对HBV 4th WHO IS 10/266(NIBSC)国际标准品稀释液进行选择和评估,筛选出稳定的对定值结果影响最小的稀释液,为PCR实验室标准品常规稀释提供理论基础和实验依据。通过选用不同浓度的稀释液,将国际标准品稀释成梯度,应用乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒进行准确度和最低检测限验证。准确度验证每个稀释度重复检测6次;最低检测限验证每个稀释度重复检测20次;根据准确度和最低检测限的对比测试结果筛选出最优的稀释液,同时用筛选出的稀释液分别将企业参考品Q2稀释至线性范围内各浓度,每个浓度重复检测2次,以理论值为Y值检测值为X分别进行线性拟合(Y=aX+b)。结果:第一,10%小牛血清①和小牛血清②以及50%阴性血浆②和100%阴性血浆①稀释后检测结果与理论值最接近,△Log均小于0.1;第二,10%稀释度的小牛血清和阴性血浆稀释后的检测下限全部检出,50%稀释度的阴性血浆①和阴性血浆②符合95%的检出限,而原倍的只有阴性血浆①和1x TE全部检出。第三,对筛选后的稀释液稀释的企业参考品各浓度样本进行核酸定量检测,以理论值为Y值检测值为X分别进行线性拟合(Y=aX+b),结果显示a值均介于1.00±0.05之间,R2都大于0.98,线性关系良好,没有显著差异。通过实验数据的对比分析,10%小牛血清作为稀释液,对国际标准品定值影响最小稳定性最好,可作为实验室WHO标准品稀释液。
