宋慧娟
- 作品数：25 被引量：58H指数：5
- 供职机构：辽宁医学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 猪MAPK12基因cDNA的克隆及序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的克隆新的猪MAPK12基因全长ORF,分析其生物特性,为进一步研究该酶的功能提供信息资料。方法:以已报道的人及小鼠MAPK12基因cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,RT-PCR技术扩增新的猪MAPK12基因ORF序列,将PCR产物直接进行序列测定。分析此蛋白的特性并预测其结构。结果分离的ORF全长1101bp,编码367个氨基酸,与人鼠氨基酸序列92%同源;利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其一级、二级和高级结构。结论研究分离的基因片段可命名为猪ERK6,通过分析,获取了该酶的基本信息特征,并与现有的报道结果进行对比分析,为进一步开展猪MAPK12基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。
- 曾瑞霞苏玉虹巴彩凤朱宝芹宋慧娟刘东鑫
- 关键词：ORF
- 猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析被引量：4
- 2009年
- 利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本1466bp.CFL2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.
- 赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹
- 关键词：CDNASMARTRACENORTHERN杂交
- 肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶PI3K
- 犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2008年
- [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
- 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁
- 关键词：真核表达载体MDCK细胞
- IL-1β基因-511位点C/T多态性与糖尿病伴发牙周炎的关系被引量：2
- 2010年
- 目的探讨IL-1β基因启动子区-511位点核苷酸C/T多态性与糖尿病伴发慢性牙周炎之间的关系。方法单纯慢性牙周炎组、2型糖尿病伴发慢性牙周炎组、健康对照组各80例,抽取静脉血5 ml,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法 ,分析IL-1β基因-511位点多态性。结果等位基因T在牙周炎组和糖尿病伴牙周炎组检出率明显高于正常对照组(P均<0.05)。结论 IL-1β基因-511 C/T多态性与牙周炎及糖尿病伴牙周炎的发病具有相关性,提示等位基因T可能是部分慢性牙周炎患者易感性的遗传标志。
- 李宁宋慧娟苏荣健李克研石铁高秀秋
- 关键词：牙周炎2型糖尿病白细胞介素1
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠超数排卵研究
- 2008年
- [目的]为建立稳定、高效的绿色荧光蛋白转基因小鼠超数排卵技术提供依据。[方法]将30只5～8周龄的绿色荧光蛋白转基因小鼠随机平均分成3组，分别腹腔注射5、7．5、10IU的PMSG，48h后腹腔注射7．5IU的HCG，比较不同剂量PMSG对绿色荧光蛋白转基因小鼠超数排卵效果的影响。[结果]PMSG剂量为7．5IU处理组获得的胚胎数明显高于PMSG剂量为5、10IU处理组,且差异显著（P〈0．05）。PMSG剂量为5、7．5、10IU处理组的小鼠见栓率分别为70％、80％、90％，处理间差异不显著（P〉0．05）。随着PMSG剂量的加大，小鼠的子宫充血程度和卵巢体积逐渐增大。[结论]绿色荧光蛋白转基因小鼠超壹蛸}卵技术中所用PMSG的最佳剂量为7．5IU。
- 王军苏玉虹宋慧娟周海英李京泽
- 关键词：小鼠超数排卵PMSG
- 猪新基因CFL2真核表达载体的构建及在C2C12细胞中的瞬时表达被引量：1
- 2008年
- 从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PCR技术从猪骨骼肌中获得CFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pCDNA3.1(+)/CFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染C2C12细胞,最后利用PCR检测转基因细胞中CFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪CFL2基因已克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,转染的C2C12细胞中检测到细胞内较高量CFL2的表达。pCDNA3.1(+)/CFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究CFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。
- 赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟
- 关键词：真核表达载体PCDNA3.1(+)C2C12
- 西藏藏族人群白细胞介素1β基因-511C／T多态性被引量：1
- 2014年
- 目的：研究白细胞介素1β（IL-1β）启动子-511位点C／T单核苷酸多态性（SNP）在西藏藏族健康人群中的分布特点。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，对144名西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511位点SNP进行检测，计算其基因型频率和等位基因频率。结果：西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511点基因型以CT杂合子型最为多见（52．72％），TT纯合子型次之（36．11％），CC纯合子型较少（11．11％）；其等位基因分布也是以T等位基因最为多见（62．50％），其次为C等位基因（37．50％）。西藏藏族人群的等位基因频率分布与奥地利人、非洲黑人、非洲白人、日本人差异均有统计学意义。结论：西藏拉萨市藏族人群中IL-1^-511位点基因型以CT和TT型为主，等位基因以T为主，其SNP分布与其他种族之间存在差异。
- 李文娜李克研宋慧娟苏荣健温有峰任甫李宁
- 关键词：白细胞介素多态性
- 葡萄糖调节蛋白78反义核酸对HEK293细胞粘附和迁移的影响被引量：2
- 2009年
- 为了研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)对细胞迁移和粘附的影响,应用Grp78反义寡核苷酸(Grp78AS-ODN)处理人胚肾细胞HEK293,对细胞的迁移和粘附特性进行分析。结果发现应用Grp78反义核酸处理细胞可以抑制HEK293细胞的迁移,促进细胞与底物间的粘附。进一步研究发现,应用Grp78反义核酸处理细胞可以促进粘着斑的形成,并引起小GTPaseRhoA在细胞膜和细胞浆中的重新分布。上述结果表明,特异性下调Grp78的表达可以抑制细胞迁移,促进细胞与底物间的粘附。
- 苏荣健李宏丹宋慧娟魏嘉
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78HEK293细胞粘附
- 特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响被引量：2
- 2009年
- 我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78肝细胞癌细胞粘附细胞外基质降解
