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石睿
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
第二军医大学长征医院
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相关领域:
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周辉
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2009
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腺病毒介导的RNA干扰对大肠癌HCT116细胞株β-连环蛋白表达的抑制作用
被引量:1
2009年
目的构建针对人β-连环蛋白(catenin)的腺病毒载体pAdHl-shβ-catenin—GFP,应用RNA干扰(RNAi)的方法,观察其在体内和体外对人大肠癌细胞株HCT116生长的抑制作用。方法设计合成针对B—catenin的shRNA,并克隆至腺病毒表达载体AdH1-GFP上,制备针对β—catenin的腺病毒载体AdH1-GFP—shβ-catenin—GFP,与腺病毒骨架载体共转染293A细胞包装病毒,采用空斑法测定病毒滴度为5×10^9pfu/ml,感染HCT116细胞。应用Westernbolt和报告基因检测HCT116细胞B—catenin表达水平和转录活性,噻唑蓝(MTT)比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线,建立软琼脂克隆形成实验观察肿瘤体外成瘤能力,同时建立裸鼠HCT116细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对β-catenin基因的RNAi腺病毒表达载体,与AdH1-GFP组比较AdH1-shβ、catenin—GFP组在感染24h和48hHCT116细胞β-catenin表达水平和转录活性显著降低,细胞的增殖和克隆形成能力则下降50%(P〈0.01)。体内实验表明重组腺病毒载体介导的β—cateninshRNA明显抑制肿瘤生长(P〈0.01)。结论腺病毒介导的RNAi技术可有效降低β—catenin在大肠癌细胞中的表达水平,抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。
周辉
王伟军
胡志前
石睿
蔡清萍
关键词:
大肠癌
RNA干扰
Β连环蛋白
腺病毒
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