公共文化服务平台

施建华: 作品数：23 被引量：80H指数：6; 供职机构：南通大学更多>>; 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

合作作者

姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用被引量：6: 2007年; 目的：观察姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞NO的产生及iNOS表达的影响。方法：用脂多糖（200ng／m1）刺激小胶质细胞株BV的同时用不同浓度姜黄素进行干预，应用MTT方法检测细胞活性；硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的含量；Western—blot及免疫细胞化学染色方法检测iNOS蛋白的表达。结果：姜黄素在2．5～20μmol／L范围内对细胞活性无影响；脂多糖作用24h后，NO释放量明显增加，iNOS蛋白表达明显增强；使用姜黄素干预后，浓度在10μmol／L时可以显著抑制脂多糖激活的小胶质细胞NO的产生和iNOS蛋白的表达。结论：姜黄素能够有效抑制脂多糖激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达以及NO的产生。; 杨开艳顾建兰施建华沈勤; 关键词：姜黄素脂多糖小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶

葡萄糖摄入/代谢异常、O-GlcNAc糖基化与老年性痴呆: 刘飞钱慰施建华靳娜娜尹晓敏顾建兰

TAK1在胶质细胞iNOS表达中的作用机制被引量：1: 2005年; 目的:研究探讨中枢胶质细胞在炎症反应过程中,转化生长因子β(TGFβ)-激活性激酶1(TAK1)诱导iNOS表达的作用机制。方法:通过在胶质细胞株中瞬时转染TAK1和它的激活蛋白因子(TAK1-b ind ing prote in1TAB1),或与iNOS启动子报告基因(iNOS-Luc)质粒及NFκB-Luc质粒共转染。结果:TAK1明显激活iNOS的表达活性。而且当使用下游激酶p38 MAPK,JNK和NFκB的抑制剂(SB203580,SP600125和CAPE)后,这些表达活性明显被抑制。结论:在胶质细胞内,TAK1在p38 MAPK,JNK和NFκB信号传导途径介导的iNOS的转录表达活性中起着非常重要的作用。; 沈勤施建华殷冬梅顾建兰张然; 关键词：MAPK 胶质细胞 NFΚB 信号传导

阿尔茨海默病人脑中激活的钙蛋白酶负调控CREB活性: 刘飞龚成新施建华IngeGrundke-IqbalKhalidIqbal

糖元合成酶激酶3β对微管相关蛋白tau的磷酸化作用被引量：13: 2007年; tau蛋白是中枢神经系统中重要的微管相关蛋白,其功能受磷酸化调节.异常过度磷酸化的tau蛋白是阿尔茨海默病患者脑中神经纤维缠结的主要组成部分.糖元合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)是重要的tau蛋白激酶之一,它虽可催化tau蛋白多个位点的磷酸化,但对不同位点,其催化效率不同.通过位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体,用免疫印迹技术,检测GSK-3β对tau蛋白位点特异性的磷酸化作用及动力学.用双倒数作图,计算GSK-3β催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值,并结合培养细胞中的实验,研究GSK-3β对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性.结果显示,GSK-3β催化tau蛋白多个位点的磷酸化,其中包括Thr181、Ser199、Ser202、Thr205、Thr212、Thr217、Thr231、Ser396和Ser404,对不同的位点磷酸化作用,其Km值不同,GSK-3β对Ser396的Km值最低,即对Ser396位点的亲和性最高,催化其磷酸化的能力最强.在培养的细胞中,也显示了GSK-3β的表达引起Ser396位点的磷酸化最明显.; 刘飞施建华丁绍红尹晓敏; 关键词：TAU 磷酸化

iNOS基因在胶质细胞中转录激活机制初探: 2005年; 目的:通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶:组成激活型MAPK激酶3(MKK3b)和MAPK激酶6(MKK6b),进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制。方法:MKK3b或MKK6b与接有荧光素酶(luciferase,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS-Luc);cAMP反应元件(CRE-Luc)和核因子κB(NFκB-Luc)联合转染C6胶质细胞株。结果:MKK3b/MKK6b能引起iNOS-Luc的激活,并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。MKK可以诱导cAMP反应元件(CRE-Luc)介导的和核因子κB(NFκB-Luc)依赖的转录活性。显性抑制型(dominantnegative,dn)CRE结合蛋白(dnCREB)和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)都是p38MAPK的靶向作用目标。结论:转染这两种转录因子产生相反的影响:dnCRE增强了iNOS-Luc的表达,而dnC/EBP则引起抑制作用,对CRE-Luc也具有相同的影响。; 沈勤张然施建华殷冬梅顾建兰; 关键词：P38MAPK 核因子胶质细胞联合转染

O-GlcNAc糖基转移酶表达下调对tau蛋白磷酸化的影响: 2008年; 目的:以人O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对HEK293T细胞中OGT基因表达的抑制作用,以及这种抑制作用对tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响。方法:根据人OGT基因序列特点,设计高效且特异性强的siRNA。用脂质体转染siRNA进入HEK293T细胞,通过实时PCR检测siRNA对OGT基因表达的抑制。用蛋白免疫印迹法检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化。结果:设计的siRNA能够有效抑制OGT基因的表达,与空白组相比,抑制效率可达78.1%左右。OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高。结论:tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在阿尔茨海默尔病的发生发展中起关键作用。; 杨江勇施建华沈勤; 关键词：TAU蛋白 RNA干扰

p38MAPK介导的胶质细胞iNOS的转录激活机制被引量：7: 2005年; 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶级联反应系统参与胶质细胞中iNOS的合成.通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶,MAPK激酶3(MKK3)和MAPK激酶6 (MKK6 )表达质粒,进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制.MKK3或MKK6表达质粒与接有荧光素酶(luciferase ,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS Luc)联合转染C6星形胶质细胞株引起iNOS Luc的激活,并且使细胞因子诱导的iNOSmRNA的表达增强.这两种效应都能够被p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80所抑制.MKK3 6也可以诱导核因子κB(NFκB Luc)依赖的转录活性.这些分子水平的研究结果为p38MAPK信号级联传导途径在调节大鼠胶质细胞中iNOS基因转录激活中的重要作用,包括转录因子NFκB的作用提供了证据.通过阻断iNOS表达或NO的生成,抑制细胞炎症发生,为防治神经细胞炎症反应性疾病提供实验依据.; 沈勤张然吴扬施建华

蛋白激酶A催化微管相关蛋白tau磷酸化的研究被引量：3: 2006年; 目的:研究蛋白激酶A(PKA)对微管相关蛋白tau的磷酸化作用。方法:采用免疫印迹技术,利用位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体,检测PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性及磷酸化作用动力学。用双倒数作图,计算PKA催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值,并结合培养细胞的实验,研究PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性。结果:PKA催化tau蛋白在Ser214,Ser262,Ser409三个位点磷酸化,而且各位点磷酸化作用的Km值不同,PKA对Ser214的Km值最低,即对Ser214位点的亲和性最高,催化其磷酸化的能力最强。在细胞实验中,也显示了PKA引起Ser214位点的磷酸化最明显。结论:PKA催化tau蛋白在Ser214,Ser262,Ser409三个位点磷酸化,其中Ser214是PKA催化tau磷酸化反应的最好位点。; 施建华钱慰丁绍红尹晓敏沈勤刘飞; 关键词：TAU 蛋白激酶A 磷酸化

剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达被引量：1: 2007年; 目的:本研究通过扩增剪接因子SR蛋白家族的SRp55基因,构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。方法:用PCR法扩增SRp55基因,将扩增产物和载体pGEX-2T进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠,亲和纯化得到纯的GST-SRp55融合蛋白。结果:SRp55基因以正确的阅读框架插入pGEX-2T。IPTG诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达,随诱导时间的增加蛋白表达量增高,4h以后接近最高表达量。通过亲和纯化得到分子量在60kD左右的蛋白,经蛋白印迹分析证实为GST-SRp55融合蛋白。结论:成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并获得GST-SRp55融合蛋白,为进一步研究tau蛋白可变剪接机制提供了必要的基础。; 尹晓敏施建华刘飞; 关键词：TAU 原核表达剪接因子

施建华

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

施建华

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈