胡立强
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：四川省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 两种表达系统来源新冠病毒RBD蛋白免疫小鼠后的IgG抗体水平对比研究被引量：2
- 2022年
- 当前新冠肺炎疫情仍在全球蔓延,给中国及世界的公共卫生安全和经济发展带来了严峻挑战。SARS-CoV-2病毒入侵机体的关键过程是刺突蛋白受体结合域RBD通过结合宿主细胞ACE2受体实现感染,而此过程与病原快速检测、疫苗以及药物干预等主要抗病毒策略的研究与开发密切相关。因此,本研究旨在比较哺乳细胞和昆虫细胞重组表达来源的新冠病毒刺突蛋白受体结合结构域RBD免疫小鼠后产生IgG抗体水平的变化,评估不同来源和不同剂量抗原的抗体滴度水平和持续时间,希望将有助于疫苗、药物以及病原检测等相关研究。通过SDS-PAGE和质谱技术鉴定出昆虫和哺乳动物细胞表达系统制备的bRBD和hRBD蛋白质的分子量略有差异,主要为糖基化修饰不同所致;流式细胞术检测发现,bRBD和hRBD与ACE2受体过表达细胞结合率分别为88.5%和92.7%,表明二者均具有较好的活性;利用Quick Antibody免疫佐剂通过肌肉注射对Balb/c小鼠进行免疫接种,设置10μg、20μg 2个免疫抗原的剂量,共接种2次,并在初次免疫后第2、4、6、8、12、24周从尾部取血,分离获得血清;酶联免疫吸附结果显示,10μg和20μg的bRBD和hRBD蛋白质免疫均能够快速引起小鼠的免疫反应产生IgG抗体,4~6周抗体滴度达到峰值;2种抗原均具有良好的免疫持久性。2种抗原及2个免疫剂量诱导小鼠产生的抗体滴度无明显差异;血清抗体中和试验发现,bRBD和hRBD蛋白质免疫小鼠后产生的特异性抗体,均能够抑制SARS-COV-2 Spike假病毒对ACE2阳性细胞的感染。这些结果表明,昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统生产的RBD蛋白,通过良好的佐剂接种均能快速引起机体有效的体液免疫应答,产生特异性中和抗体,有望用于各种RBD突变体抗体的制备。
- 胡立强苏涛张勇杨浩陶怡然陶泽
- 关键词：新型冠状病毒刺突蛋白抗体疫苗
- 锌离子对sTRAIL分子聚合状态及肿瘤细胞杀伤活性的影响被引量：2
- 2013年
- 可溶性肿瘤坏死因子相关诱导配体(sTRAIL)因对多种肿瘤细胞具有超强选择性杀伤活性而极可能成为新型抗肿瘤药物。基因工程重组表达sTRAIL过程中缺乏锌离子(Zn2+)可能是导致该蛋白对肿瘤细胞杀伤活性较低的重要原因。本文通过化学合成方法获得了sTRAIL编码基因,将其克隆到pQE30载体中获得了高表达。比较不同Zn2+浓度条件下制备的sTRAIL蛋白分子聚合状态和肿瘤细胞杀伤活性发现,无Zn2+的sTRAIL主要以单体形式存在,活性弱;有Zn2+的sTRAIL主要以同源三聚体形式存在,活性强。这表明Zn2+对维持sTRAIL肿瘤细胞杀伤活性极为重要,有必要在sTRAIL蛋白生产体系中添加适当浓度的Zn2+。
- 胡立强杨浩万琳卢晓风
- 关键词：肿瘤生物治疗生物技术药物
- 探索研究型医院科研实验室的考核方式被引量：1
- 2022年
- 科研实验室是研究型医院创新人才能力培养的基地,医院投入大量人、财、物建设和运行。因此如何科学、有效地进行考核以促进其发展尤为重要,国内研究型医院科研实验室的发展较西方国家略晚,在研究型医院科研实验室的考核评估中,科学客观、准确严谨、定性和定量、长短期结合的评价体系还在不断摸索中。实验室的考核是优化医院资源配置的手段,目的是激励医院科研实验室发展。本文从科研产出、人力投入、空间投入、安全管理四个角度出发细化了各指标的构成、权重以及计算方法,构建形成了完整可靠,且具有较强可实施性的科研实验室考核方式,以供其他研究型医院交流及探讨。
- 李琰曹玥詹兰胡立强黄梦珠黄强
- 关键词：安全管理绩效评估
- 基于高分辨质谱平台的三高平衡茶质量控制分析和研究被引量：1
- 2017年
- 目的对三高平衡茶的质量控制方法进行研究分析,为今后的质控工作提供有价值的参考。方法运用Waters UNIFI平台,对三高平衡茶中杜仲、绞股蓝、甜叶菊、罗布麻、银杏叶、决明子、枸杞子、黄芪8味药材展开定性鉴别,并对处方中可能存在的非法添加化学药物和残存农药进行检测。结果基于高分辨质谱平台建立的鉴别项和检测项可灵敏检测出8味药材成分和各味药材的特征成分,未发现有非法添加化学药物但是检测出有8种农药残留。结论高分辨质谱平台对三高平衡茶的鉴别和检测,方法可靠,灵敏度高、操作简便,可提供有效的用药质量信息,值得关注。
- 郑文王诗盛钟艺胡立强汪睿龚萌
- 关键词：UPLC农残检测
- 基于代谢组学技术的虫草鉴别研究被引量：8
- 2017年
- 目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对不同产地虫草化学成分进行鉴定与比较分析。方法采用超高效液相-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)及多元统计分析技术对实验结果进行分析,并对差异化合物进行鉴定。结果对不同产地的虫草进行了成分鉴定,核苷类物质含量高。不同产地虫草药材在组分种类和相对量上存在着一定的差异。湖南、湖北、丽江的虫草含有其他成分,丽江虫草含有大量的虫草素,湖南虫草含有一些黄酮类物质。采用主成分分析(PCA)将不同产地药材分别聚成不同组别,其中西藏(那曲)、四川、青海之间聚集紧密,而凉山、湖北、湖南及丽江虫草散布在四周,差别非常显著。结论 UPLC-Q-TOF-MS结合多元统计分析方法可为虫草药材的质量评价提供依据。
- 郑文王诗盛钟艺胡立强龚萌
- 关键词：虫草代谢组学核苷类
- 抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较被引量：3
- 2017年
- RC28蛋白是从野生蕈类皱盖罗鳞伞中分离得到的新型抗病毒蛋白。前期通过3'-RACE方法,从皱盖罗鳞伞总RNA中克隆获得包含RC28编码区的c DNA,并通过TA克隆获得质粒p MD18-T-RC28。以该质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增RC28片段,分别插入大肠杆菌表达载体p ET28a(+)和毕赤酵母表达载体p PIC9K中,形成在N端表达组氨酸标签的重组RC28表达粒体。将这两种RC28表达质粒转化各自的宿主菌后,筛选阳性克隆,构建稳定表达体系。诱导表达后,用SDS-PAGE电泳和Western blot分析RC28的表达情况。放大表达体系后用Ni-NTA柱纯化获得RC28蛋白,并用MTT法测试重组表达蛋白质的抗病毒活性。在实验条件下,大肠杆菌和毕赤酵母中均能表达可溶性重组RC28,纯化后蛋白质得率分别是3.5mg/L发酵液及0.2mg/L发酵液。但抗病毒活性实验表明,大肠杆菌体系表达的RC28蛋白活性较差,而毕赤酵母系统表达的RC28蛋白的抗病毒活性与天然蛋白接近。
- 胡立强郑文钟艺杜丹杨浩龚萌
- 关键词：大肠杆菌毕赤酵母表达纯化
- 以公共科研平台及临床学科研究室建设促进医院学科发展被引量：21
- 2020年
- 建立公平可及、高效可靠的公共科研平台,以临床学科或亚专业为导向建设归属临床科室的临床学科研究室,是满足医院不同层次实验需求、有效促进基础研究与临床学科真正结合的关键。以四川大学华西医院为例,介绍了建立不同类型的公共平台,建设归属临床科室的临床学科研究室,培养高素质技术人员,再借助公共平台的技术支持推动临床学科发展的模式。
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- 关键词：学科建设
