赵峰
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：青岛大学医学院生物学系更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究被引量：4
- 2007年
- 目的表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究。方法将表达栽体pMAL-PPA转化入E.coli DH5α构建工程菌,IPTG诱导工程茵大量表达麦芽糖结合蛋白-沙蚕溶栓活性蛋白酶(MBP- PPA),细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Sepharose FF离子交换层析得到了纯化．用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤维蛋白溶酶原激活活性．然后对其部分性质进行了研究。结果构建了表达MBP—PPA的工程菌,经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白,Factor Xa切割融合蛋白后,重组沙蚕溶栓活性蛋白酶(PPA)体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性,性质研究表明PPA热稳定性好,最适pH为8.0,该酶在pH6.0～9.0范围内有较好的稳定性,酶活在有机溶剂中至少维持20d,25 mmol．L^(-1)PMSF能完全抑制其活性。结论证实PPA是一种纤溶酶原激活荆,且将来有望成为一种新型溶栓药物。
- 李荣贵赵峰杨宏杜桂彩汪靖超王斌
- 关键词：沙蚕纯化
- 双齿围沙蚕蛋白酶的纯化及其性质被引量：2
- 2007年
- 目的:纯化双齿围沙蚕(Pednereis aibuhitensis Grube)蛋白酶,并对其性质进行研究．方法:将沙蚕匀浆液先后进行Superdex-75凝胶柱层析、MonoQTM阴离子交换柱层析及SP- Sepharose 4B阳离子交换层析进行纯化．将经过非还原性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白酶电转移至含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中,通过观察明胶的分解来确定电泳条带的蛋白酶活性．对纯化后蛋白酶的最适pH值,热稳定性,最适温度,蛋白酶抑制剂的影响,有机溶剂的稳定性,金属离子对酶活性的影响等性质进行了测定．结果:纯化后得到的一种蛋白酶,还原性SDS- PAGE显示纯化的蛋白酶为两条带,分子量分别为Mr34 900和Mr33 900,而非还原性SDS- PAGE出现了分子量分别为Mr 65 600、Mr 57 900、Mr 43 500的三条蛋白带,明胶蛋白酶活性图谱检测显示酶活性主要在约Mr 66 000处．该蛋白酶具较好的热稳定性,在pH 8-10和20-35℃的情况下有较高活性．PMSF对该酶有较强抑制作用,而有机溶剂对该酶没有明显的影响．结论:该蛋白酶由两个通过二硫键连接在一起的亚基构成,两亚基的分子量分别为Mr 33 900和Mr 34 900;本文所采用的新的明胶蛋白酶活性图谱检测法是一种非常灵敏和有效的蛋白酶活性检测方法．
- 汪靖超赵峰李荣贵王斌
- 关键词：纯化蛋白酶
