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创伤弧菌溶细胞素蓖麻毒素B活性模序的预测、克隆表达和功能鉴定被引量：3: 2013年; 目的研究克隆表达的创伤弧菌溶细胞素（VVC）中的重组蓖麻毒素B（rRicinB）功能模序，明确其功能，进一步阐明创伤弧菌溶细胞素的分子致病机制。方法生物信息学预测VVC中的功能模序，构建pET28a-rRicinB原核表达系统，并通过IPTG诱导表达、三步洗涤、Ni24NTA柱亲和层析法纯化、复性、ELISA检测和激光共聚焦显微镜检测FITC标记的rRicinB与Hela细胞相互作用等。结果通过生物信息学预测到YVC中336～465位氨基酸序列可能存在蓖麻毒素B链的功能模序，克隆表达这段模序后，其相对分子质量为20×103，经ELISA法检测复性后蓖麻毒素抗原性为28．71U／L；Hela细胞经FITC标记的rRicinB作用后其细胞膜表面和胞质均有绿色荧光产生。结论VVC中存在具有类似天然蓖麻毒素B链功能的模序，能与细胞膜表面结合并进入胞质，可能与创伤弧菌溶细胞素膜成孔和细胞毒活性有关。; 王永明谢旦立金疆楼永良; 关键词：创伤弧菌

rVvhA诱导小鼠单核巨噬细胞凋亡的作用及其机制被引量：1: 2010年; 目的研究重组创伤弧菌溶细胞素（rVvhA）诱导小鼠单核巨噬细胞（J774A．1）凋亡的作用及机制。方法MTT法、电子透射电镜、流式细胞仪结合AnnexinV-PI标记法、线粒体膜电位和caspase活性检测等方法测定rVvhA诱导J774A．1凋亡的作用。结果MTT结果显示rVvhA能够抑制J774A．1生长。2．0溶血单位（HU）／ml和3．0HU／ml的rVvhA作用J774A．18h后，透射电镜观察细胞和线粒体形态发生凋亡改变；流式细胞仪检测凋亡率分别为（7．80±0．62）％、（12．33±0．12）％，均高于正常组（3．07±0．67）％；线粒体膜电位也下降，流式细胞仪结果显示绿色荧光率分别是9．8％、39．2％。其中3．0HU／mlrVvhA作用组，caspase-3、9活性增加，并且具有时间依赖性，而caspase-8活性没有明显改变。3．0HU／mlrVvhA加caspase-3抑制剂（Ac—DEVD-FMK）或caspase-9抑制剂（Ac—LEHD-FMK）的凋亡率与3．0HU／mlrVvhA作用组相比都降低，分别为（6．23±3．95）％、（9．60±3．14）％；同时caspase-3、9活性也下降。结论rVvhA具有诱导J774A．1凋亡的生物学活性；其机制可能与依赖caspase的线粒体途径有关。; 王波金疆钟毓红赵志超杨军楼永良严杰; 关键词：创伤弧菌凋亡线粒体

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金疆