- 一种快速灵敏检测小分子RNA的方法
- 本发明公开了一种快速灵敏检测小分子RNA的方法，属于分子生物领域，包括以下步骤：（1）提取、纯化待检测小分子RNA；（2）探针设计：探针用生物素或地高辛进行标记；（3）液相杂交：将所述待检测小分子RNA与所述探针在缓冲液...
- 王胜华毛强詹诚
- 文献传递
- 液相杂交快速检测特异DNA
- 2013年
- 检测特异DNA片段的方法中,传统Southern blot技术由于其高度可重复性及能够显示条带大小的特性,一直是DNA检测的"黄金标准"。但是杂交时间长,步骤复杂,放射性污染等问题亟待解决。为了简化Southern blot,研究使用了一种液相杂交快速检测DNA的方法,即使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP掺入探针后,在溶液中与待检测DNA样本42℃下杂交,然后琼脂糖凝胶电泳检测荧光杂交信号。利用质粒为模板,优化了探针制作、杂交液组成、杂交时间和温度等参数。在FITC-dUTP:dTTP比例为1∶3、模板质粒浓度为50μg、1×杂交缓冲液(25mmol/LTris,10mmol/L EDTA,8mmol/L Nacl,PH=8.0)中95℃变性5～9 min和42℃杂交3h的实验条件下,可检出1.2μg的质粒,探针灵敏度为7.3ng/μl。这种方法不需要转膜,曝光,大大节约了时间,简化了操作,荧光检测也为该方法同时检测多色样本提供了可能,可广泛应用于核酸检测。
- 詹诚毛强王胜华陈放
- 关键词：SOUTHERNBLOTDNA检测
- 快速简便的杂交检测DNA(英文)被引量：2
- 2014年
- Southern杂交作为黄金标准,已广泛运用于DNA的检测上。但是,经典的southern杂交和近年来一些DNA检测方法存在放射性污染,操作繁琐,耗时,对实验仪器设备要求高等问题。本文利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP合成DNA探针建立了快速检测DNA的液相杂交方法。该方法包括探针制备、液相杂交、电泳分离和信号检测四个步骤,并在此基础上对FITC-双链和FITC-单链探针的杂交效果作了比较。结果显示,使用FITC标记的两种探针都能取得良好的实验结果,但单链探针较双链的检测灵敏度高;双链DNA探针可以检测出0.8μg(3.64×10-13 mol)的质粒,而单链DNA探针可以检测出0.38μg(1.82×10-13 mol)的质粒DNA,在检出效率上是前者的2.1倍。整个检测过程操作简便,可在3h内完成,可较好地解决了其他DNA检测方法存在的费时费力的问题。
- 毛强耿天龙王胜华
- 关键词：SOUTHERN杂交DNA检测荧光
- 一种快速灵敏检测小分子RNA的方法
- 本发明公开了一种快速灵敏检测小分子RNA的方法，属于分子生物领域，包括以下步骤：（1）提取、纯化待检测小分子RNA；（2）探针设计：探针用生物素或地高辛进行标记；（3）液相杂交：将所述待检测小分子RNA与所述探针在缓冲液...
- 陈放李佛生毛强詹诚唐琳
- 文献传递
