龙晓辉
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划浙江省科技厅重点资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕孤雌生殖差异脂蛋白30K lipoprotein precursor基因的克隆与生物信息学分析被引量：5
- 2008年
- 应用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白，并和正常蚁蚕总蛋白进行比较，得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOFMS）分析，经数据库搜索鉴定，确定其中一个差异蛋白点为脂蛋白30Klipoprotein precursor（30KLPP）。通过5′-RACE技术克隆到30KLPP脂蛋白的全长cDNA序列。生物信息学分析显示该差异蛋白基因全长917bp。编码261个氨基酸，理论分子质量为30．013kD，等电点为7．193；结构域和三级结构预测显示该蛋白包含1个Lipoprotein_11结构域和12个β-折叠。预测其信号肽概率为1．000，定位在1～20aa区域，即可能存在信号肽。细胞定位预测显示该蛋白可能分泌到胞外（SP值为0．934）。分析结果有助于进一步研究30KLPP脂蛋白结构与功能的关系。
- 王丹聂作明龙晓辉刘立丽陈健吕正兵陈芳吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕孤雌生殖LPP
- 家蚕核糖体蛋白L7基因cDNA序列的克隆和分析被引量：2
- 2008年
- 为了研究家蚕孤雌生殖的调节机制,应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离正常生殖的家蚕卵与孤雌生殖家蚕卵的差异蛋白质,在蛋白质水平上筛选与家蚕孤雌生殖过程相关的重要蛋白质.利用MALDI-TOF-TOFMS分析这些差异蛋白,获得了大量小肽的序列特征.BLAST搜索本实验室构建的cDNA文库,获得了1个与家蚕孤雌生殖相关的核糖体蛋白L7基因.根据已有的cDNA文库,采用RACE方法克隆得到该核糖体蛋白基因的全长cDNA.利用生物信息学的方法和工具,对这个基因在核酸水平和蛋白质水平分别作了详细的分析和讨论并进行蛋白结构预测.结果表明,核糖体L7基因的cDNA全长为858bp,编码区包含6个外显子,共编码268个氨基酸残基,蛋白的疏水性平均值为-0.586,分子量大小为30kD,极性的最大值为39.616,最小值为0.451,等电点为10.52.分子系统分析显示,该蛋白与Apis,Lysiphlebus和Meladema中的核糖体蛋白L7具有较高的同源性.
- 贺平安聂作明吕正兵龙晓辉王丹陈健张耀洲
- 关键词：家蚕孤雌生殖生物信息学
- 家蚕孤雌生殖差异蛋白——热休克相关蛋白的生物信息学分析被引量：6
- 2007年
- 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这些序列与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,得到3个差异蛋白为热休克相关蛋白。通过5-′RACE的方法克隆到3个差异蛋白的全基因序列,并对它们进行结构和特征分析,有助于进一步研究其与孤雌生殖的关系。
- 夏佳音龙晓辉陈健聂作明王丹吕正兵徐杰贺平安张耀洲
- 关键词：孤雌生殖双向凝胶电泳差异蛋白热休克蛋白
- 家蚕孤雌生殖相关蛋白PGL的鉴定与生物信息学分析
- 2010年
- 应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离有性生殖蚕卵与孤雌生殖蚕卵的差异蛋白,通过基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFMS)分析获得大量小肽的序列特征。与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,确定一个在家蚕孤雌生殖过程中表达量显著上调的差异蛋白为磷脂酰肌醇蛋白聚糖(phosphatidylinositol glycan,PGL)。为了探讨PGL蛋白在家蚕孤雌生殖发生中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增目的基因5′端片段,获得PGL蛋白基因的全长cDNA,生物信息学分析显示该基因cDNA全长1038bp,编码345个氨基酸,其编码蛋白理论分子质量为39.516kD,等电点为5.845,包含1个保守的GPI8结构域,信号肽概率为0.997,可能为分泌型蛋白,预测蛋白功能域包含酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化、N糖基化、蛋白激酶C磷酸化等多个功能位点。依据PGL蛋白的理化性质、结构功能推测其有可能在不同程度上通过细胞信号转导途径参与了家蚕孤雌生殖发生过程并发挥重要作用。
- 张文平吕正兵龙晓辉聂作明夏佳音张耀洲
- 关键词：差异表达蛋白二维凝胶电泳基因克隆生物信息学分析
