雷清
- 作品数：29 被引量：59H指数：5
- 供职机构：兰州生物制品研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的克隆、表达及初步纯化被引量：4
- 2005年
- 为研究大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂活性。从大肠杆菌中调出LTB的原始基因,将该基因克隆、构建pET21b-LTB表达载体、转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并对表达产物进行初步纯化;经DNA测序、SDS-PAGE、ELISA检测,结果表明成功构建了能够稳定表达可溶性LTB的菌株,并获得初步纯化LTB的方法。为今后LTB的研究及应用奠定了基础。
- 黄思扬马超雷清蒋琳沈心亮王锐
- 关键词：纯化粘膜佐剂
- 戊型肝炎病毒多拷贝重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的体外构建戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,以提高HEVORF2128-660在毕赤酵母中的表达水平。方法采用PCR技术扩增目的基因ORF2128-660(E),然后将ORF2128-660(E)同义点突变为ORF2128-660,构建重组表达质粒ORF212 8-660/p AO815(单拷贝),Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-ORF2128-660)插入去磷酸化的质粒ORF2128-660/p AO815,得到2(AOX-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝)质粒。重复上述方法依次构建3(AOX-ORF2128-660)/p AO815(3拷贝)、4(AOX-ORF2128-660)/p AO815(4拷贝)等多拷贝重组质粒。得到的多拷贝重组质粒电转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,SDS-PAGE分析比较不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果构建了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,表达的目的蛋白相对分子质量约为59 000,4拷贝重组质粒表达水平高于其他拷贝数重组质粒表达水平。结论成功构建了HEVORF2128-660多拷贝表达质粒,提高了其在毕赤酵母中的表达水平。
- 郭敏雷清刘晓蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒毕赤酵母
- 重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析被引量：6
- 2007年
- 目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达,获得CNTF-T突变体。结果:基因序列分析与原设计吻合,目的蛋白表达量占全菌体的35%左右,表达蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性、DEAE-FF纯化,纯度可达95%以上,小鼠体内生物活性测定,能明显抑制小鼠体重增长,且CNTF-T的生物活性比原始序列CNTF的活性高。结论:突变的CNTF-T有望成为新一代的生物减肥制剂应用于临床。
- 应莲芳雷清梁凌宇高雪峰蒋琳
- 关键词：突变体生物活性减肥
- 重组人睫状神经营养因子的聚乙二醇化修饰被引量：2
- 2014年
- 目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体CN10,通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件;采用分子筛层析方式对偶联产物进行初步纯化,最后用ELISA和小鼠体重增长抑制法检测PEG化后的CN10蛋白的生物活性。结果:能运用mPEG-MAL对CN10进行定点修饰,PEG化后用Superdex200能够分离CN10;PEG化后的CN10每2 d腹腔注射1次,对小鼠体重的增长抑制率可达50%,与rhCNTF每天注射2次的体重增长抑制作用相当。结论:CN10蛋白在PEG化修饰后,其减重效应持续时间明显延长。
- 梁凌宇雷清高雪峰杨军应莲芳蒋琳
- 关键词：人睫状神经营养因子纯化
- 戊型肝炎病毒开读框架(ORF2)1.3kb片断巴斯德毕赤酵母表达载体的构建
- 2002年
- 戊型肝炎病毒 (HEV)基因组为单链正股 RNA,整个基因组有 3个开放性阅读框架(ORFs) ,ORF2是主要结构基因编码区 ,将 HEV ORF2 1.3Kb基因与分泌性表达质粒 p HIL - S1和 p PIC9重组 ,构成受醇氧化酶 (AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒 ,酶切线性化后转化入 GS115酵母菌 ,经表型筛选 ,PCR扩增筛选阳性克隆 。
- 张春江沈心亮雷清李启民
- 关键词：戊型肝炎病毒ORF2巴斯德毕赤酵母
- 恶性疟原虫膜蛋白Pfs25在毕赤酵母中的组成型表达被引量：6
- 2011年
- 目的:Pfs25蛋白是传播阻断型恶性疟疾疫苗的侯选抗原,在毕赤酵母中表达Pfs25蛋白,并对表达产物进行鉴定。方法:参照GenBank中公布的pfs25基因序列,通过毕赤酵母喜好密码子分析人工合成目的基因;采取定向克隆策略构建重组表达质粒pfs25/pGAPZαA,经BstXⅠ线性化,电转染法转化酵母菌株GS115,在Zeocin抗性的筛选培养基上获得表达目的基因的pfs25/pGAPZαA/GS115重组酵母菌,SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物;通过在YPD培养基上传代培养和目的基因表达,验证重组菌株的遗传稳定性。结果:在毕赤酵母中表达了Pfs25蛋白,且重组菌株遗传性质稳定。结论:为研制基于Pfs25蛋白的传播阻断型恶性疟疾疫苗奠定了基础。
- 陈勇雷清刘晓马亚茹卜晓萍蒋琳
- 关键词：毕赤酵母组成型表达
- 恶性疟原虫CSP基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：1
- 2016年
- 目的用毕赤酵母表达系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白（CSP）,便于恶性疟疾疫苗的进一步研究。方法根据Gen Bank得到恶性疟原虫7G8的基因序列,选取该序列628~1 194位基因,以密码子最佳化为原则合成基因后构建酵母表达载体CSP/p GAPZa A,电转毕赤酵母菌PDI-GS115,获得酵母重组体。三角瓶规模表达重组菌,获得表达上清。结果经SDS-PAGE电泳、Western blot检测表达上清,均显示有目的蛋白表达。结论在毕赤酵母中实现了CSP基因的表达,为恶性疟疾疫苗的研发作了必要的补充。
- 雷清梁凌宇王爱秀陈俏丽李刚陈勇蒋琳
- 关键词：环子孢子蛋白毕赤酵母基因表达
- 戊型肝炎病毒结构区OFR2基因在毕赤酵母中的分泌型表达被引量：4
- 2002年
- 为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗,利用甲醇营养型酵母Pichia pastoris表达系统表达戊型肝炎病毒（HEV）结构区ORF2 1.3 kb基因。对构建的酵母分泌型表达载体pHIL-S1/HEV和pPIC9/HEV重组体,酶切线性化后转化入GS115酵母菌,经表型鉴定,PCR扩增筛选阳性克隆,对不同表型,不同表达载体的重组株用含甲醇的培养基诱导表达,ELISA及SDS-PAGE筛选表达活性菌株,Western-blot证实表达蛋白与HEVORF2单克隆抗体有特异性反应。得到有效表达HEVORF2蛋白的菌株并初步优化表达条件。
- 张春江沈心亮雷清李启民
- 关键词：戊型肝炎病毒结构区毕赤酵母分泌型表达
- 戊型肝炎病毒基因ORF3编码蛋白在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：4
- 2003年
- 实验以两种不同的表达策略构建了两个以大肠杆菌DE3为宿主的原核表达载体 ,由T7启动子启动外源基因的转录 ,在诱导剂IPTG诱导下成功地进行了戊肝病毒ORF3蛋白的原核表达。并通过SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、竞争抑制法酶联免疫等一系列实验对两种表达产物进行了鉴定和分析。综合分析两种表达结果发现 ,在融合型表达中ORF3蛋白与其融合标签蛋白 (谷胱甘肽S一转移酶 )之间存在免疫交叉反应 。
- 李启明沈心亮蒋琳雷清刘鹏
- 关键词：戊型肝炎病毒融合蛋白
- 鼠疫菌V抗原基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：5
- 2003年
- 从鼠疫杆菌野毒株总DNA中利用PCR方法扩增出V抗原编码基因 ,将此基因克隆到大肠杆菌的表达质粒pET 42b( + )中 ,经IPTG诱导后 ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3)细胞中成功地表达出鼠疫菌V抗原蛋白。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 32 8%。
- 傅林锋王秉翔李启明雷清蒋琳沈心亮
- 关键词：鼠疫菌大肠杆菌克隆
