黄丽丽
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 外源性人乳头瘤病毒16型E7癌基因导入对HeLa细胞cdc25A表达的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:研究HPV16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期调节因子cdc25A mRNA表达的影响,探讨E7癌基因和cdc25A在宫颈癌发生发展中的作用。方法:用含有HPV16E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染前后HeLa细胞cdc25A mRNA表达的差异。结果:感染后HeLa细胞cdc25A的mRNA含量较感染前显著增加(感染前灰度值0.2306±0.0964,感染后0.8739±0.2188,P<0.01)。结论:HPV16E7癌基因促进细胞周期调节因子cdc25A的表达,可能是宫颈癌发病机制中的重要分子事件。
- 戴淑真田甜孔守芳黄丽丽罗兵
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E7基因HELA细胞逆转录
- 外源性HPV16 E7癌基因表达对宫颈癌HeLa细胞Cyclin E表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的研究重组腺病毒介导人乳头状瘤病毒(HPV)16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期蛋白E(Cyclin E)表达的影响,探讨HPV16 E7癌基因以及Cyclin E在宫颈癌发生发展中的作用。方法用含有HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测感染前后Cyclin E表达的差异。结果HPV16 E7感染后Cyclin E表达较感染前明显增加。结论HPV16 E7基因的表达促进Cyclin E的表达,对宫颈肿瘤细胞有增殖促进的作用。
- 田甜戴淑真孔守芳黄丽丽罗兵
- 关键词：细胞周期蛋白E
- 携带HPV16E7基因的腺病毒重组质粒的构建及鉴定
- 目的:构建含HPV16E7病毒癌基因的复制缺陷型腺病毒的重组质粒Ad-E7,以期为研究其干扰细胞周期调控及与宫颈癌的关系奠定基础。方法:PCR技术从宫颈癌组织中扩增HPV16E7基因全长片段,并导人T载体进行测序,与Ge...
- 黄丽丽戴淑真罗兵姚勤
- 文献传递
- 真核细胞内外源性HPV16 E7癌基因表达及其对cdc25A及Cyclin E表达的影响被引量：2
- 2007年
- 背景与目的:人乳头状瘤病毒(HPV)感染及其引发的抑癌基因功能丧失和细胞周期调控失调是宫颈癌发病的重要因素。HPV16诱发宫颈癌的机制主要与其两个早期开放读码框架E6、E7转化基因密切相关。HPVE6、E7引起细胞生长和增殖异常,同时伴有Cyclin A、Cyclin D1、CDK4等细胞周期蛋白的表达异常。本研究采用体外基因转染技术将HPV16 E7基因转入靶细胞,通过对目的基因瞬时表达的检测,进而观察在E7病毒癌蛋白的影响下调控G1/S检验点的几种细胞周期调节蛋白的表达,以探讨HPV16型E7基因外源性表达对子宫颈癌HeLa细胞细胞周期调节因子cdc25A及细胞周期蛋白E(Cyclin E)的影响。方法:从宫颈癌标本中经PCR扩增回收HPV16 E7基因片段,将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒基因组Ad-E7。用脂质体介导Ad-E7导入包装细胞人胚肾细胞系HEK-293细胞,包装出完整腺病毒颗粒。测定病毒上清液滴度,感染体外培养的HeLa细胞。采用RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞cdc25A的mRNA表达的差异;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测转染前后Cyclin E表达的差异。结果:荧光显微镜下,转染后HEK-293细胞和HeLa细胞表达绿色荧光蛋白。RT-PCR结果显示转染后,HeLa细胞cdc25A的mRNA含量较转染前显著增加[感染前灰度值0.23±0.10,感染后0.87±0.22(P<0.01)],LSCM检测结果显示转染后Cyclin E表达较转染前明显增加。结论:重组腺病毒可以成功介导外源性HPV16 E7基因在HeLa细胞内表达,HPV16 E7基因促进HeLa细胞周期调节因子cdc25A和Cyclin E的表达。
- 戴淑真田甜孔守芳黄丽丽罗兵
- 关键词：人乳头状瘤病毒16E7基因细胞周期蛋白ECDC25A
- 携带HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定
- 2005年
- ①目的构建携带人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7病毒癌基因的复制缺陷型重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-E7。②方法应用PCR技术从宫颈癌组织中扩增E7病毒癌基因全长片段,并导入T载体进行测序,与Nucleotide中HPV16标准毒株序列比较鉴定。目的基因及穿梭质粒载体pAdTrack-CMV分别经BglⅡ和HindⅢ双酶切后连接,转化宿主菌E.coli DH5α,应用PCR法及限制性内切酶消化法双重鉴定重组质粒,并测序。③结果PCR扩增产物与Nucleotide中HPV16 E7序列一致,重组穿梭质粒经BglⅡ和HindⅢ双酶切后电泳,可观察到9 220 bp大小的载体条带和313 bp大小的目的基因条带;将经PCR和双酶切鉴定的重组阳性克隆测序,结果证实克隆成功。④结论成功地构建了携带HPV16 E7基因的重组腺病毒穿梭质粒。
- 黄丽丽戴淑真罗兵姚勤
- 关键词：E7基因重组腺病毒穿梭质粒
- 外源性人乳头状瘤病毒16型E7基因对子宫颈癌细胞周期的影响被引量：4
- 2006年
- 目的了解外源性人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因对子宫颈癌细胞周期的影响。方法从宫颈癌标本中经 PCR 扩增回收 HPV16 E7基因片段,将正确的 E7基因片段插入到穿梭质粒 pAdrTrack-CMV 中,与骨架质粒 pAdEasy-1在大肠埃希菌 Bj5183中同源重组,重组腺病毒质粒转染人胚肾细胞株 HEK-293细胞,包装表达 E7基因的腺病毒,然后转染 HPV18阳性的宫颈癌细胞株HeLa 细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后 HeLa 细胞的增殖情况,以吸光度(A)值表示;流式细胞仪检测转染前后 HeLa 细胞的细胞周期和细胞周期蛋白 D1表达的变化。结果在 HEK-293细胞中,可以收获高转染效率的腺病毒。在荧光显微镜下,可以观察到 HEK-293细胞和 HeLa 细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。提取 HEK-293细胞 RNA,RT-PCR 技术可以检测到 E7基因的表达。MTT 比色法检测结果显示,转染后 HeLa 细胞的 A 值最低为0.38±0.02,最高为0.96±0.01,分别与转染前的0.27±0.03比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,转染12h后,S 期细胞占(36.0±2.0)%,转染24h 后为(49.9±4.2)%,分别与转染前的(26.0±0.4)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05);转染前、后细胞周期蛋白 D1阳性表达率分别为22.4%、55.2%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论携带 HPV16 E7基因的腺病毒可转染子宫颈癌 HeLa细胞,并在 HeLa 细胞内表达,HPV16 E7基因的表达进一步影响 HeLa 细胞的细胞周期蛋白的表达,促进 HeLa 细胞增殖,可望用于治疗宫颈癌。
- 戴淑真孔守芳黄丽丽罗兵
- 关键词：HELA细胞
