田亚平
- 作品数：79 被引量：319H指数：10
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程医药卫生更多>>
- 云芝发酵产胃蛋白酶抑制剂的反应机理探讨
- 2009年
- 目的:对一种从云芝发酵液中提取得到的胃蛋白酶抑制剂的动力学性质和反应机理进行研究。方法:采用Lineweaver-Bunk双倒数法和UltroGelACA-54凝胶过滤法。结果:实验证明抑制剂为胞内产物,其成分是蛋白质,分子量为23 100Da,Ki值为0.996μmol/L。结论:抑制剂对胃酶的抑制类型属于非竞争和反竞争混合型抑制模式,它与胃酶结合作用的方式可能是在酶的活性基团形成氢键并封锁酶与底物的结合部位。
- 刘琦田亚平
- 关键词：云芝动力学反应机理
- 重组人血管抑素生产菌培养基优化的研究被引量：2
- 2004年
- 用正交试验对血管抑素生产菌株E .colipQE32 AGN的发酵培养基成分进行了优化 ,优化后的合成培养基组成为 :无水葡萄糖 1% ,(NH4) 2 SO40 .4 % ,NaCl0 .2 % ,KH2 PO40 .3% ,K2 HPO42 % ,MgSO40 .0 1% ,盐酸硫胺素 0 .4mg/L ,核黄素 0 .1mg/L ,盐酸吡哆醇 0 .6mg/L ,D 泛酸 0 .3ml/L ,硫酸亚铁 30mg/L ,硫酸锂 30mg/L ,硫酸锰 2 5mg/L ,醋酸锌 2 0 mg/L ,硫酸铝 9mg/L ,优化后的生物量达到 9.0g/L以上 ,比采用LB培养基培养的生物量提高了一倍多。同时 ,优化培养基对工程菌目的蛋白的表达、溶解及复性未产生不利影响。
- 邵玲莉周楠迪金坚许正宏田亚平
- 关键词：血管抑素高密度发酵正交试验复性
- 重组人血管抑素(rhAGN)包涵体变性与复性初探被引量：2
- 2005年
- 在优化的培养条件下,进行rhAGN5L罐发酵,菌体干重由原摇瓶发酵的3.02g/L增加到8.06g/L,表达量依然稳定在35%;对所产生的包涵体进行溶解变性研究,确定较佳变性缓冲液组成为8mol/L尿素,50mmol/LTrisHCl,20mmol/LDTT,pH值8.0;凝胶过滤色谱复性效果相对较好,蛋白浓度4.28μg/ml(IC50)时对HEMC细胞的抑制活性达50.1%。
- 田亚平邵玲莉金坚
- 关键词：包涵体复性
- 食品级高产亮氨酸氨肽酶重组Bacillus subtilis的构建和发酵优化被引量：4
- 2020年
- 为解决枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在发酵产亮氨酸氨肽酶(leucine aminopeptidase,LAP)需额外添加抗生素的问题,该研究构建了1株食品级产LAP重组B.subtilis。首先通过Cre/lox系统敲除B.subtilis 168基因组中D-丙氨酸消旋酶基因(dal)得到缺陷型菌株BS168(dal)^-。其次使用高斯组装的方法构建以dal作为标记基因的质粒pMA5-lap-dal(Amp^R,Ori)-并转化至BS168(dal)^-中得到食品级重组菌BS168(dal)-/p MA5-lap-dal(Amp^R,Ori)^-。该工程菌发酵产LAP无需添加抗生素且不含抗性基因。对该菌株进行5 L发酵罐条件优化,在转速300 r/min、温度33℃、p H 7.0、分阶段补料的条件下,酶活最高达到302 U/m L。结果表明,构建的食品级重组B.subtilis产LAP具有潜在的工业应用前景。
- 张大伟刘德华黄钦钦田亚平
- 关键词：枯草芽孢杆菌发酵优化
- 酶解大豆蛋白产天冬氨酸蛋白酶抑制剂的研究
- 2012年
- 本文通过采用可控酶解的方式酶解大豆蛋白获得了一种源自大豆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂SAPI(soyaspartic proteinase inhibitor)。酶解液经过DEAE-52阴离子交换层析、Superdex Peptide 10/300 GL凝胶层析、SOURCE 15RPC反相层析分离后最终比抑制活力为254.2 IU/mg,纯化倍数为62。SAPI对胃蛋白酶(3000U)半数抑制浓度IC50为25.67μg/mL,有良好的热稳定性,属于一种非竞争性抑制剂。
- 张国强田亚平
- 关键词：酶解大豆蛋白天冬氨酸蛋白酶抑制剂
- 耐热赖氨酸氨肽酶菌株筛选、鉴定及基因克隆被引量：7
- 2014年
- 从土壤中筛选得到一株氨肽酶产生菌,经生理生化和分子生物学鉴定被命名为铜绿假单胞杆菌NJ-814(Pseudomonas aeruginosa NJ-814)。在已考察知其所产氨肽酶是一种耐热赖氨酸氨肽酶的基础上,运用PCR技术从基因组中克隆获得该氨肽酶基因(kap),构建其表达载体pET-28a-kap,并最终实现在大肠杆菌BL21(DE3)中部分融合表达。kap基因全长1 500 bp,编码499个氨基酸。氨基酸序列同源性分析发现,其与脱叶链霉菌和糖多孢红霉菌的同源性较高。通过生物信息学方法对其理化性质和功能分析以及kap在大肠杆菌中实现异源表达,将为进一步研究该氨肽酶的耐热机制及功能创造基础。
- 吴延涛丁国伟席宏星田亚平
- 关键词：铜绿假单胞杆菌基因克隆
- 云芝发酵产天冬氨酸族蛋白酶抑制剂的研究
- 以胃蛋白酶为靶酶,筛选得到液体深层发酵天冬氨酸族蛋白酶抑制剂较好的菌株一云芝(Coriolus venicolor).单因素试验结合响应面分析法优化得最适培养条件：发酵温度为26℃,发酵时间为120h,搅拌频率为170r...
- 马亚敏田亚平
- 关键词：云芝蛋白酶抑制剂液体深层发酵响应面分析法
- 快速检测金黄色葡萄球菌的一种氮源的酶解优化策略被引量：4
- 2018年
- 以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用复合蛋白酶酶解法优化调整一种牛肉浸粉的成分,为开发快速检测病原菌的培养基配方提供参考。建立液体摇瓶培养OD_(600)值和平板培养法菌落统计相结合的评价方法,筛选蛋白酶的组合和水解控制条件,考察和分析不同酶解产物对金黄色葡萄球菌的生长作用影响的一些规律。在底物浓度12%,自制复合蛋白酶加酶量200 U/g,pH 7.5,50℃,酶解1 h条件下,比较几种不同细菌生长曲线发现,酶解产物对金黄色葡萄球菌有明显的促进生长作用,且对冷冻负伤的该菌有显著性的复原能力。最优酶解条件下的牛肉浸粉,可以使得其中的多肽和游离氨基酸成分分布达一定的状态,这个状态下多肽分子量集中在小于500 Da,其中分子量小于170 Da高达31.79%,其中的支链氨基酸含量较高时,更有利于促进金黄色葡萄球菌的生长。
- 龙婧李婷婷王全林田亚平
- 关键词：金黄色葡萄球菌复合蛋白酶促生长
- 耐热赖氨酸氨肽酶毕赤酵母表达及培养条件优化被引量：1
- 2018年
- 为实现耐热耐氨酸氨肽酶的异源表达,通过PCR扩增技术从Pseudomonas aeruginosa NJ-814基因组中克隆获得耐热的赖氨肽酶基因(PLAP),构建重组载体p PIC9K-PLAP,并最终实现在毕赤酵母GS115中的分泌表达。对重组毕赤酵母进行初步筛选,单因素实验优化获得重组毕赤酵母最佳诱导条件如下:诱导培养基初始pH为5.0、甲醇质量浓度1.5 g/dL、诱导温度28℃、装液量25 mL/250 mL、Co^(2+)浓度50μmol/mL、山梨醇添加量9 g/L。在最优条件下,氨肽酶酶活提高了5.2倍,比酶活2.74 U/mg。实验结果表明:PLAP基因已成功转入毕赤酵母GS115并获得表达。
- 刘强田亚平
- 关键词：铜绿假单胞杆菌培养条件优化
- 双酶法酶解豌豆蛋白制备高抗氧化多肽的研究被引量：11
- 2013年
- 以水解度及DPPH自由基清除能力为指标优选出1398中性蛋白酶和胰蛋白酶分步酶解豌豆分离蛋白,所得豌豆蛋白水解产物(pea protein hydrolysate,PPH)中相对分子量小于2 KDa的多肽占77.07%,对DPPH的半清除浓度(IC50)为3.01 mg/mL;PPH经Sephadex G-25凝胶层析和两次RESOURCETM3RPC反相层析纯化获得高抗氧化活性峰,经反相层析鉴定为层析纯,当浓度在0.2 mg/mL时,对DPPH的清除率达到62.03%,与同浓度下的谷胱甘肽对DPPH的清除率相近(66.82%)。
- 张秋萍田亚平
- 关键词：豌豆蛋白抗氧化肽
