蔡惠芬
- 作品数：11 被引量：26H指数：2
- 供职机构：第三军医大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 2型糖尿病患者FOX01 mRNA表达水平的变化及其意义被引量：2
- 2009年
- 目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞(PBMC)中分叉头框(forkhead box,FOX)转录因子-1 mRNA表达水平的变化,了解它在T2DM发病中的作用。方法采用RT-PCR法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法对62例T2DM患者和40例健康人检测PBMC中FOX01 mRNA表达水平。结果T2DM患者PBMC中FOX01 mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.05)。结论T2DM患者的FOX01 mRNA表达较健康对照组表达增加。
- 蔡惠芬史进方顾国浩杨春香
- 关键词：2型糖尿病逆转录多聚酶链反应
- 叉头转录因子1质粒标准品的构建
- 2009年
- 背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多。由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品。目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1mRNA的质粒标准品。设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-11/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。材料:SYBRExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBRPremixExTaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMD18-TVector试剂盒等。方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JM109,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确。抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,最后稀释成梯度标准品。主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性。结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体。各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105～1012)copies/mL。各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%～1.16%。结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品。
- 蔡惠芬史进方顾国浩
- 关键词：荧光定量-聚合酶链反应
- 共信号分子CD40/CD40L质粒标准品的构建
- 2009年
- 背景:目前,对CD40/D40L的研究主要集中在可溶性和蛋白方面,对其在转录水平上的研究文献不多,可能与其无商品化质粒标准品有关。目的:构建检测CD40/CD40L mRNA表达水平差异的标准品。设计、时间及地点:单一样本实验,于2009-04在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。材料:取手术切除的子宫肌瘤组织,经患者知情同意。方法:以手术切除的子宫肌瘤组织细胞的总RNA为模板、Random6mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人CD40/CD40L基因相应的cDNA片断,构建PMD-18-CD40/CD40L重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。主要观察指标:①RNA质量检测结果。②扩增的目的片段电泳结果。③CD40/CD40L基因测序结果。④标准品的扩增情况。结果:组织提取的总RNA完整性良好,构建的CD40/CD40L质粒经PCR扩增后分别得到136bp,200bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.66×1013、2.45×1013copies/mL,倍比稀释至2.0×106copies/mL均能得到良好的标准曲线(R2=1)。结论:实验成功构建了CD40/CD40L基因荧光定量PCR标准质粒。
- 王亮史进方蔡惠芬蒋敏顾国浩
- 关键词：CD40/CD40L荧光定量PCR
- 细胞因子IL-2、IL-4及IL-6质粒标准品的构建
- 史进方蔡惠芬蒋敏顾国浩
- 内参基因β-actin质粒标准品的构建被引量：14
- 2008年
- 为构建检测内参基因β-actin mRNA表达水平差异的标准品,以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random 6 mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA片段,构建PMD-18-β-actin重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好,构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到一186bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.39×1013 copies/mL,倍比稀释至2.0×104copies/mL均能得到良好的标准曲线(R2=1),提示构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功。
- 王玉林史进方蔡惠芬樊一笋顾国浩
- 关键词：内参基因荧光定量PCR
- 共刺激分子B7-H3与临床疾病的研究近展
- 2008年
- 共刺激分子是一类参与免疫反应的辅助性分子,存在T/B细胞、抗原递呈细胞(antigen -presenting cells,APC)和靶细胞表面。与表达在T细胞上相应的受体相互作用后,可为T细胞的活化提供第二活化信号。B7是最重要的共刺激分子,B7-H3是其家族的最新成员,B7-H3 mRNA在人类组织中和细胞株上广泛表达,其生物学功能有正性调节和负性调节两种。B7-H3在临床疾病的发病机制中起着重要的作用,且也是肿瘤免疫治疗的一种重要手段。
- 蔡惠芬张光波史进方顾国浩
- 关键词：免疫T淋巴细胞疾病
- 协同共刺激分子B7-H3在宫颈癌中表达及其临床意义的研究
- 目的：探讨协同共刺激分子B7-H3在宫颈癌中的表达水平及其临床意义。
方法：在体外实验中，采用流式细胞分析技术，RT-PCR及细胞免疫化学技术检测宫颈癌细胞株Siha(鳞癌)和Hela(腺癌)上的B7-H3表达...
- 蔡惠芬
- 关键词：宫颈癌蛋白表达临床病理
- 文献传递
- 宫颈癌组织中B7-H3蛋白的表达变化及其与HPV感染的关系被引量：6
- 2011年
- 目的观察宫颈癌组织中的B7家族同族3(B7-H3)蛋白的表达变化,探讨其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法采用免疫组化SP法检测50例宫颈癌组织肿瘤细胞和血管内皮细胞(宫颈癌组)中及15例子宫肌瘤组织(对照组)中的B7-H3蛋白。采用人乳头状瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒检测两组HPV感染情况。结果宫颈癌组肿瘤细胞B7-H3蛋白阳性41例,内皮细胞B7-H3蛋白阳性为24例;对照组宫颈组织细胞B7-H3蛋白阳性为3例,内皮细胞中无B7-H3表达,两组相比,P均<0.05。宫颈癌组中HPV感染25例;对照组中无HPV感染者。宫颈癌组肿瘤细胞及血管内皮细胞中B7-H3蛋白表达与HPV感染呈正相关(r分别为0.364 4、0.400 3,P均<0.05)。结论宫颈癌肿瘤细胞及血管内皮细胞中B7-H3呈高表达,且与HPV感染有关。
- 蔡惠芬史进方顾国浩卢春冬任玉香吴凤英
- 关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒
- 子宫肌瘤和肌壁组织B7-H3 mRNA表达水平及意义被引量：2
- 2009年
- 目的探讨子宫肌瘤患者肌瘤组织和正常子宫肌壁B7-H3 mRNA的表达水平及其在子宫肌瘤患者发病中的作用。方法利用逆转录多聚酶链反应法和实时荧光定量PCR法检测44例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和正常子宫肌壁的B7-H3 mRNA表达水平。结果子宫肌瘤的肌瘤组织表达的B7-H3 mRNA高于正常子宫肌壁。结论子宫肌瘤组织高表达B7-H3 mRNA,B7-H3 mRNA高表达可能与子宫肌瘤发生发展有关。
- 蔡惠芬史进方顾国浩张光波樊一笋成婧
- 关键词：子宫肌瘤B7-H3实时荧光定量PCR
- 老年原发性非小细胞肺癌患者外周血中CD28/CTLA-4 mRNA含量变化及临床意义被引量：2
- 2009年
- 目的探讨外周血中CD28/CTLA-4 mRNA含量的增龄性改变与老年原发性非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展之间的联系。方法应用实时荧光定量PCR技术对63例老年NSCLC患者外周血单个核细胞CD28/CTLA-4 mRNA的含量进行检测,结果分别与老年健康组、老年肺良性病变组(老年非癌组)、年轻健康组、年轻肺良性病变组(年轻非癌组)以及年轻肺癌组进行对比分析,同时分析它们与临床病理特征之间的关系。结果老年肺癌组外周血中CD28 mRNA含量显著低于其余各组(P<0.01),而CTLA-4 mRNA含量则显著高于其余各组(P<0.01),老年健康组外周血中CD28 mRNA含量明显低于年轻健康组和年轻非癌组,而CTLA-4 mRNA含量则明显高于年轻健康组和年轻非癌组;老年非癌组与老年健康组比较,两者含量差异均无统计学意义。Logistic回归分析显示,年龄、CD28 mRNA含量、CTLA-4 mRNA含量均与肺癌的发生有统计学关联(均P<0.01),且CD28与CTLA-4的mRNA含量具有负相关性(r=-0.400,P<0.01)。另外,CD28及CTLA-4 mRNA的含量均与老年肺癌的临床TNM分期、细胞分化程度以及淋巴结转移状态密切相关(P<0.05,P<0.01),而与病理类型无关(P>0.05)。结论呈增龄性调节的CD28/CTLA-4 mRNA可能在老年人NSCLC的形成和演变过程中发挥着重要的调控作用。
- 潘旭东王翎史进方蔡惠芬蒋敏张光波张学光
- 关键词：非小细胞肺癌CD28/CTLA-4荧光实时定量PCR
