何炜
- 作品数：6 被引量：54H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒被引量：6
- 2005年
- 利用同源重组的方法,构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒.对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造,得到质粒pHC11R,并用适当的酶切线性化;利用PCR 反应得到人IFNα2b表达单元片段,它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50 bp左右的同源区段.上述两个片段共转化酿酒酵母,在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNα2b, 该表达质粒与pHC11-IFNα2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列,在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高,同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高.在此基础上,进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体,使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达.
- 陈向岭袁汉英何炜胡翔华吕红李育阳
- 关键词：表达质粒IFNΑHC拷贝数同源重组酿酒酵母
- 基于体内同源重组的构建遗传工程生物体的方法
- 本发明提供了一种将所需要的、两端带有载体片段同源序列的线性化外源基因表达单元与线性化的特定表达载体共转化特定生物体，通过体内同源重组构建遗传工程生物体的方法，以及用该方法获得的遗传工程生物体及其用途。
- 李育阳陈向岭何炜袁汉英霍克克
- 文献传递
- 基于体内同源重组的构建遗传工程生物体的方法
- 本发明提供了一种将所需要的、两端带有载体片段同源序列的线性化外源基因表达单元与线性化的特定表达载体共转化特定生物体，通过体内同源重组构建遗传工程生物体的方法，以及用该方法获得的遗传工程生物体及其用途。
- 李育阳陈向岭何炜袁汉英霍克克
- 文献传递
- 人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达被引量：10
- 2004年
- 超氧化物歧化酶 (SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶 ,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用 .对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆 ,并得到带有启动子PADH2 GAPDH和终止子TADH1的高效稳定的酿酒酵母表达载体 pHC11 hSOD .转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4 /pHC11 hSOD .表达产物经破壁后SDS PAGE电泳检测为 2 0ku的条带 ;酶活性测定结果表明发酵液有 4 0万U/L的hSOD活性 .此外 ,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法 .纯化产物在SDS PAGE上和Superdex分子筛检测显示 ,所得产物的纯度已达 95
- 何炜袁汉英高卜渝陈向岭李育阳
- 关键词：超氧化物歧化酶酿酒酵母
- 人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的克隆和表达
- 超氧化物歧化酶是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老,抗肿瘤,抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用.该实验对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组,得到完整的人类超氧化物歧化酶基因,并克隆到带有启动...
- 何炜
- 关键词：超氧化物歧化酶酿酒酵母克隆
- 文献传递
- 乙肝病毒表面抗原SA-28融合基因在酵母中的组成型表达被引量：39
- 2000年
- 以酵母载体YFD5 9为基础 ,将乙肝病毒表面抗原SA 2 8融合基因正向插入组成型启动子PPGK1及终止子TPGK1间 ,得到表达载体YFD5 9 LSS1.并将该表达载体分别转化BJ2 16 8,DBY746 ,JRY188,BJ35 0 5 4株不同的酿酒酵母株 .再将YFD5 9 LSS1质粒上的表达单元克隆至高稳定载体pHC11的BamHⅠ位点 .构建成 3个带有不同拷贝数和不同插入方向表达单元的表达载体 :pHC11 LSS1 1,pHC11 LSS1 2和 pHC11 LSS1 7.将它们分别转化Y16 ,Y192株酿酒酵母菌 .对不同工程菌株进行表达水平的测定 ,我们选到了高效表达乙肝病毒融合抗原的菌株 ,并发现带有以YFD5 9为基础的表达载体的工程菌表达水平要比带有以 pHC11为基础的表达载体的工程菌的高 。
- 周则迅袁汉英何炜何炜高卜渝
- 关键词：乙肝病毒表面抗原组成型表达
