王继兵
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
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- 环孢素A对人Tenon’s囊成纤维细胞增殖及TGF-β_1分泌的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞 (HTFs)增殖及其转化生长因子 β1 (TGF β1 )分泌的影响。方法 以体外培养的人HTFs为实验对象 ,分别加入 0 0 0 1～ 10 μg/mLCsA作用 48h ,细胞计数观察CsA对细胞增殖的影响。收集 0 0 0 1～ 5 μg/mLCsA处理后细胞培养上清液 ,采用ELISA方法检测细胞TGF β1 的分泌量。光镜及透射电镜观察细胞的结构变化。结果 CsA在 0 1～ 10 μg/mL范围内以质量浓度依赖方式抑制人HTFs的增殖 ,IC50 为0 5 5 μg/mL ,并在 0 0 1～ 5 μg/mL范围内刺激细胞TGF β1 的分泌。CsA作用后细胞形态学改变的主要特征为胞浆内大量空泡形成。结论 一定质量浓度的CsA可能通过直接的细胞损伤作用在促进TGF β1 分泌的同时仍显著抑制人HTFs的增殖。
- 王继兵张晓敏康凤英杨连洲
- 关键词：环孢素A成纤维细胞转化生长因子-Β1
- HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究被引量：4
- 2006年
- 目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。
- 王继兵葛坚段山刘炳乾郑建樑
- 关键词：旁观者效应TENON囊成纤维细胞
- 单纯疱疹病毒胸腺激酶基因系统抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究单纯疱疹病毒胸腺激酶(HSV-tk)基因系统对人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)增殖的抑制作用及其作用机制。方法构建含HSV-tk基因的逆转录病毒载体pL(tk)SN并转入包装细胞系PT67进行病毒包装,G418筛选抗性克隆并扩大培养收集病毒上清,测定病毒滴度。透射电镜观察鉴定病毒颗粒;聚合酶链反应(PCR)技术鉴定tk基因在病毒基因组中的整合。用病毒感染HTFs细胞,G418筛选并扩大培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫印迹法检测tk基因的表达;加不同浓度前药更昔洛韦(GCV)后,以MTT法检测tk基因对HTFs细胞增殖的抑制作用;采用Hoechst33258染色及流式细胞仪检测凋亡细胞;电镜观察细胞形态学改变。结果酶切鉴定结果显示成功构建了逆转录病毒载体pL(tk)SN,电镜下包装细胞产生的病毒颗粒呈椭圆形,直径约100nm;病毒基因组中,PCR扩增出了tk基因;测得病毒滴度为4×107cfu/ml;被转染的HTFs细胞,用RT-PCR及免疫印迹法检测到tk基因在mRNA与蛋白水平均有表达;HSV-tk-GCV系统对HTFs细胞增殖的抑制作用表现为剂量依赖性,5×10-3g/L的GCV作用5d可将细胞全部杀死,IC50为6×10-4g/L,HSV-tk-GCV系统对HTFs细胞的杀伤机制表现为坏死与凋亡,凋亡率随GCV浓度的升高而增加。结论HSV-tk基因系统能有效抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖,作用机制表现为细胞的坏死与凋亡。(中华眼科杂志,2006,42:212-217)
- 王继兵葛坚刘炳乾黄冰魏雁涛
- 关键词：单纯疱疹病毒属胸苷激酶更昔洛韦成纤维细胞
