孙宇石
- 作品数：4 被引量：20H指数：2
- 供职机构：黑龙江大学生命科学学院微生物黑龙江省高校重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目黑龙江省“十五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法
- 一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，它涉及一种单克隆抗体的制备方法。本发明解决了现有紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低，且发酵液中杂质含量多，难以分离提取的问题。方法：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的...
- 周东坡赵凯平文祥金涛孙宇石
- 文献传递
- 发酵法生产紫杉醇的检测分析被引量：1
- 2012年
- 目的:采用高效液相色谱法对发酵液中的紫杉醇进行测定。方法:将紫杉醇产生菌发酵产物经乙酸乙酯萃取得测定样品,高效液相色谱分析方法为苯基柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-甲醇-水(36∶4∶60),流速1mL/min,检测波长227nm,进样体积20μL,柱温室温。结果:紫杉醇与干扰物可达到基线分离,在2.2～110μg/mL范围内,紫杉醇的峰面积与浓度线性关系良好,相关系数0.9996,平均回收率为99.55%,RSD为0.60%。结论:与使用C18柱色谱条件相比,该分析方法灵敏度高,不需要复杂的样品前处理过程,仪器配置不复杂、操作方便、准确性高,可有效地检测发酵液中紫杉醇的含量。
- 金涛周东坡孙宇石刘利群邹积宏平文祥阎秀峰
- 关键词：发酵紫杉醇
- 抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。
- 赵凯孙立新孙宇石周东坡
- 关键词：紫杉醇内生真菌酶联免疫吸附试验
- NTG和UV复合诱变选育紫杉醇高产菌株的研究被引量：16
- 2008年
- 对紫杉醇产生菌HD1-3的孢子分别进行了紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理,筛选制霉菌素抗性突变株。试验所确定的Nodulisporium sylviforme紫杉醇产生菌HD1-3孢子诱变的适宜条件为:将孢子悬液经过3.0mg·mL-1 NTG、处理20min后,在电磁搅拌下,用紫外灯(30w,距离30cm)照射处理45s。共筛选出17株正突变株。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产紫杉醇的诱变菌株——UN25-3,其紫杉醇产量从出发菌株的(232.73±4.61)μg·L-1提高至(327.14±7.63)μg·L-1。
- 赵凯王颖王旋孙宇石平文祥周东坡
- 关键词：紫杉醇内生真菌诱变
