孙海彪
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 供职机构：山西医科大学第一医院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 转基因干细胞构建组织工程骨的初步实验研究被引量：15
- 2010年
- 目的 用转基因干细胞在体外构建组织工程骨.方法 用携带有人骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的慢病毒感染骨髓基质干细胞（BMSCs）后接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸（nHAC/PLA）支架.荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;RT-PCR、ELISA和Western-blot用于基因转染的表达检测;流式细胞仪检测细胞增殖;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况;ALP活性检测成骨能力.结果 慢病毒24 h对BMSCs的转染率约为90%;RT-PCR检测到BMP-2阳性表达,与实际值1191 bp基本一致;ELIISA检测24 h BMP-2蛋白含量为（148.2±21.6）pg/ml;流式细胞仪检测到细胞S期比例增加;ALP活性检测基因转染组明显强于对照组（P＜0.05）;扫描电镜见细胞在nHAC/PLA支架上粘附生长良好;第8周时Western-blot仍可检测到BMP-2在相对分子质量26×10^3处出现阳性条带.结论 BMP-2基因可在BMSCs稳定表达并诱导其向成骨分化,与nHAC/PLA复合培养可用于组织工程骨构建.
- 卢向东郭庆华刘强李平韩树峰吴斗孙海彪
- 关键词：骨髓基质干细胞骨形态发生蛋白-2基因转染组织工程骨
- 正交试验法优选瓜蒌总黄酮的提取工艺被引量：3
- 2014年
- 中药瓜蒌（fructus trichosanthis）为葫芦科植物栝楼 Tri-chosanthes kirilowii Maxim 和双边栝楼 Trichosanthes ros-thornii Harms 的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，具清热涤痰，宽胸散结及润燥滑肠之功效［1］。瓜蒌主要含有黄酮、萜类、多糖、挥发油及氨基酸等化学成分［2，3］。现代药理研究表明，天然黄酮类化合物具有预防骨质疏松、调节骨代谢、抗氧化、抗炎、保护心脑血管等多种生物学作用［4，5］。为有效开发和利用瓜蒌药材资源，充分提取其所含有的黄酮类物质，本实验采用正交试验法对其提取工艺进行了研究。
- 韩晓强孙海彪刘海波
- 关键词：正交试验法总黄酮瓜蒌《神农本草经》现代药理研究黄酮类化合物
- 慢病毒介导骨形态发生蛋白-7基因的干细胞用于组织工程骨构建的实验研究
- 2010年
- 目的 建立能够稳定表达骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的骨髓基质干细胞（BMSCs）,观察其成骨分化,并与纳米羟基磷灰石胶原（nHAC）材料复合培养体外构建组织工程骨的可行性.方法 实验分4组：BMP-7和eGFI基因转染组（A组）、eGFP基因转染组（B组）、常规成骨诱导组（C组）、未转染组（D组）.用G418筛选获得阳性细胞后接种于nHAC支架体外复合培养.荧光显微镜下观察eGFP表达,判断转染效率;以逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）、ELISA检测目的基因表达,四唑盐（MTT）实验检测细胞活力,碱性磷酸酶（ALP）活性和Gomori染色榆测成骨情况;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况.结果 慢病毒24 h对BMSCs的转染率约为90%.RTPCR检测到A组在1300 bp处出现特异性条带,其他组结果阴性;ELISA检测24 h BMP-7蛋白含量为（150.2±18.3）pg/mL,种植支架复合培养8周后BMP-7含量为（76.6±7.4）pg/mL;MTT实验显示细胞活性与未转染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;ALP活性以16 d最强;扫描电镜见细胞种植nHAC支架后黏附、生长良好.结论 BMP-7可在BMSCs内稳定表达,并诱导其向成骨分化;与nHAC复合培养可构建组织工程骨.
- 卢向东郭庆华刘强李平韩树峰吴斗孙海彪
- 关键词：骨髓细胞骨形态发生蛋白质类转染
- 转基因干细胞复合纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸修复骨缺损的实验研究被引量：5
- 2012年
- 目的研究以纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)材料为载体支架,复合用骨形态发生蛋白(BMP)-2修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)构建的组织工程骨修复大鼠桡骨骨缺损的能力。方法将48只成年的SD雄性大鼠随机分为4组,每组12只,制作成右侧桡骨为5mm的骨缺损模型,各组分别按以下方法将材料植入骨缺损处进行修复。A组:nHAC/PLA材料+BMSCs[BMP-2和增强绿色荧光蛋白(eGFP)处理];B组:nHAC/PLA材料+BMSCs(无BMP-2和eGFP处理);C组:单纯nHAC/PLA材料;D组:空白对照组(只造骨缺损模型,不置入支架材料)。术后6、12周用空气栓塞法各组分别处死4、8只大鼠并取右侧整段桡骨,行大体形态学、X线检查、组织学和生物力学检查。结果 X线观察结果:A组的骨痂形成量优于其他组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组最少。组织学观察结果:A组的新生骨以及新生血管的形成等均优于其他各组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组则最差。12周时4组生物力学测试结果显示:A组最大应力测试明显优于C组,B介于A组与C组之间,空白对照组最差。结论 nHAC/PLA是一种良好的载体支架材料,与经过BMP-2修饰的BMSCs复合后能显著提高骨生成的速度,在修复长骨节段性缺损方面具有潜在的临床价值。
- 王翔宇刘强卢向东孙海彪郭庆华贾祎佳
- 关键词：间质干细胞骨形态发生蛋白质类骨缺损
