变的氨基酸的位点恰好位于EPSPs与底物结合的关键部位。这两个氨基酸位点的突变，导致EPSPs在有草甘膦存在的情况下活性降低，从而导致菌株的草甘膦抗性降低。将这两个突变的碱基位点与美国的专利保护位点比较，发现这两个突变位点均不在专利保护范围之内。
- 梁爱敏刘柱张怀江刘秀敏陈明陆伟李国勋林敏
- 关键词：随机突变草甘膦抗性机理
- 抗真菌蛋白分子生物学研究进展被引量：9
- 2001年
- 对几种抗真菌蛋白的分类、功能进行了综述 。
- 刘柱胡新文刘志昕郭建春
- 关键词：抗真菌蛋白分子生物学几丁质酶真菌病害
- 可变盐单胞菌中草甘膦抗性EPSP合酶新基因克隆、大肠杆菌表达及其抗性机制的研究
- 从被草甘膦极度污染的土壤中分离到一株极端抗草甘膦菌HTG7.它能在900mmol/L草甘膦的限制性培养基Mops上生长.表型及16S rDNA鉴定其为可变盐单胞菌.从可变盐单胞菌HTG7构建的粘粒基因组文库中克隆到一个完...
- 刘柱
- 关键词：EPSP合酶原核表达
