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陈红星: 作品数：70 被引量：227H指数：9; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>

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连续3步缺口修复技术构建牛αS1酪蛋白-人溶菌酶杂合基因座: 2013年; 目的:构建一个牛αS1酪蛋白调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基因组序列的杂合基因座。方法:采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中,构成能进行3次连续基因抓捕的载体,利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,分别抓捕牛αS1酪蛋白3'端调控序列(9 kb)、hLYZ基因座序列(5 kb)、牛αS1酪蛋白5'端调控序列(20 kb),使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上,形成牛αS1酪蛋白-hLYZ杂合基因座。结果:实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定,验证了hLYZ的基因组序列对牛αS1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论:这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。; 郑芸芸周艳荣吴晓洁林艳丽熊福银李力陈红星; 关键词：人溶菌酶

富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪制备的关键技术研究被引量：7: 2007年; 作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基因小鼠,sFat-1基因能够在转基因小鼠中产生更多更长链的而且更有价值的DHA以及DPA。在确认sFat-1基因功能的基础上,将载体转染到猪胎儿成纤维细胞,利用阳性的细胞克隆通过核移植方式制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪。; 潘登科陈红星冯书堂李奎邓继先; 关键词：多不饱和脂肪酸转基因小鼠克隆猪

连续3步基因抓捕构建牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座: 2011年; 目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。方法:采用连续3步基因抓捕的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行3次基因抓捕的抓捕载体;然后,在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,第一步从含牛αS1酪蛋白基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3'端侧翼序列到抓捕载体上,第二步从人tPA BAC上亚克隆17 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TGA)的人tPA基因组序列,第三步从牛αS1酪蛋白BAC上亚克隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5'端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个长约46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座中,原牛αS1酪蛋白基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被人tPA基因组序列精确置换。结论:连续三步基因抓捕构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了探索性研究。; 吕月蒙吴晓洁周艳荣熊福银林艳丽陈红星; 关键词：细菌人工染色体组织型纤溶酶原激活剂

长链非编码RNA HOTTIP对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响被引量：7: 2015年; 目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXA末端转录本反义RNA(HOXA transcript at the distal tip,HOTTIP)对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法将HOTTIP小干涉RNA(siRNA)及negative siRNA转染He La和C-33A宫颈癌细胞系,通过实时荧光定量PCR(q PCR)技术确认HOTTIP在细胞中表达水平的敲低,采用CCK8及克隆形成实验检测HOTTIP降低表达后对He La和C-33A细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测HOTTIP降低表达后对He La和C-33A细胞增殖及迁移能力的影响,Matrigel细胞侵袭实验检测HOTTIP降低表达后对He La及C-33A侵袭能力的影响。结果向宫颈癌细胞系He La和C-33A中转染HOTTIP siRNA 48 h后,经q PCR检测He La及C-33A细胞中HOTTIP均出现明显下调;CCK8及克隆形成实验结果显示,HOTTIP降低表达能显著抑制He La及C-33A细胞的增殖(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,HOTTIP降低表达能减弱He La和C-33A细胞增殖及迁移能力;Matrigel细胞侵袭实验结果显示,HOTTIP降低表达能减弱He La及C-33A侵袭能力。结论HOTTIP siRNA转染He La及C-33A宫颈癌细胞系能有效降低HOTTIP的表达,同时HOTTIP降低表达后能抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。; 刘芳李立安张欢张唯一吴晓洁郗永义周艳荣陈红星林艳丽; 关键词：宫颈肿瘤细胞增殖细胞运动肿瘤浸润

牛α-sl酪蛋白基因序列指导htPA突变体小基因在小鼠乳腺中的表达被引量：9: 2001年; 将包括α－ｓｌ酪蛋白基因的启动子、ＬＡｔＰＡ小基因、α－ｓｌ酪蛋白基因下游调控序列的融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中，获得了５只转基因阳性鼠，其中１只转基因阳性雌鼠乳清中ＬＡｔＰＡ的含量为０．１８μｇ／ｍｌ，说明构建的ＬＡｔＰＡ小基因能够正确表达出有生物活性的ＬＡｔＰＡ，并且可在酪蛋白基因调控序列的指导下在小鼠的乳汁中表达。; 谭晓红程萱周江陈红星林福玉邓继先杨晓黄培堂; 关键词：组织型纤溶酶原激活剂转基因小鼠乳腺生物反应器 TPA

猪血清白蛋白基因5′端调控区的克隆与分析被引量：1: 2009年; 根据已报道的hsa(人血清白蛋白基因)启动子序列设计了一对引物,以猪的基因组DNA为模板,采用PCR扩增出一条256 bp DNA片段,用Primer Premier5.0和Promoter Scan软件进行分析。结果表明,此序列为psa基因5′-端上游包括启动子在内的调控区,该区域含有一般启动子典型的CAAT-box、TATA-box等基本顺式作用元件。另外,还含有CTF/NF-1、CTF、APF、HNF-1、CP1等转录因子的结合位点。; 李勃熊海燕陈红星邓继先; 关键词：基序上游调控区启动子

人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用被引量：1: 2008年; 目的:研究人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用,并初步确定作用区域。方法:应用免疫共沉淀、GSTpull-down实验验证人Nanog与NAC1的相互作用。结果:人Nanog与NAC1能够相互作用,且NAC1的BTB/POZ结构域对于二者相互作用是必需的。结论:人Nanog和NAC1在体内、外均能形成复合物,二者的相互作用对于人胚胎干细胞的自我更新及肿瘤的发生可能具有重要的作用。; 韩正滨林艳丽熊福银田利源周艳荣邓继先陈红星; 关键词：NANOG GST 免疫共沉淀

表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建被引量：3: 2009年; 目的:构建山羊乳腺特异性表达尿激酶原突变体的重组慢病毒载体,证明其表达的有效性。方法:将劳氏肉瘤病毒增强子/启动子、复制缺陷型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的5'端长重复序列(LTR)、HIV-1ψ包装信号、HIV Rev反应元件、山羊β-酪蛋白调控序列、尿激酶原M13cDNA、ΔU3/3'LTR、牛生长激素(BGH)基因poly(A)依次连接,构建乳腺特异性表达的慢病毒载体,通过体外转染人乳腺癌细胞系MCF-7、中国仓鼠卵巢细胞及泌乳山羊乳腺注射证明其表达有效性。结果:酶切鉴定证实山羊乳腺特异性表达载体构建正确;将该载体转染细胞,采用溶圈法和Western印迹检测证实了其表达的有效性;慢病毒载体注射到泌乳山羊的乳腺,在乳汁中也检测到了尿激酶原的表达。结论:为在转基因动物乳腺中表达尿激酶原突变体奠定了基础。; 于永生罗晓彤吴晓洁周艳荣陈红星邓继先; 关键词：慢病毒载体

连续3步缺口修复构建小鼠乳清酸蛋白-人溶菌酶杂合基因座: 2012年; 目的:构建一个利用小鼠乳清酸蛋白(mWAP)基因座完整的上下游调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基因组序列在乳腺内特异性高效表达的mWAP-hLYZ杂合基因座,实现人溶菌酶的高效表达。方法:采用连续3步缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂序列,构成能够连续进行3次缺口修复的基因抓捕载体。然后在大肠杆菌内利用λ噬菌体Red同源重组系统介导的同源重组方法:第一步,从含mWAP基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆8 kb的mWAP基因3'端完整侧翼序列到抓捕载体上;第二步,从含hLYZ基因的BAC上亚克隆5 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)的hLYZ基因组序列;第三步,从mWAP BAC上亚克隆9kb的mWAP基因5'端完整侧翼序列,并使上述3个片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起。结果:构建了全长约22 kb的mWAP-hLYZ杂合基因座,经PCR扩增、限制性内切酶酶切和序列测定验证,构建的杂合基因座达到原mWAP基因座中mWAP基因组编码序列从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)完全被hLYZ基因组序列精确置换的目的。结论:通过连续3步缺口修复构建杂合mWAP-hLYZ基因座乳腺表达载体,为乳腺生物反应器高效表达人溶菌酶提供了可行的思路和方法。; 邵振鲁吴晓洁林艳丽熊福银周艳荣郑芸芸李金钢陈红星; 关键词：细菌人工染色体乳清酸蛋白人溶菌酶

连续3步缺口修复构建人β肌动蛋白-人凝血因子Ⅶ杂合基因座: 2012年; 目的:为了获得稳定高效表达凝血因子Ⅶ的哺乳动物细胞株,构建一个利用人β肌动蛋白(hACTB)基因座完整的上下游调控序列指导人凝血因子Ⅶ(hFⅦ)基因组序列在人胚胎肾细胞特异性高效表达的hACTB-hFⅦ杂合基因座。方法:采用3步连续缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂,构成能进行3次连续基因抓捕的载体。然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术:第一步,从含hACTB基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆10 kb的hACTB基因3′端完整侧翼序列;第二步,从hFⅦBAC上亚克隆13 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAG)的hFⅦ基因组序列;第三步,从hACTB BAC上亚克隆20kb的hACTB基因5′端完整侧翼序列,并使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上,形成全长约50 kb的hACTB-hFⅦ杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座达到了原来hACTB基因座中hACTB基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ从起始密码子到终止密码子的基因组序列基因组序列精确置换的目的。结论:连续3步缺口修复构建杂合基因座细胞表达载体的技术,将为细胞高效表达大载体的制备提供一种全新的思路和方法。; 张伟张伟林艳丽周艳荣左珊珊吴晓洁熊福银刘芳尤平; 关键词：细菌人工染色体

陈红星

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