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金疆
作品数:
2
被引量:4
H指数:1
供职机构:
温州医学院检验医学院
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发文基金:
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
楼永良
温州医学院检验医学院浙江省医学...
谢旦立
温州医学院检验医学院
钟毓红
温州医学院检验医学院浙江省医学...
严杰
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金疆
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1篇
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创伤弧菌溶细胞素蓖麻毒素B活性模序的预测、克隆表达和功能鉴定
被引量:3
2013年
目的研究克隆表达的创伤弧菌溶细胞素(VVC)中的重组蓖麻毒素B(rRicinB)功能模序,明确其功能,进一步阐明创伤弧菌溶细胞素的分子致病机制。方法生物信息学预测VVC中的功能模序,构建pET28a-rRicinB原核表达系统,并通过IPTG诱导表达、三步洗涤、Ni24NTA柱亲和层析法纯化、复性、ELISA检测和激光共聚焦显微镜检测FITC标记的rRicinB与Hela细胞相互作用等。结果通过生物信息学预测到YVC中336~465位氨基酸序列可能存在蓖麻毒素B链的功能模序,克隆表达这段模序后,其相对分子质量为20×103,经ELISA法检测复性后蓖麻毒素抗原性为28.71U/L;Hela细胞经FITC标记的rRicinB作用后其细胞膜表面和胞质均有绿色荧光产生。结论VVC中存在具有类似天然蓖麻毒素B链功能的模序,能与细胞膜表面结合并进入胞质,可能与创伤弧菌溶细胞素膜成孔和细胞毒活性有关。
王永明
谢旦立
金疆
楼永良
关键词:
创伤弧菌
rVvhA诱导小鼠单核巨噬细胞凋亡的作用及其机制
被引量:1
2010年
目的研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)诱导小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的作用及机制。方法MTT法、电子透射电镜、流式细胞仪结合AnnexinV-PI标记法、线粒体膜电位和caspase活性检测等方法测定rVvhA诱导J774A.1凋亡的作用。结果MTT结果显示rVvhA能够抑制J774A.1生长。2.0溶血单位(HU)/ml和3.0HU/ml的rVvhA作用J774A.18h后,透射电镜观察细胞和线粒体形态发生凋亡改变;流式细胞仪检测凋亡率分别为(7.80±0.62)%、(12.33±0.12)%,均高于正常组(3.07±0.67)%;线粒体膜电位也下降,流式细胞仪结果显示绿色荧光率分别是9.8%、39.2%。其中3.0HU/mlrVvhA作用组,caspase-3、9活性增加,并且具有时间依赖性,而caspase-8活性没有明显改变。3.0HU/mlrVvhA加caspase-3抑制剂(Ac—DEVD-FMK)或caspase-9抑制剂(Ac—LEHD-FMK)的凋亡率与3.0HU/mlrVvhA作用组相比都降低,分别为(6.23±3.95)%、(9.60±3.14)%;同时caspase-3、9活性也下降。结论rVvhA具有诱导J774A.1凋亡的生物学活性;其机制可能与依赖caspase的线粒体途径有关。
王波
金疆
钟毓红
赵志超
杨军
楼永良
严杰
关键词:
创伤弧菌
凋亡
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