高红亮
- 作品数：8 被引量：40H指数：3
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”江苏省高技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建
- 2008年
- 根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。
- 高红亮李英宋玉萍马成英侯喜林
- 关键词：不结球白菜
- 不结球白菜硝酸还原酶基因BcNR的克隆及其在拟南芥中的转化被引量：5
- 2009年
- 【目的】克隆不结球白菜硝酸还原酶基因(BcNR),并转化拟南芥做初步的功能鉴定。【方法】采用分段RT-PCR及3′RACE和5′RACE技术克隆了BcNR基因的全长cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析和蛋白结构分析。构建pCAM-BcNR植物过量表达载体,通过农杆菌介导的真空渗透法将其转入野生拟南芥中,经抗性筛选及PCR验证获得T0代转基因植株,用Real-timePCR方法对30mmol·L-1KNO3溶液处理的转基因拟南芥的硝酸还原酶基因表达进行检测,并测定转基因植株的硝酸还原酶活性。【结果】获得了编码不结球白菜硝酸还原酶基因(BcNR)的cDNA全序列3049bp,包含有2733bp的开放阅读框,编码910个氨基酸。其氨基酸序列与拟南芥、烟草、甘蓝型油菜、马铃薯等编码的氨基酸序列具有较高同源性。蛋白质结构域分析表明,所推导的氨基酸序列具有完整的硝酸还原酶结构,同时证明从不结球白菜中克隆的这条基因属于NADH-NR型。GenBank登录号为EU662272。转基因拟南芥T0代植株进行GUS基因PCR检测,证明重组质粒已整合到转基因植株基因组中。硝酸盐处理后的转基因植株硝酸还原酶基因的表达比野生型显著提高,且硝酸还原酶活性有不同程度的提高。【结论】本研究首次从不结球白菜中克隆获得BcNR基因的全长cDNA序列,揭示了其序列特征并对其进行了初步的功能鉴定,为进一步利用该基因开展蔬菜硝酸盐含量的基因调控研究奠定了基础。
- 孙菲菲侯喜林李英高红亮张昌伟
- 关键词：不结球白菜硝酸还原酶克隆
- 不结球白菜离体培养与植株再生体系研究被引量：21
- 2008年
- 以4个不结球白菜品种为试材，对外植体、苗龄、激素的组配、培养基中琼脂和AgNO3浓度等再生因素进行了筛选优化，并探讨了抗坏血酸（AsA）对不结球白菜不定芽分化的影响。结果显示：以4～7d苗龄的带柄子叶为外植体诱导不定芽效果较好；MN培养基中4mg／L 6-BA与0．5mg／L NAA的搭配有利于不定芽形成；琼脂的浓度变化对不定芽分化影响较大，以9g／L琼脂为宜；培养基中添加5～7．5mg／L的AgNO3、0．1～0．5mmol／L的AsA可显著提高不定芽的发生频率和质量。通过不定芽继代培养、生根培养和驯化移栽建立了能够获得较高再生频率的不结球白菜离体再生体系。
- 高红亮李英宋玉萍高素燕王建军
- 关键词：不结球白菜不定芽离体培养
- 不结球白菜GLDH基因提高乌塌菜Vc含量的应用
- 本发明涉及不结球白菜GLDH基因提高乌塌菜Vc含量的应用，属于分子生物学和生物技术领域。利用RT-PCR技术获得了GLDH基因完整编码区序列，进一步构建其植物过量表达载体，导入农杆菌LBA4404。优化含培养基配方及操作...
- 李英高红亮侯喜林史公军
- 文献传递
- 不结球白菜维生素C积累与相关酶活性研究被引量：14
- 2007年
- 对不结球白菜‘常州乌塌菜’、‘矮脚黄’和‘二青’生长过程中维生素C(AsA)含量和L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)、抗坏血酸氧化酶(AAO)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)的活性进行测定分析,结果显示,AsA含量的积累呈先升高后下降的模式,且‘常州乌塌菜’中的AsA含量显著高于‘矮脚黄’和‘二青’;GalLDH活性与AsA含量变化趋势基本一致,且3个品种中GalL-DH活性与AsA积累之间均呈极显著的正相关关系;AAO和APX活性的变化趋势则与AsA含量变化趋势相反,而‘常州乌塌菜’中AAO活性显著低于其它2个品种,但APX活性无显著差异;MDAR和DHAR的活性则主要表现在生长后期。结果表明,不结球白菜中AsA含量主要受GalLDH酶活性调节,同时AsA代谢酶AAO也对AsA积累起到了重要作用,而MDAR和DHAR酶活性对AsA积累的作用主要在生长后期。
- 宋玉萍李英高红亮王建军侯喜林
- 关键词：不结球白菜抗坏血酸抗坏血酸过氧化物酶
- 不结球白菜维生素C合成代谢相关基因GLDH和AO功能的初步鉴定
- 植物中维生素C(vitamin C)又名L-抗坏血酸(L-astorbic acid，AsA)，不仅对于植物自身的抗氧化系统、光合保护以及调节生长发育等具有非常重要的生理功能，更为人类提供了丰富而方便的Vc源(人类不能依...
- 高红亮
- 关键词：不结球白菜
- 文献传递
- 不结球白菜GLDH基因提高乌塌菜Vc含量的应用
- 本发明涉及不结球白菜GLDH基因提高乌塌菜Vc含量的应用，属于分子生物学和生物技术领域。利用RT－PCR技术获得了GLDH基因完整编码区序列，进一步构建其植物过量表达载体，导入农杆菌LBA4404。优化含培养基配方及操作...
- 李英高红亮侯喜林史公军
- 文献传递
- 不结球白菜离体培养及植株再生的研究
- 不结球白菜是十字花科芸苔属白菜类蔬菜,由于白菜具有 AA 基因组,其外植体离体培养再生能力很低,严重制约了转基因技术在不结球白菜品种改良上的应用。本试验希望建立一个高效的对不结球白菜有较广适应性的再生体系,为今后通过基因...
- 高红亮李英宋玉萍
- 文献传递
