丁红研 作品数:23 被引量:49 H指数:5 供职机构: 安徽农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家现代农业产业技术体系建设项目 安徽省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
围产期奶牛酮病和脂肪肝预测因子NEFAS的研究进展 围产期奶牛的主要生理特征之一是能量负平衡(NEB),NEB必然引起脂肪动员,产生过量的非酯化脂肪酸(NEFAS),因此,血液中NEFAS的浓度能够反映脂肪动员的程度。血液中高NEFAS的水平作为能量负平衡的标志,高浓度的... 宋玉祥 史晓霞 丁红研 韩盈盈 刘兆喜 杨文涛 李玉 李小兵 王哲关键词:酮病 脂肪肝 氧化应激 信号通路 文献传递 网络资源链接 11S球蛋白通过核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶、c-Jun N端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导猪小肠上皮细胞损伤的研究 被引量:2 2021年 本研究旨在利用细胞体外培养技术,分析11S球蛋白通过核因子-кB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的作用差异。试验随机分为6组:A组(对照组)无添加;B组添加5 mg/mL的11S球蛋白;C、D、E和F组分别添加1μmol/L的NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)、iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、JNK抑制剂SP600125和p38 MAPK抑制剂SB202190预处理后,分别添加5 mg/mL的11S球蛋白。培养24 h后,CCK-8检测细胞活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞及细胞核形态,用透射电子显微镜观察细胞超微结构,实时荧光定量PCR检测NF-κB、iNOS、JNK、p 38 MAPK mRNA相对表达量,Western blot检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞活性极显著降低(P<0.01);与B组相比,C、D、E和F组细胞活性极显著升高(P<0.01),且C组细胞活性显著高于D、E和F组(P<0.05)。2)与A组相比,B组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著升高(P<0.01),IL-10含量极显著降低(P<0.01);与B组相比,C、D、E和F组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著降低(P<0.01),IL-10含量极显著升高(P<0.01)。3)与A组相比,B组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平和mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。4)与B组相比,C和F组NF-κB、iNOS、JNK和p 38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),E组NF-κB、JNK和p 38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。5)与B组相比,C、E和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。6)HE染色及透射电镜观察可见,B� 王蕾 孙智峰 彭成璐 丁红研 王志 李思婷 王承智 李玉 王希春 吴金节关键词:大豆球蛋白 信号通路 胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞脂合成作用的影响 被引量:3 2017年 为确定胰岛素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GLN)对奶牛肝细胞脂合成作用的影响,本试验体外培养犊牛原代肝细胞,分别用不同浓度的INS和GLN处理肝细胞:对照组(0nmol/L)、浓度梯度组(1,10,100,1 000nmol/L)。培养1h后分别用免疫印迹(Western blot,WB)方法、荧光定量PCR(qRT-PCR)方法以及细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)方法检测INS和GLN处理体外培养肝细胞对关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达水平,SREBP-1c核质分布以及下游靶基因脂代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平的影响。结果显示:INS处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著升高,入核量显著增加,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著升高。而与之相反,GLN处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著降低,入核量显著减少,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著降低。以上结果说明,INS可通过增强SREBP-1c的活性从而促进肝细胞脂合成,增加肝脂沉积;而GLN则通过抑制SREBP-1c的活性从而降低肝细胞脂合成。 张世奇 丁红研 史珍 张强 李心慰 李小兵关键词:胰岛素 胰高血糖素 固醇调节元件结合蛋白-1C 大豆抗原蛋白对断奶仔猪细胞因子及肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA表达的影响 被引量:6 2015年 选取70头24日龄"杜×长×大"断奶仔猪,随机分成7组,每组10头仔猪。对照组(A组)饲喂基础日粮,β-伴大豆球蛋白(β-Conglycinin,7S)(B、C、D组)和大豆球蛋白(Glycinin,11S)试验组(E、F、G组)分别添加500、2 000、5 000μg/kg质量的7S或11S。仔猪断奶时开始饲喂大豆抗原蛋白,分别于24、26、28、30日龄采集血液,测量血清中细胞因子含量。于试验结束时,每组选取5头仔猪放血致死,采集小肠各段,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小肠各段Claudin-1mRNA的相对表达量。结果显示,与对照组相比,随着7S和11S剂量的增加,血清中IL-2、IL-4、IL-6的含量升高,血清中INF-γ的含量降低。与对照组相比,7S与11S试验组中的D、G组各肠段Claudin-1mRNA的相对表达量均显著降低(P<0.01),C组的空肠前段、空肠中段和空肠后段均显著降低(P<0.01)。与7S试验组相比,除11SB、C组的回肠显著降低,其余各组均显著升高。试验表明,7S和11S均能够通过影响细胞因子的含量,引起断奶仔猪的体液和细胞免疫反应,降低断奶仔猪十二指肠和空肠Claudin-1mRNA相对表达量,引起仔猪肠道黏膜损伤,且7S比11S对仔猪的损伤程度更大。 李宝 李玉 马良友 冯士彬 丁红研 王希春 吴金节关键词:Β-伴大豆球蛋白 大豆球蛋白 细胞因子 玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测方法的初步建立 被引量:1 2012年 为了研究玉米赤霉烯酮的间接竞争ELISA检测方法,试验采用牛血清白蛋白与玉米赤霉烯酮的耦联物(ZEN-BSA)做包被抗原,标准玉米赤霉烯酮(ZEN)做竞争抗原,以制备的可稳定分泌抗ZEN的单克隆抗体为基础,初步建立了ZEN间接竞争ELISA检测方法。结果表明:间接竞争ELISA检测方法线性范围为0.363 2~78.985 2μg/L,最低检测限为0.231 9μg/L;曲线回归方程为y=68.711-25.666x,其中R2=0.987 1,批内平均变异系数为3.10%,批间平均变异系数为6.26%,与相似毒素的交叉反应率均小于0.01%。说明建立的检测方法可以用于ZEN的检测。 李东娜 王照鹏 杨威 刘磊 唐佳佳 张良 丁红研 刘国文 李小兵关键词:玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 ELISA 腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路在奶牛酮病发生和发展过程中的调控机制 被引量:1 2016年 奶牛酮病是围产期奶牛常见的营养代谢性疾病,给奶牛业造成了巨大的损失。奶牛酮病发生时,相关的能量代谢激素也发生了明显的变化,主要是胰高血糖素和胰岛素。腺苷酸活化蛋白激酶被认为是机体的能量感受器,一些能量代谢激素可以引起其活性的变化。本文就胰高血糖素和胰岛素对腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路发生作用机制做一论述,旨在为下一步研究奶牛酮病提供理论支持。 董记红 吴金节 王希春 冯士彬 丁红研 刘国文 李心慰 李小兵 王哲 李玉关键词:胰高血糖素 胰岛素 腺苷酸活化蛋白激酶 奶牛酮病 茶黄素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡 被引量:1 2023年 本试验旨在研究茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用机制。采用不同浓度[0(A组)、48(B组)、88(C组)、128μmol/L(D组)]茶黄素处理小鼠乳腺肿瘤细胞(C-127细胞)24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测细胞活性与坏死情况,透射电镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测半胱氨酸特异性天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA相对表达量,Western Blot法检测活化后的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、PI3K、Akt、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞存活率显著降低(P<0.05),C组、D组细胞存活率极显著降低(P<0.01)。2)与A组相比,B组、C组、D组细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。3)与A组相比,B组Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),PI3K、Bcl-2的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),Caspase-3、Bax的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);C组和D组PI3K、Bcl-2和Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),Caspase-3和Bax的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。4)与A组相比,B组Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),Cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01);C组和D组Cleaved-Caspase-3和Bax的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),PI3K、Akt、Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。5)荧光显微镜和透视电镜观察可见,随着茶黄素浓度的升高,细胞活性逐渐降低,坏死细胞逐渐增多,线粒体变大,线粒体嵴增多;染色质浓缩分布在核膜周围或一侧,呈眼球状;自噬体内吞噬线粒体、内质网和一些细胞内的胞质成分,再与细胞膜融合后,形成凋亡小体。综上所述,茶黄素可通过PI3K/Akt信号通路促进促凋亡基因的表达,降低抗凋亡基因的表达,从而促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用;并且,随着茶黄素浓度的增大, 田朋 谢维娜 丁红研 单兴根 刘畅 李玉 赵畅 冯士彬 王希春 吴金节关键词:茶黄素 细胞凋亡 PI3K/AKT信号通路 11S通过不同信号通路诱导猪小肠上皮细胞损伤的比较研究 本研究旨在利用细胞体外培养技术,比较分析1 1S(大豆球蛋白)通过核因子-κB(NF-κB)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、c-JunN端激酶(JNK)和p38不同通路引起IPEC-J2(猪小肠上皮细胞)细胞损伤的作用... 王蕾 孙智峰 彭成璐 丁红研 王志 李思婷 王承智 李玉 王希春 吴金节关键词:大豆球蛋白 信号通路 细胞损伤 非酯化脂肪酸对体外培养犊牛原代肝细胞中炎性因子表达及其活性的影响 被引量:7 2014年 在建立犊牛原代肝细胞体外培养模型的基础上,通过培养液中添加不同浓度的非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acids,NEFAs),运用实时荧光定量PCR和ELISA方法,测定NEFAs对肝细胞中炎性因子TNFα、IL-6和IL-1β的mRNA表达及其活性的影响。结果显示,NEFAs作用肝细胞9h后,与对照组相比,高浓度NEFAs(1.8mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β的mRNA表达水平显著增加(P<0.05),IL-6的mRNA表达水平在2.4mmol/L时极显著增加(P<0.01),低浓度NEFAs(0.6、1.2mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);并且TNFα、IL-1β的活性在NEFAs浓度达到1.8、2.4mmol/L显著高于对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性作用,IL-6的活性在在NEFAs浓度达到1.8mmol/L显著高于对照组(P<0.01),在2.4mmol/L也高于对照组,但差异不显著。结果表明,高浓度NEFAs在一定程度上能引起或加剧奶牛肝细胞炎性反应,可能是导致产后奶牛肝功能炎性损伤主要因素。 史晓霞 王建国 李玉 宋玉祥 丁红研 韩盈盈 张玉明 殷立恒 王婷婷 张仁和 郭立辉 邓清华 李心慰 李小兵 刘国文 王哲关键词:肝细胞 炎性因子 APS对DEX诱导的IPEC-J2细胞凋亡的保护作用 2023年 本试验旨在探讨黄芪多糖(APS)对地塞米松(DEX)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的保护作用。采用不同浓度的APS(0~0.8 mg/m L)或DEX(0~0.7 mg/m L)处理IPEC-J2细胞24 h,利用细胞计数试剂(CCK-8)检测细胞活性,确定药物作用浓度。对照组无添加,A组添加0.4 mg/m L APS培养,D组添加0.4 mg/m L DEX培养,A+D组添加0.4 mg/m L APS+0.4 mg/m L DEX共培养。采用Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒检测细胞的存活情况,流式细胞仪检测IPEC-J2细胞的凋亡情况,透射电子显微镜观察细胞的形态,实时荧光定量PCR检测凋亡基因Caspase3、Caspase9、Bid、Bcl-2 m RNA的相对表达量,Western-blotting检测Caspase3、Caspase9、Bid、Bcl-2蛋白的表达水平。结果表明,APS可以通过调控凋亡蛋白和基因的表达来抑制DEX诱导的IPEC-J2细胞的凋亡,恢复IPEC-J2细胞的活性,起到保护猪小肠上皮细胞作用。 谢维娜 田朋 单兴根 丁红研 王蕾 赵畅 李玉 冯士彬 王希春 吴金节关键词:黄芪多糖 地塞米松 细胞凋亡