宋旭霞
- 作品数：105 被引量：231H指数：9
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- EGFR基因靶向RNA干扰抑制卵巢癌细胞增殖的研究
- 2009年
- 目的:利用RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞株skov3细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达及细胞的体外增殖活性。方法:根据EGFR mRNA序列设计特异性siRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入线性化质粒pSilencerTM2.1-U6neo,以HifectinII真核转染试剂将重组质粒转染至skov3细胞中,用RT-PCR和免疫细胞化学方法分别鉴定转染前后EGFR基因在mRNA和蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定转染前后细胞增殖活性的改变。结果:DNA测序证实EGFR siRNA表达载体的siRNA插入序列完全正确,该表达载体可特异性抑制EGFR基因的表达;转染后细胞的增殖受到抑制,其中第5天的抑制率达到30%(P<0.05)。结论:靶向EGFR的序列特异性siRNA真核表达载体可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达和细胞的增殖。
- 杜鹃陈爱平宋旭霞
- 关键词：EGFR基因SKOV3RNA干扰
- 蜂毒素与基因变构白细胞介素2嵌合体蛋白
- 本发明公开了一种蜂毒素与基因变构白细胞介素2嵌合体蛋白，它属于医药生物工程技术领域。这种嵌合体蛋白的特点在于从基因水平用连接肽基因连接基因变构IL－2和蜂毒素的编码基因。本发明的优点是筛选到可以提高肿瘤发生后机体的CD8...
- 王斌钱冬萌闫志勇丁守怡宋旭霞
- 文献传递
- 紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化被引量：3
- 2010年
- 目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。
- 胡明钱冬萌侯云彭凯李玲宋旭霞LIU David X王斌
- 关键词：紫杉醇胰腺癌细胞SW1990凋亡
- 蜂毒肽-IL-2嵌合蛋白的生物学活性检测被引量：4
- 2005年
- 丁守怡钱冬萌侯伟闫志勇宋旭霞王斌
- 关键词：NK细胞杀伤活性MTT比色法
- 人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。
- 刘海燕王斌李玲白志强姜光域王海涛钱冬萌赵巍闫志勇丁守怡宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒ARPE-19细胞周期
- SARS病毒基因工程嵌合疫苗的研制及其蛋白质纯化工作站的建立
- 王斌钱冬萌闫志勇丁守怡宋旭霞王静李荣贵侯伟赵百慧付强
- 该研究组的研究工作是使用DNAStar软件对SARS病毒的S蛋白进行了亲水性、抗原性及二级结构的分析，构建原核重组表达载体并在原核表达系统中进行了表达。同时克隆和表达了编码人类白细胞介素21（IL-21）的编码基因并在此...
- 关键词：
- 关键词：SARS冠状病毒疫苗
- 人巨细胞病毒感染对神经瘤细胞凋亡损伤的影响及其差异蛋白质组学机制的探讨
- 王斌钱冬萌白志强宋旭霞闫志勇王海涛鲁晓晴丁守怡刘志军
- 该项目选择人星型胶质瘤细胞U251和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y，两者按细胞数量之比为10:1的比例混合培养，建立HCMV体外感染混合神经瘤细胞模型，在此基础上综合运用生物信息学、分子生物学、细胞生物学、流式细胞术和...
- 关键词：
- 关键词：人巨细胞病毒病毒感染神经瘤细胞凋亡差异蛋白质组学
- 基因重组人白细胞介素21体外对NK细胞活性的影响
- 本文利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL-21与健康人外周血单核细胞共同...
- 钱冬萌王斌丁守怡王静宋旭霞闫志勇
- 关键词：医学免疫基因重组白细胞介素
- 文献传递
- HCMV基因在人和小鼠胚胎成纤维细胞中表达的差异性研究
- 2013年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)种属特异性机制尚不清楚。研究通过检测HCMV AD169体外感染人胚胎成纤维细胞(Human embryo fibroblast,HEF)和小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)后病毒基因的表达情况,探讨HCMV种属特异性的可能分子机制。首先用HCMV AD169(MOI=5)分别感染HEF和MEF,相差显微镜逐日观察细胞的形态学变化;RT-PCR检测HCMV即刻早期(IE1、IE2)、早期(UL84)和晚期基因(UL83)的表达情况;Western-blot和免疫荧光检测病毒基因编码蛋白表达的情况。形态学观察发现HEF感染HCMV后逐渐变大变圆并相互融合,第4天可见典型的HCMV特征性病变效应,而MEF则未出现上述的变化;RT-PCR和Western-blot表明HEF组表达即刻早期基因IE1和IE2、早期基因UL84和晚期基因UL83 mRNA以及各基因所编码的蛋白,且相对表达量显著高于模拟感染组(P﹤0.01);而MEF组仅IE1和IE2 mRNA和蛋白相对表达量显著低于HEF组(P﹤0.05),而高于模拟感染组(P﹤0.01)。免疫荧光检测发现HEF感染72 h表达IE和UL83蛋白,而MEF则无明显表达。以上结果表明,HCMV不能在MEF中复制并产生完整子代病毒颗粒,且病毒基因表达阻止在IE2基因表达之后和UL84基因表达之前,其种属特异性可能与即刻早期蛋白低水平的表达量有关。
- 杨瑞王斌钱冬萌李玲周雯王桐梅胡明陈豪宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒即刻早期基因
- 用蛋白质芯片飞行质谱技术检测体外培养的肝癌细胞株与转染HBV的肝癌细胞株蛋白质的差异表达
- 本文运用SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与转染乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)蛋白质的差异表达,从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定了基础。
- 丁守怡钱冬萌闫志勇宋旭霞牟文凤王斌
- 关键词：肝癌细胞蛋白芯片蛋白表达
- 文献传递
