张威
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ADMA—DDAH路径在尿酸引起血管内皮损伤中的作用被引量：6
- 2011年
- 目的 观察可溶性尿酸（UA）直接作用于血管内皮细胞后,对不对称二甲基精氨酸（ADMA）生成和二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH-2）表达的影响,探讨ADMA-DDAH路径在尿酸引起的血管内皮损伤中的作用.方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在含不同浓度UA（0、60、120 mg/L）的培养液孵育下,选取6 h和24 h为研究时间点,应用ELISA法和高压液相质谱分析（HPLC）技术检测细胞上清液中ADMA的浓度;应用RT-PCR、免疫荧光（IF）和蛋白印迹法（WB）检测内皮细胞DDAH-2的表达;应用流式细胞技术检测细胞内2＇,7＇-二氯荧光素（DCF）的荧光强度,用以评估内皮细胞活性氧簇（ROS）的生成.分别收集并检测经UA（0、60、120 mg/L）单独刺激和与干预剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）（UA 120 mg/L＋NAC 10 mmol/L）共孵育24 h后各组细胞内的DDAH-2蛋白水平,并将其与ADMA标准品在37℃共孵育2 h,根据ADMA的降解量,间接评估不同浓度尿酸作用对内皮细胞DDAH-2蛋白活性的影响.结果 UA以浓度依赖的方式上调ADMA的表达,并且在相同浓度下,刺激24 h比6 h更显著地上调ADMA的表达（均P＜0.05）.UA浓度、作用时间的改变对细胞内DDAH-2表达的影响无明显差异（均P＞0.05）.高UA组作用24 h后细胞内ROS生成比低UA组增多（P＜0.05）,DDAH-2活性降低（P＜0.05）,此效应可被NAC的干预所阻断.结论 高浓度UA可促进内皮细胞ROS生成,从而导致DDAH-2活性的降低和ADMA降解的减少,而干预内皮细胞NO的合成.据此推论,高尿酸损伤内皮细胞可能有DDAH-ADMA轴的参与.
- 张威袁伟杰陈博李晓宇彭燕郝静谷立杰戴艳
- 关键词：尿酸不对称二甲基精氨酸二甲基精氨酸二甲胺水解酶活性氧簇
