王文东
- 作品数：32 被引量：59H指数：5
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生交通运输工程更多>>
- 吉林大学涉农学科SCIE收录论文的统计分析被引量：1
- 2018年
- 为客观评价吉林省涉农高校科研生产力水平和研究现状,本文采用文献计量学方法,以SCIE收录吉林大学涉农学科论文为研究对象,针对吉林大学农学部近10a SCIE收录的涉农科技论文数量、类型、合作机构、研究方向、期刊来源、被引频次等指标进行统计与分析,旨在为本校涉农学科建设及科学研究提供一个可以量化的客观评定依据。
- 王重阳王文东
- 关键词：统计分析
- Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及高效表达
- 2010年
- 通过PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中扩增出Stx1A基因序列,并将之与编码LHRH的基因序列连接起来,构建编码Stx1A-LHRH的重组融合基因片段,并定向克隆到表达质粒pET28a的NcoⅠ和EcoRⅠ位点之间,构建重组表达质粒pET28a::stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对重组菌株用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明重组菌株表达出了23700的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%。为了将来更好的进行目的蛋白的功能研究,本研究再将融合基因片段克隆到表达质粒pMAL-p2x中实现了重组蛋白的可溶性表达,表达的重组蛋白经amylose亲和层析柱一步纯化后纯度可达93.4%,为下一步进行重组蛋白的活性分析及其生物学作用研究奠定了基础。
- 王文东刘军孙洋祝令伟郭学军周博冯书章
- 关键词：志贺毒素LHRH
- 鲤鱼白细胞介素10(IL-10)基因cDNA克隆及序列分析(英文)
- 2012年
- [目的]获取鲤鱼全长IL-10(interleukin 10)cDNA,并对其序列进行分析。[方法]利用DD-RTPCR(differential display RT-PCR)方法获得差异表达IL-10cDNA片段,以地高辛标记做为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IL-10全长cDNA,并对该序列进行序列分析和同源性比较。[结果]鲤鱼全长IL-10cDNA共1117bp,包含55bp的5’端非编码区,一个540bp的编码179个氨基酸的开放阅读框及522bp的3’端非编码区。其中,3’非编码区包含3个mRNA不稳定基序"ATTTA";该蛋白序列具有IL-10家族的典型序列特征;序列同源性比较表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼IL-10基因同源性为89.1%。[结论]该试验为进一步研究IL-10在体内的表达方式、功能特点、调控机理及其在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。
- 冯祥汝陈义龙赵晓王文东张俊辉杨振国孙真贾生美卢强
- 关键词：WORDSCARPSEQUENCE
- 猪链球菌2型新毒力相关基因lin缺失菌株的构建被引量：6
- 2010年
- 利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458Δlin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染试验表明,接种ZY458菌株的家兔体质量下降,出现明显的临床症状,5只家兔4d内全部死亡;而458Δlin感染组家兔生长正常,未出现任何明显临床症状。结果表明,lin基因是猪链球菌2型新发现的一种毒力相关基因,在猪链球菌2型的致病过程中具有重要作用。
- 李鹏刘军祝令伟齐翀周博孙洋纪雪刘爽王文东冯书章
- 关键词：猪链球菌2型毒力因子
- 维氏气单胞菌脂蛋白Lpp基因缺失株的构建及其部分生物学特性分析被引量：1
- 2020年
- 为了探究维氏气单胞菌毒力因子脂蛋白的致病机制,在全基因测序的基础上,通过同源重组缺失脂蛋白基因。首先扩增脂蛋白基因的上下游同源臂,通过重叠PCR连接后,凝胶回收DNA片段;连接克隆载体pMD18-T,转化DH5α感受态细胞,测序成功后提取质粒进行双酶切,连入相同酶切的Pre112自杀性质粒;依次转化DH5α-λpir、WM3064感受态细胞,作为供体菌;和受体菌野生株进行同源重组,并筛选鉴定。结果显示,成功缺失了维氏气单胞菌脂蛋白基因。生物学特性分析结果发现,缺失株和野生株的生长速度相似,生物膜形成能力降低,鞭毛缺失,游动能力减弱,细菌的毒力降低,溶血活性没有明显变化。因此,成功构建了维氏气单胞菌脂蛋白基因缺失株,并分析了其部分生物学特性,为进一步研究脂蛋白基因的功能奠定了一定的基础。
- 宋格格盛天鸽张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：维氏气单胞菌基因缺失
- 出血性大肠杆菌O157菌壳的制备研究被引量：4
- 2010年
- 目的利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备出血性大肠杆菌O157∶H7菌壳,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法利用PCR技术扩增得到噬菌体PhiX174裂解基因E并克隆到质粒pBV220中,将重组质粒导入出血性大肠杆菌O157∶H7。重组菌株O157∶H7(pBV220::E)培养温度从28℃突升至42℃,每20min检测菌液OD600值,绘制重组菌株生长曲线。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌壳结构。结果获得了PhiX174裂解基因E全长基因及重组质粒,构建了大肠杆菌的重组菌株。重组菌菌液OD600值在温度突升至42℃后40min后开始显著下降,80min后OD600值趋于平稳。细菌的裂解效率为98.4%。电子显微镜观察显示,经诱导后,O157∶H7细菌内容物可以通过细菌表面的孔道流出,从而形成菌壳。结论本研究成功制备了大肠杆菌O157∶H7菌壳,为将来进一步研究O157菌壳的特性奠定了基础。
- 刘爽刘军周博王文东李鹏祝令伟纪雪冯书章
- 关键词：出血性大肠杆菌
- 抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因被引量：6
- 2009年
- 以猪链球菌2型四川分离强毒株458#为检测子,国际参考无毒菌株1330#为驱动子,用抑制性消减杂交方法寻找其基因组水平的差异。采用3种不同的限制性内切酶分别酶切458#与1330#基因组获得3套酶切片段,经消减杂交后构建猪链球菌2型强毒株458#特异DNA的差异文库,并对差异序列进行比较分析。结果表明,试验获得了3套差异文库共计42个特异性差异片段,所有差异片段均与已发表的猪链球菌2型05ZYH33株全基因组序列高度同源。构建了具有代表性的猪链球菌2型强毒株与国际无毒参考菌株基因组差异DNA文库,差异片段通过Blast比对,部分差异片段与已知功能基因如转座子、耐药基因、I型限制酶修饰系统、表面蛋白和毒力相关蛋白等有同源性,尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或假定蛋白,其中可能包括与猪链球菌2型毒力相关的基因,为进一步分析猪链球菌2型可能的毒力相关基因奠定了基础。
- 齐翀刘军祝令伟王文东孟福强冯书章
- 关键词：猪链球菌2型抑制性消减杂交毒力相关基因
- 鲤胸腺素Tβ全长cDNA的克隆与序列分析
- 2010年
- 应用荧光DDRT-PCR从鲤外周血白细胞克隆了鲤胸腺素β(thymosinβ,Tβ)基因cDNA全序列。序列分析表明,TβcDNA全长528bp,其完整的读码框架位于40～178bp,编码46个氨基酸,5'非编码区长39bp,3'非编码区长为348bp,且具有Poly(A)加尾信号(AATAAA),将该基因序列递呈GenBank,注册序列号为AY457946。氨基酸序列同源性分析显示,鲤Tβ氨基酸序列与鲤Tβa、斑马鱼Tβa及斑马鱼Tβ-2同源性均为84%。在系统发生树上,鲤Tβ与鲤、斑马鱼、白斑狗鱼和鲑Tβa及斑马鱼Tβ2聚类。
- 丰培金王文东李伟何江帅张俊辉杨振国卢强
- 关键词：白细胞
- 出血性大肠杆菌0157菌壳的研究
- 究利用PCR技术扩增得到噬菌体PhiX174裂解基因E并克隆到质粒pBV220中，将重组质粒pBV220：：E转入出血性大肠杆菌0157：H7，并利用温度变化诱导裂解基因E的表达。重组菌株0157：H7(pBV220：：...
- 刘爽刘军周博王文东李鹏祝令伟纪雪冯书章
- 文献传递
- 鲤鱼γ-2β干扰素基因组DNA克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 试验参考鲤鱼γ-2β干扰素(interferonγ-2β,IFNγ-2β)全长cDNA序列,在其两侧非翻译区和外显子设计2对引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得了IFNγ-2β的全长基因DNA序列。结果表明,获得的基因组DNA全长2084bp,GenBank登录号为JX181981,序列分析结果显示该基因进化较保守,和其他物种一样都含有4个外显子和3个内含子,各外显子碱基数与哺乳动物中相对应的外显子碱基数基本相同,且外显子、内含子剪接位点均遵守GT-AG规则。
- 陈义龙孙真贾生美冯祥汝王文东张俊辉杨振国卢强
- 关键词：鲤鱼克隆
