李克宇
- 作品数：13 被引量：29H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡源志贺菌IpaC基因的克隆及原核表达
- 本研究对鸡源志贺菌IpaC基因进行了克隆、重组表达与鉴定及蛋白纯化。首先,应用PCR方法从志贺菌毒力大质粒中扩增出大小为1092 bp的目的基因,与国内外发表的10株人源志贺菌IpaC序列进行同源性分析、结果表明鸡源志贺...
- 苗银萍蒋大伟许兰菊王川庆尤晓楠李克宇
- 关键词：克隆蛋白纯化
- 文献传递
- 河南省部分地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究被引量：17
- 2015年
- 为了解河南省鸡场大肠杆菌的流行情况,对采自周口、商丘、安阳等6个地区的腹泻鸡病料进行病原的细菌学检验和药敏试验,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、血清学试验和动物试验,共分离鉴定出11株鸡大肠杆菌,有5种血清型,分别为O14、O15、O24、O143、O157。动物试验结果表明,分离鉴定出的这5种血清型大肠杆菌均有致病性,且毒力不同,其中从周口、开封、鹤壁分离的菌株毒力强,死亡率均为100%。药敏试验结果表明,大部分菌株对链霉素、阿莫西林/棒酸敏感,对头孢唑啉、强力霉素、氨苄西林、磷霉素、呋喃妥因均存在不同程度的耐药现象,其中对强力霉素、氨苄西林、头孢唑啉严重耐药。
- 张彬韩志霞马金玉王雪云许兰菊李克宇
- 关键词：大肠杆菌耐药性
- 不同鸡源志贺菌分离菌株药敏试验研究
- 对河南省不同地区的鸡源志贺菌进行耐药性测定,本研究采用K-B纸片扩散法对34株不同的鸡源志贺菌进行药敏试验.结果显示:所有分离菌对每种抗生素的耐药率在1.76％(4/34) 97.06％(33/34)之间,平均耐药率为5...
- 蒋大伟苗银萍李克宇许兰菊
- 关键词：菌株分离纸片扩散法
- 鸡腹泻病原菌的分离鉴定及药敏试验研究被引量：2
- 2012年
- 为了对来自河南省部分地区的腹泻病(死)鸡进行病原确诊及了解病原对药物的敏感性,恰当采集动物病料进行细菌常规分离鉴定和药敏试验。结果共鉴定出5株鸡白痢沙门氏菌和17株鸡源志贺氏菌。分离的志贺氏菌中,痢疾Ⅰ型5株,痢疾Ⅱ型3株,鲍氏多价1株,福氏多价1株,其余7株尚未定型。每株沙门氏菌和志贺氏菌对试验鸡的致病性不同,沙门氏菌发病率为40%～80%,死亡率为10%～20%;志贺氏菌发病率为30%～100%,死亡率为0～90%。药敏试验结果显示:5株鸡白痢沙门氏菌对阿莫西林、氨苄西林、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率均为80%(4/5),对罗红霉素、甲氧苄啶和四环素的耐药率高达100%(5/5);但对头孢唑啉、头孢曲松、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为80%(4/5)、80%(4/5)、80%(4/5)、100%(5/5)、100%(5/5)。多数志贺氏菌对四环素、甲氧苄啶、罗红霉素耐药,耐药率分别为82.35%(14/17)、88.24%(15/17)、100%(17/17);而对头孢唑啉、头孢曲松、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为88.24%(15/17)、94.12%(16/17)、94.12%(16/17)。由此可见,在临床上可选取庆大霉素、头孢曲松和阿米卡星作为防治鸡腹泻病的首选药物。
- 苗银萍蒋大伟许兰菊张光辉尤晓楠李克宇
- 关键词：腹泻志贺氏菌沙门氏菌药敏试验
- 鸡源志贺菌IpaC基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
- 2016年
- 为使IpaC基因表达产物保持天然的生物学活性,实现在酵母表达系统中高效表达,本研究在不改变IpaC蛋白氨基酸序列的情况下,根据酵母密码子偏爱性优化合成IpaC#基因,分别构建真核表达载体pGAPZαA-IpaC和pGAPZαA-IpaC#,然后将线性化重组质粒电转化至毕赤酵母X-33中,对阳性转化子用SDS-PAGE及Westernblot检测其表达产物。结果表明,经SDS-PAGE及Westernblot检测,仅在pGAPZαA-IpaC#/X-33重组菌表达产物菌体沉淀中检测到大小为70ku的目的蛋白,实现了鸡源志贺菌IpaC#基因在毕赤酵母中的胞内表达,从而验证毕赤酵母表达系统与外源基因序列的相关性,为进一步提高鸡源志贺菌IpaC基因在毕赤酵母中的高效表达提供科学依据,对研究该病的发病机制具有重要意义。
- 韩志霞马金玉王雪云蒋大伟刘芳许兰菊李克宇
- 关键词：毕赤酵母真核表达
- 鸡志贺菌IpaC蛋白及其菌体灭活苗的免疫效果研究
- 志贺菌病是由志贺菌属细菌引起的一种肠道传染性腹泻，是夏秋季节最常见的肠道传染病之一。该病流行广泛，危害严重，可感染人及多种动物，引起发病甚至死亡，危害人类的健康，并给我国养殖业造成巨大的经济损失。因此，对该病的防治以及生...
- 李克宇
- 鸡源志贺菌IpaC基因的克隆及原核表达
- 本研究对鸡源志贺氏菌IpaC片段进行了基因克隆、重组表达和蛋白纯化.应用PCR方法从志贺氏菌毒力大质粒中扩增出大小1092bp的lpaC基因.与国内外发表的10株人源志贺氏菡IpaC序列的同源性分析表明,其核苷酸序列的同...
- 苗银萍蒋大伟许兰菊王川庆李克宇尤晓楠
- 关键词：克隆蛋白纯化
- 利用免疫沉淀法对鸡源志贺菌IpaC蛋白受体候选蛋白的初步筛选被引量：1
- 2016年
- 为筛选鸡源志贺菌IpaC蛋白的受体。利用生物素标记试剂盒标记IpaC蛋白，分离培养原代鸡肠上皮细胞和。利用ProteoExtract？天然膜蛋白提取试剂盒提取鸡肠上皮细胞的膜蛋白；应用免疫沉淀、免疫磁珠法分离富集与IpaC蛋白结合的蛋白质；利用SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果获得了与IpaC蛋白特异性结合的大约在34000～55000之间的蛋白条带。筛选得到的SDS-PAGE蛋白条带进行LC—MS／MS测序鉴定和生物信息学分析。初步将annexin A2，37000 Laminin receptor precursor，LIM and SH3 proteinl，ras—related protein Rab-43作为IpaC蛋白受体的候选蛋白。为研究志贺菌在鸡体内的致病机制奠定基础，而且可以为评估鸡源志贺菌在公共卫生方面的重要性提供参考依据。
- 韩志霞刘芳蒋大伟许兰菊孔江南李克宇
- 关键词：免疫沉淀受体
- 鸡源志贺菌不同分离株的血清型鉴定
- 蒋大伟苗银萍李克宇张彬王雪云许兰菊
- 关键词：细菌抗原凝集试验血清型
- 鸡源志贺菌IpaC基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2013年
- 应用PCR方法从ZMD-01株鸡源志贺菌中扩增IpaC目的基因,并将IpaC基因克隆至载体pET32α（＋）中,构建原核表达载体pET32α（＋）-IpaC,然后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达并优化表达条件,最后进行目的蛋白的可溶性鉴定及Western-blot鉴定。结果显示,扩增出大小为1 092bp的IpaC基因,与10株人源志贺菌参考株的核苷酸序列同源性为97.3%~99.8%、氨基酸序列同源性为96.4%~99.7%;进化树结果显示,与参考株AL391753相似性较大,它们在同一个分支上;SDS-PAGE结果显示,重组表达菌在约63 000处出现条带,最佳表达条件确定为诱导前培养3h、IPTG终浓度为1.0mmol/L、加入IPTG诱导4h;蛋白既存在上清中也存在包涵体中,上清蛋白纯化后纯度可达90%以上;Western-blot分析显示,融合蛋白有反应原性。以上结果表明,鸡源志贺菌IpaC基因与人源志贺菌有较高的同源性;成功表达了IpaC蛋白,为今后研究鸡源志贺菌IpaC蛋白参与的致病机制奠定基础。
- 苗银萍蒋大伟许兰菊王川庆尤晓楠李克宇
- 关键词：克隆
