董永生
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：南通市科技局社会发展科技计划项目江苏省社会发展科技计划南通大学自然科学基金更多>>
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- 卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒构建与表达
- 2008年
- [目的]构建大鼠源卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒,进行表达。[方法]以卡氏肺孢子虫DNA为模板,应用PCR扩增MSG基因片段,连接至pGEM-T Easy载体,再克隆至PCDNA3.1(+)载体。构建的重组表达质粒经酶切、PCR鉴定后转染至COS-7细胞,并进行大量增殖。RT-PCR验证转染基因的表达。[结果]重组表达质粒PCDNA3.1(+)/MSG经酶切及PCR鉴定结果表明构建成功。RT-PCR结果显示MSG基因片段成功转染至COS-7细胞,并在其中进行基因表达。[结论]成功构建了PCDNA3.1(+)/MSG重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究打下基础。
- 段义农董永生朱丹丹王建新陈金铃秦永伟
- 关键词：卡氏肺孢子虫真核表达
- 卡氏肺孢子虫MSG抗原片段细胞表位的预测被引量：1
- 2008年
- [目的]预测卡氏肺孢子虫主要表面抗原(MSG)片段的B细胞和T细胞抗原表位。[方法]运用Sig-nalp3.0、EMBOSS等网络服务器推测卡氏肺孢子虫MSG抗原片段的B细胞和T细胞抗原表位,分析预测结果。[结果]MSG抗原片段存在3个潜在的B细胞抗原表位及6个潜在的T细胞抗原表位。B细胞抗原表位在氨基酸序列的位置为69-79、96-101、133-140aa3个区域内或其附近;T细胞抗原表位在氨基酸残基的位置为7-22、28-43、20-35、40-55、53-68、86-101aa。[结论]MSG抗原表位的预测为有目的的克隆基因片段,研究高效的表位疫苗奠定基础。
- 董永生段义农王建新陈金铃秦永伟
- 关键词：B细胞表位T细胞表位
- 卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段的克隆与分析
- 2007年
- 目的建立卡氏肺孢子虫动物模型,体外扩增卡氏肺孢子虫MSG基因部分片段,方法取肺孢子虫肺炎大鼠肺组织制备卡氏肺孢子虫(Pc)DNA,并以此模板扩增MSG基因片段,将PCR产物与pGEM-T-easy载体连接,转化E.coli DH5a,在含氨苄青霉素(Amp)的LB培养基上筛选出重组子,提取重组质粒,并通过PCR、酶切及测序验证,并进行序列比较分析;结果PCR扩增获得长度为554bp的序列,测序结果与报道的基因序列相比,碱基序列完全相同。结论本研究从卡氏肺孢子虫DNA中成功获得MSG基因,MSG基因的克隆,为进一步开展MSG蛋白致病机制、基因工程疫苗等研究奠定基础。
- 陈金铃董永生王建新段义农
- 关键词：卡氏肺孢子虫基因克隆
- 大鼠源卡氏肺孢子菌p55抗原基因克隆和序列分析被引量：6
- 2007年
- 目的克隆大鼠源卡氏肺孢子菌55kDa抗原(p55)基因。方法取肺孢子菌病大鼠肺组织制备肺孢子菌DNA,并以此模板扩增p55基因,将PCR产物与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5a,在含氨苄青霉素(Amp)的LB培养基上筛选出重组子,提取质粒进行PCR扩增、酶切鉴定、序列测定及序列比较分析。结果p55基因体外扩增产物长度为1286bp,重组质粒经PCR及酶切鉴定结果表明获得正确重组子,测序结果与文献报道同源性为99.8%。结论成功扩增了p55基因,并插入克隆载体pGEM-T中。p55基因的克隆为进一步建立基因分型、疫苗等研究打下基础。
- 段义农王建新陈金铃董永生
- 关键词：卡氏肺孢子菌基因克隆
- 替硝唑对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎作用的初步观察被引量：1
- 2006年
- 王建新段义农陈金铃董永生周全蔡云平
- 关键词：卡氏肺孢子虫肺炎替硝唑治疗复方磺胺甲基异恶唑抗卡氏肺孢子虫常用药物免疫功能受损
- 卡氏肺孢子虫p55抗原基因片段原核表达质粒的构建与表达被引量：5
- 2007年
- 目的构建卡氏肺孢子虫p55抗原基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白。方法SD大鼠皮下注射免疫抑制剂地塞米松14周,建立卡氏肺孢子虫大鼠模型。从感染大鼠肺组织中抽提总RNA,RT-PCR克隆p55基因,测序,验证扩增产物。利用定向克隆技术将p55基因片段克隆到载体pGEX-4T-1上,重组质粒经酶切分析、PCR鉴定后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。最后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物。结果克隆的p55基因片段为690bp,重组质粒pGEX-4T-1/690构建成功;SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量(Mr)约为62000,表达产量约占菌体蛋白的11.6%;Western blotting分析结果显示,表达蛋白能分别与谷胱甘肽(GST)抗体、卡氏肺孢子虫感染的大鼠血清发生反应。结论构建了卡氏肺孢子虫p55抗原基因的pGEX-4T-1/690重组质粒,诱导表达的蛋白具有良好的抗原性。
- 王建新段义农陈金铃董永生
- 关键词：卡氏肺孢子虫基因克隆原核表达
