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尺寸排阻色谱柱上尿素梯度复性全长人PPAR-γ被引量：4: 2010年; 建立尺寸排阻色谱柱上尿素梯度复性全长人PPAR-γ重组蛋白的方法。利用尺寸排阻色谱柱上尿素梯度除去变性剂直接复性变性蛋白。添加尿素和精氨酸抑制聚集以提高复性产率,加入Zn2+促进变性蛋白形成正确折叠。复性后,重组蛋白的尺寸排阻色谱保留体积增大;紫外光谱最大吸收波长从234.0nm变为280.8nm;基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析重组蛋白的完整性,测得分子量与理论值一致;放射配体受体结合饱和实验测得解离常数(Kd)为89±4nmol/L;复性产率为52.7%。结果表明本文所建立的方法能成功用于复性变性全长人PPAR-γ,获得可用于结构和功能研究的具有生物学活性的全长人PPAR-γ蛋白。; 李伟张雪梅郑晓红段雯余瑜; 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体复性紫外光谱

可溶性hPPARγ-LBD重组蛋白的制备及功能表征: 癌症是人类最难攻克的顽症之一。目前临床上的抗肿瘤药物均存在毒性大、选择性差等问题,为此,开发高效低毒的抗肿瘤药物具有十分重要的意义。近年来,国内外针对抗肿瘤药物的研究正从传统的细胞毒性抗肿瘤药物转向针对肿瘤...; 段雯; 关键词：重组蛋白; 文献传递

1—氯甲基—1，2，3，4—四氢异喹啉的合成: 以β—苯乙胺为原料,经酰化反应,Bischler—Napieralski反应后得1—氯甲基—3,4—二氢异喹啉,再经硼氢化钾还原得到1—氯甲基—1,2,3,4—四氢异喹啉,总收率64.8%。; 陈洁忠郑小红段雯余瑜; 关键词：硼氢化钾; 文献传递

基于脂代谢靶点蛋白hPPARγ-LBD的抗肿瘤药物筛选模型的研究: 2010年; 目的:建立一种以脂代谢靶点蛋白hPPARγ-LBD重组蛋白进行抗肿瘤药物筛选的方法。方法:采用pReceiver-B01-PPARγ-LBD表达质粒转至E.coliBL_(21)(DE_3)细胞,进行表达与纯化得到可溶性靶点蛋白hPPARγ-LBD重组蛋白,以罗格列酮为hPPARγ-LBD的阳性配体,以GW9662作拮抗剂,采用分子排阻色谱-高效液相色谱法(SEC-HPLC)测定hPPARγ-LBD重组蛋白与配体药物的结合活性。结果:在优化条件(16℃、0.6mmol/LIPTG、诱导20h)下,能可溶性表达hPPARγ-LBD重组蛋白;经镍亲和色谱纯化后,以每升LB培养基计可获得41mg、纯度为95%的hPPARγ-LBD重组蛋白;该重组蛋白与罗格列酮特异性结合率约65%,K_d值为625nmol/L;与德氮吡格(Tetrazanbigen,TNBG)特异性结合率约60%,K_d值为1000nmol/L。结论:本文基于脂代谢靶点蛋白hPPARγ-LBD建立了抗肿瘤药物体外筛选模型的方法,该方法快速、稳定、安全及简便,能应用于抗肿瘤药物的筛选。; 段雯李伟靳红卫夏铸程训官张昕宇郑小红余瑜; 关键词：脂代谢抗肿瘤药物药物筛选模型罗格列酮德氮吡格

全长人PPAR-γ的表达、纯化与结构确证: 2010年; 目的建立表达、纯化结构完整的全长人PPAR-γ的方法。方法构建pReceiver-B01-PPAR-γ质粒并转化E.coli BL21(DE3)细胞,诱导表达重组蛋白,优化细胞生长条件;利用亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化重组蛋白;胶内酶解重组蛋白,用离子阱质谱仪分析二维Agilent HPlC-Chip纯化的酶解片段;基于MS/MS搜索IPI、Swiss-Prot、NCBInr和MSDB数据库,鉴定重组蛋白。结果在优化的细胞生长条件(TB介质、37℃、0.8 mM IPTG、诱导3 h),从每升TB中可获得280 mg重组蛋白;两步纯化后,获得176 mg、纯度为95%的均质重组PPAR-γ蛋白;经质谱分析和搜索蛋白质数据库,获得均匀地分布在整个PPAR-γ多肽链中的33个阳性肽段,覆盖率为60%,表明重组蛋白为结构完整的全长人PPAR-γ。配体结合活性位点S289、H323、H449和Y473无突变,保证全长人PPAR-γ与配体结合的生物学活性。结论本文所建立的方法能成功用于大量表达结构完整的全长人PPAR-γ,有利于进一步的结构、功能研究和活性配体的筛选。; 李伟杨晓兰胡雪原郑晓红段雯夏铸余瑜; 关键词：纯化

1-氯甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐的制备被引量：9: 2009年; 很多含有1，2，3，4-四氢异喹啉结构的化合物都具有生物活性，如抗血吸虫、抗肿瘤、抗病毒等。1-氯甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐（1）是合成抗血吸虫药吡喹酮（praziquantel）的重要中间体，也可用于制备具有抗肿瘤活性的3-epi-jorumycin和抗呼吸道病毒感染的1-苯氧甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉类衍生物，其合成关键在于异喹啉的环合。; 陈洁忠郑小红段雯张昕宇余瑜; 关键词：氯甲基盐酸盐抗肿瘤活性生物活性病毒感染

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段雯