米蕊芳
- 作品数：29 被引量：61H指数：4
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- PHA-PEG细胞融合法融合胶质瘤细胞及其在细胞增殖中的作用研究
- 目的 通过PHA-PEG 细胞融合的方法获得胶质瘤融合细胞,进而研究细胞融合在胶质瘤增殖中的作用.方法 通过慢病毒感染分别将胶质瘤C6 细胞标记绿色荧光及红色荧光,通过PHA-PEG 融合方法获得胶质瘤溶瘤细胞,进一步通...
- 米蕊芳金贵善周益强徐恒周程森刘福生
- 多核巨细胞在小鼠黑色素瘤细胞转移中的作用机制研究
- 2013年
- 目的研究多核巨细胞在黑色素瘤转移中的作用及其相应分子机制。方法用聚乙二醇细胞融合法体外获取黑色素瘤多核巨细胞,通过流式分选黑色素瘤多核巨细胞。小鼠皮下及尾静脉注射黑色素瘤多核巨细胞并用游标卡尺测量皮下肿瘤体积,电子天平称重荷瘤肺组织以定量肿瘤转移能力。Affymatrix基因芯片分析差异表达的基因,Ingenuity Pathways Analysis(IPA)软件进行基因功能分析。结果细胞融合并流式分选成功获得黑色素瘤多核巨细胞。黑色素瘤多核巨细胞皮下生长速度减慢但肺转移能力明显增强。黑色素瘤多核巨细胞与转移相关的β-Tubulin组基因表达明显升高。黑色素瘤多核巨细胞的染色体呈现稳定性。结论黑色素瘤多核巨细胞促进黑色素瘤细胞转移能力,黑色素瘤多核巨细胞与转移相关的β-Tubulin组基因表达升高。
- 米蕊芳刘福生金贵善
- 关键词：巨细胞黑色素瘤小鼠
- 胶质瘤-巨噬融合细胞的巨噬细胞极化特征及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力影响的实验研究
- 2024年
- 目的通过建立胶质瘤细胞与巨噬细胞的融合细胞模型,探究胶质瘤-巨噬融合细胞的巨噬细胞极化特征及其对胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响。方法应用小鼠来源的胶质瘤细胞GL261和巨噬细胞RAW264.7构建并筛选GL261xRAW264.7融合细胞。分别培养GL261、RAW264.7、GL261xRAW264.7融合细胞,收集细胞上清获得相应的条件培养基(CM,即GL261-CM、RAW264.7-CM、GL261xRAW264.7-CM)。采用流式细胞术检测GL261xRAW264.7融合细胞的染色体含量及其与RAW264.7细胞的巨噬细胞标志物CD86、CD206的表达量;通过CCK-8、Transwell或划痕实验评估GL261xRAW264.7融合细胞与亲代细胞(即GL261、RAW264.7细胞)增殖、迁移能力的差异,以及GL261xRAW264.7-CM与亲代细胞CM培养的GL261细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异;通过免疫磁珠-流式细胞术检测RAW264.7与RAW264.7xGL261融合细胞分泌巨噬细胞M1型细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-23及M2型细胞因子IL-10、转化生长因子β1(TGF-β)的差异。结果成功构建了GL261xRAW264.7融合细胞,且经流式细胞术证实GL261xRAW264.7融合细胞的染色体含量明显增加(G_(1)和G_(2)/M峰均较亲代细胞右移)。CCK-8增殖实验结果显示,GL261xRAW264.7融合细胞的增殖能力较GL261细胞强,但较RAW264.7细胞弱,差异均有统计学意义(均P<0.05);Transwell实验显示,GL261xRAW264.7融合细胞的迁移能力均较亲代细胞增强,差异均有统计学意义(均P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,GL261xRAW264.7融合细胞与RAW264.7细胞CD206表达率的差异具有统计学意义[(75.80±2.31)%对比(4.72±0.47)%,P<0.001];而CD86表达率的差异无统计学意义[(4.27±0.40)%对比(4.18±0.41)%,P>0.05]。免疫磁珠-流式细胞术检测结果显示,GL261xRAW264.7融合细胞与RAW264.7相比,IL-10、TGF-β表达增多,TNF-α、IL-1β减少,差异均有统计学意义(均P<0.01);而IL-6、IL-23的差异均无统计学意义(均P>0.05)�
- 胡跃东王佩文张梦梦周贤喆刘福生米蕊芳
- 关键词：细胞融合细胞增殖肿瘤相关巨噬细胞
- 血小板源性生长因子B及其基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及意义被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨脑胶质瘤中血小板源性生长因子B（PDGF-B）表达水平及其基因启动子区甲基化程度与肿瘤增殖的关系。方法运用免疫组化检测54例脑胶质瘤中PDGF-B、磷酸化Smad2（P-Smad2）和Ki-67的表达水平；运用焦磷酸测序检测上述54例脑胶质瘤中PDGF-B启动子区甲基化程度。结果（1）PDGF-B表达水平随着病理分级的增高而增多（P〈0．05）；（2）PDGF-B表达分别与Ki-67、P-Smad2表达呈正相关（r=0．839，P〈0．001）（r=0．802，P〈0．001），与PDGF-B甲基化水平呈负相关（r=-0．817，P〈0．001）；（3）在低级别和高级别胶质瘤中，PDGF-B甲基化水平的差异具有统计学意义（P=0．001）。结论PDGF-B甲基化水平越低，其蛋白表达越高，则胶质瘤恶性程度及增殖活性越高。
- 周益强金贵善米蕊芳董程远张晋刘福生
- 关键词：神经胶质瘤基因甲基化焦磷酸测序血小板源性生长因子B
- 细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力被引量：3
- 2012年
- 目的研究细胞融合在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法用聚乙二醇细胞融合方法融合黑色素瘤细胞,通过流式分选获得稳定的融合细胞。体外培养及细胞计数检测融合细胞的增殖速度。Affymatrix基因芯片分析差异表达的基因,IPA软件进行基因功能分析。Western blot检测细胞蛋白。结果 PEG化学融合法成功获得稳定的黑色素瘤融合细胞,其体外增殖速度明显减慢(P<0.01)。黑色素瘤融合细胞与增殖相关的PI3K-AKT通路明显下调(P<0.01)。融合细胞phospho-S6蛋白表达明显降低。结论细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力。
- 米蕊芳潘春晓卞晓翠田文嘉宋利强
- 关键词：细胞融合黑色素瘤增殖
- 荧光探针及流式分选法追踪胰腺癌细胞增殖的研究被引量：2
- 2016年
- 目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺癌全基因组突变文库细胞增殖;并于一定的时间点,应用流式分选法分选增殖速度减慢细胞群;通过CCK-8法检测分选前后的细胞增殖曲线。结果 CFSE探针可均匀染色胰腺癌细胞,呈现较强的绿色荧光;在CFSE荧光探针染色后的不同时间点(0、48、96及144h),胰腺癌细胞荧光强度呈现逐级衰减趋势;应用细胞饥饿法对细胞进行同步化后,细胞呈现更好的同步化衰减趋势;在一定的荧光衰减时间点(144h),通过流式分选从细胞突变文库中获得了胰腺癌增殖减慢细胞群;CCK-8实验显示,相对于分选前的细胞,分选出的荧光强度强的胰腺癌细胞群增殖速度明显减慢(P=0.006)。结论 CFSE荧光探针可很好追踪胰腺癌细胞增殖,结合流式分选法可获得肿瘤突变文库中的增殖减慢细胞群。
- 米蕊芳潘春晓张俊文刘福生金贵善
- 关键词：胰腺癌荧光探针
- 荧光素酶标记胶质瘤细胞模型的构建及其在溶瘤病毒治疗中的应用被引量：1
- 2022年
- 目的:构建荧光素酶标记的患者来源胶质瘤细胞模型,并探讨其在溶瘤1型单纯疱疹病毒(oHSV-1)及溶瘤腺病毒(oAD)治疗中的应用。方法:显微镜下观察前期建立的患者来源胶质瘤细胞(命名为U022细胞)的形态特征;通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光实验对患者来源U022细胞进行鉴定;通过CCK-8实验测定细胞增殖曲线(n=4);通过慢病毒感染及嘌呤霉素筛选方法获得携带荧光素酶标记的患者来源U022细胞,设置阴性对照组和荧光素酶慢病毒感染组;通过活体成像系统(IVIS)及CCK-8实验测定oHSV-1和oAD对患者来源U022细胞的作用,根据不同的病毒感染复数(0、0.001、0.01、0.1、1、10,每组n=4)的梯度进行分组。结果:患者来源U022细胞符合胶质瘤细胞的形态特征;细胞增殖曲线分析显示,U022细胞增殖较快,细胞倍增时间为19.2 h;进一步行免疫荧光实验显示U022细胞中GFAP呈阳性表达。经嘌呤霉素筛选成功获得荧光素酶标记的胶质瘤细胞(U022-luc),并且荧光素酶发光实验显示细胞的荧光强度随着细胞数量的增加而增强,呈线性正相关(R2=0.97,P<0.001)。IVIS生物素发光实验及CCK-8实验检测显示,oHSV-1和oAD均对U022-luc细胞有显著的毒性作用,并且随着滴度的增加,病毒的作用加强(均P<0.01);当病毒感染复数等于10时,oHSV-1对U022-luc细胞的抑制率分别为(68.77±5.96)%和(66.27±4.89)%,而oAD对U022-luc细胞的抑制率分别为(64.34±3.13)%和(69.73±4.87)%。结论:体外可成功构建荧光素酶标记的患者来源胶质瘤细胞模型;该细胞模型可应用于oHSV-1和oAD治疗的定量研究中。
- 胡跃东张梦梦张俊文米蕊芳
- 关键词：溶瘤病毒荧光素酶溶瘤腺病毒
- SiRNA干扰BTN3A3对脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究被引量：1
- 2020年
- 目的探讨采用siRNA干扰嗜乳脂蛋白亚家族成员A3(BTN3A3)对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法实验采用胶质瘤细胞株(HS683、U251)以及原代胶质瘤细胞,均设立阴性对照组(NC组)以及转染不同序列siRNA的Si-1组(转染1序列)和Si-2组(转染2序列)。应用蛋白质免疫印迹方法分析不同胶质瘤细胞株、小胶质细胞株(HMC3)中BTN3A3的表达情况。通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流术细胞术分析各细胞株中细胞凋亡的变化情况。分离培养手术切除的脑胶质瘤组织,获得原代胶质瘤细胞后,采用蛋白质免疫印迹方法分析原代细胞中BTN3A3的表达水平;通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流式细胞术分析原代细胞的细胞凋亡变化情况。结果 BTN3A3在HS683(1.12±0.03)和U87-MG细胞(1.08±0.05)中的表达水平显著高于HMC3细胞(0.66±0.02)(均P<0.01)。U251细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.11±0.01、0.12±0.01,均低于NC组(0.21±0.01)(均P<0.01);HS683细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.77±0.03、0.78±0.04,均低于NC组(1.01±0.03)(均P<0.01)。敲减BTN3A3后,与NC组相比,HS683细胞的早期凋亡比率(NC组:31.6%,Si-1组:53.7%,Si-2组:63.3%)、U251细胞的晚期凋亡比率(NC组:10.4%,Si-1组:18.9%,Si-2组:26.5%)升高。BTN3A3在原代胶质瘤细胞中的表达水平高于HMC3细胞(分别为0.75±0.07和0.55±0.06,P<0.05)。采用siRNA敲减后,原代胶质瘤细胞中BTN3A3的表达水平降低(NC组:0.90±0.01,Si-1组:0.44±0.01,Si-2组:0.49±0.02,Si-1组和Si-2组与NC组相比,均P<0.01),晚期细胞凋亡比率升高(NC组:12.3%,Si-1组:22.6%,Si-2组:18.2%)。结论采用siRNA干扰BTN3A3可促进胶质瘤细胞株、原代胶质瘤细胞的凋亡。
- 张梦梦张俊文米蕊芳金贵善刘福生
- 关键词：神经胶质瘤细胞凋亡
- VP22-CD基因工程化载体对胶质瘤细胞体外杀伤作用的研究
- 2016年
- 目的构建CD以及VP22-CD基因工程化载体，并探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法利用聚合酶链式反应（PCR）得到CD以及VP22基因片段；利用In—fusion基因克隆方法将得到的基因片段插入到pEGFP—N1载体中，构建CD以及VP22-CD基因工程化载体；利用脂质体转染的方法将构建的基因工程化载体转染到胶质瘤细胞c6及U87细胞中，并通过体外光镜及荧光显微镜观察转染率；利用MTT比色法评价加入前药5-氟胞嘧啶后对转染后胶质瘤细胞的杀伤率。结果（1）将CD基因或VP22-CD融合基因插入到pEGFP—CD载体中，构建得到pEGFP—CD以及pEGFP—VP22-CD载体。（2）pEGFP—CD及pEGFP—VP22-CD载体可转染入c6或U87胶质瘤细胞，转染率分别为2．5％和3．7％以及2．0％和4．1％。（3）在c6或U87细胞中转染pEGFP—CD或pEGFP-VP22．CD载体并加入前药5．氟胞嘧啶后，细胞的存活率分别为（30．36±0．63）％和（11．75±1．01）％以及（28．78±3．62）％和（18．26±2．27）％，与转染pEGFP—N1组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（4）在C6或U87细胞中加入前药5-氟胞嘧啶后，转染pEGFP—VP22-CD组与转染pEGFP—CD组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论CD／5-FC系统在体外对恶性胶质瘤细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应；并且穿梭蛋白VP22可进一步促进系统对细胞的杀伤作用。
- 米蕊芳金贵善张俊文周益强徐恒周程森刘福生
- 关键词：神经胶质瘤CD/5-FC系统旁观者效应
- 人脑胶质瘤干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨体内外原代培养的人脑胶质瘤干细胞（GSCs）与胶质瘤新生血管内皮细胞的关系。方法新鲜高级别（WHOⅢ级、Ⅳ级）的人脑胶质瘤标本经原代培养获取GSCs，免疫组化法检测其肿瘤干细胞及干细胞标记物Nestin的表达；鉴定后的GSCs经低氧诱导，免疫荧光法检测其诱导分化后内皮细胞标记物CD31、CD144和胶质瘤细胞标记物GFAP的表达，RT—PCR和Western—blot法检测其CD31的表达；建立胶质瘤干细胞皮下荷瘤裸鼠模型，免疫组化技术检测模型中人来源的CD31的表达。结果（1）悬浮生长的胶质瘤干细胞球样细胞经免疫组化鉴定Nestin表达阳性；（2）低氧诱导后的GSCs能够表达CD31、CD144，有些细胞能够同时表达CD144和GFAP；（3）RT—PCR检测发现GSCs在诱导前后都有CD31mRNA的表达，而Western—blot检测到只有诱导后的GSCs有CD31蛋白的表达；（4）胶质瘤干细胞荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中部分微血管抗人CD31抗体染色阳性。结论胶质瘤干细胞不仅在体外低氧条件下可分化为内皮细胞，在体内微环境条件下同样可分化为血管内皮细胞，并参与胶质瘤新生组织的血液供应。
- 聂秀涛金贵善米蕊芳张国滨谢坚曹泽周益强董程远刘福生
- 关键词：胶质瘤干细胞内皮细胞低氧诱导
