王志华
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PD-L1胞外域密码子优化及原核表达纯化
- 2021年
- 目的获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析。结果在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16℃,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白。结论成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA适体提供实验基础,为通过DNA/RNA适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路。
- 方宇吕舰王志华
- 关键词：PD-L1原核表达密码子优化SELEX
- 人食管癌中缺失基因片段的分离和鉴定被引量：9
- 1997年
- 目的克隆食管癌缺失的基因。方法采用简化的基因组消减杂交方法，从食管癌细胞系ＥＣ８７１２和ＥＣ８７３３中分离缺失的ＤＮＡ片段。继用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ技术检测这些片段在２０对食管癌及其癌旁组织标本中的缺失。结果获得７条食管癌细胞系缺失的基因片段，分别命名为１２Ｈ１、１２Ｈ２、３３Ｈ３、３３Ｈ４、１２Ｂ１、３３Ｂ２和３３Ｂ３。克隆测序后确定１２Ｈ１为５１２ｂｐ，１２Ｈ２为４２８ｂｐ，３３Ｈ３为５０９ｂｐ，３３Ｈ４为３５５ｂｐ，１２Ｂ１约为６８０ｂｐ（部分测序），３３Ｂ２为５１９ｂｐ，３３Ｂ３为４２５ｂｐ。同源性比较发现１２Ｈ１与３３Ｈ３互补同源，且与人基因组中定位于４Ｐ一新的核苷酸序列９８％同源。３３Ｈ４与定位于人１７号染色体上的α卫星序列８７％同源。１２Ｂ１与人Ｌ１家族中具有转座功能且带有开放阅读框的成员９０％同源。１２Ｈ２、３３Ｂ２和３３Ｂ３在基因库中尚无同源序列。这些片段在食管癌组织中的缺失频率为２０％～６０％，癌旁组织中为１０％～２０％。结论３３Ｈ４可能伴随食管癌中关键基因的缺失而缺失，１２Ｂ１通过转座作用抑制肿瘤的发生，而１２Ｈ１／３３Ｈ３、１２Ｈ２、３３Ｂ２和３３Ｂ３为食管癌的候选抑癌基?
- 侯萍王志华徐昕王秀琴王明荣
- 关键词：食管肿瘤抑癌基因缺失基因DNA片段
- 人肺腺癌细胞分化相关基因cDNAs的克隆被引量：2
- 1997年
- 在用10^(-5)mol/L全反式维甲酸(RA)诱导人肺腺癌细胞系GLC-82分化的基础上,以M13噬菌粒pSPORT1为载体,应用定向克隆技术,分别构建了未经RA诱导和RA诱导1d及4d细胞的3个cDNA文库.以含重组子的诱导文库单链DNA为靶标(Target)同未诱导文库的cDNA驱除子(Driver)进行消减杂交,富集RA特异性单链DNA,将富集的单链DNA回复为双链后转化感受态菌,建立细胞诱导分化过程中活化表达基因的cDNA消减文库,得到124个cDNA消减克隆.经同源性分析和与文库总cDNA作Southern印迹杂交,进而与RA诱导前后细胞的RNA作Northern印迹杂交,筛选出2个(RA5,RA28)诱导后呈早期瞬时表达和1个(RA42)呈早期并持续表达的cDNA克隆,cDNA全长分别为1.8,1.5和0.7kb.序列测定及初步功能分析结果表明,RA5,RA28和RA42这3个首次报道的序列,可能是人肺腺癌细胞分化相关基因的cDNA克隆.
- 黎伯铨雷薇王志华张雪艳蔡岩王秀琴吴旻毛宝龄
- 关键词：腺癌分化相关基因CDNA克隆
- mTORC2与心血管疾病的研究进展被引量：1
- 2022年
- 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)是由哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为主要成分组成的复合体,mTOR是细胞生长和代谢的中央控制器,可调控细胞生长和代谢。mTORC2可通过作用于多个下游靶点调控多条信号通路,参与不同疾病的发生发展,在心血管疾病中具有重要作用。mTORC2参与自噬、免疫炎症、血管收缩以及线粒体稳态的调控,其表达下调可抑制代偿性肥厚,加速病理性心肌肥厚的发展;Rictor基因沉默以及mTORC2功能缺失导致心脏损害、寿命缩短甚至胚胎死亡;而在衰老过程中,激活mTORC2可诱导自噬并保持心脏功能。
- 方宇王志华
- 关键词：心肌肥厚缺血性心肌病心脏衰老
- 应用基因组消减杂交分离缺失基因
- 1996年
- 应用基因组消减杂交分离缺失基因侯萍，王志华，王秀琴，吴旻分离恶性肿瘤中特异缺失基因和重排基因是当前肿瘤研究中一大热点。常用的定位克隆（ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ）策略在人力、物力和时间上要求均高，不是普通实验室所能承担的。近几年来发展起来的基...
- 侯萍王志华王秀琴吴旻
- 关键词：缺失基因基因组消减杂交
