姚兴川
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PEG-重组酵母尿酸酶结合物的基本特性研究被引量：4
- 2009年
- 重组Candida utilis尿酸酶由含PET-Uricase表达质粒的重组E.coli JM109(DE3)经乳糖诱导表达,菌体破碎后依次经过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析可以获得纯度95%的重组尿酸酶。还原性SDS-PAGE和HPLC测得其亚基表观分子量和天然分子量分别约为33kDa和130kDa。获得的纯酶与20kDa(mPEG)2-Lys-NHS在特定的条件下反应合成PEG-重组酵母尿酸酶结合物,考察了重组酵母尿酸酶PEG化前后的基本性质,结果显示PEG化尿酸酶的最适pH为7.5,较修饰前下降了1个pH单位,酸碱稳定范围与修饰前类似,都在pH6～10范围内稳定;修饰前后最适温度均为40℃,重组酵母尿酸酶的热稳定性和抗蛋白酶水解能力较PEG修饰前有较大提高;PEG化尿酸酶可保留修饰前酶活力的87.5%;在最适条件下,PEG-尿酸酶结合物的Km为3.57×10-5mol/L,而修饰前测得的Km为3.91×10-5mol/L。研究结果为深入探讨PEG化尿酸酶的结构与功能奠定了基础。
- 赵兴秀何义国姚兴川杜林方孟延发
- 关键词：CANDIDA尿酸酶
- 苦瓜籽蛋白的分离纯化及免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 经过NaCl溶液匀浆抽提、硫酸铵分级分离、SP-SepharoseFastFlow层析、SephacrylS-100层析、Macro-Cap-SP层析,从苦瓜籽中同时分离纯化出大量的α-苦瓜素和苦瓜抗HIV蛋白30。经SDS-PAGE鉴定,二者均为单一条带,表观分子量为28kDa。用两种蛋白分别免疫Balb/c小鼠,双向免疫扩散表明,两种苦瓜籽蛋白无交叉反应。本实验为进一步探索PEG修饰MAP30免疫原性变化打下了基础。
- 杨梅强聂宇姚兴川王殊睿刘敏赵欣平孟延发
- 关键词：分离纯化
- α-苦瓜素和PEG-α-苦瓜素抑制绒癌JAR细胞迁移和侵袭的研究被引量：2
- 2011年
- 目的考察α-苦瓜素(α-MMC)对绒癌JAR细胞体外迁移侵袭行为的影响及其聚乙二醇(PEG)修饰物保留这一活性的程度。方法利用分子量为20 kDa的聚乙二醇氨基酸衍生物[(mPEG)2-Lys-NHS]以共价连接的方式对α-MMC分子表面进行修饰。采用MTT法、细胞黏附试验、划痕损伤试验、transwell法和明胶酶谱法分别检测JAR细胞经α-MMC或PEG-α-MMC作用后细胞的生长、存活、黏附、迁移、侵袭行为及分泌基质金属蛋白酶(MMPs)能力的变化。结果α-MMC及PEG-α-MMC依赖于剂量和时间方式显著抑制了绒癌JAR细胞的生长,PEG-α-MMC可保留67%天然α-MMC的抗增殖活性(1.5 mg.mL-1作用72 h)。经修饰后蛋白处理,细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(MMPs-2)活性减弱,削弱了细胞的运动能力,JAR细胞的行进过程受到抑制。结论α-MMC及其PEG修饰物通过减弱MMPs-2活性抑制绒癌细胞的体外行进过程,首次揭示了核糖体失活蛋白可能影响体外肿瘤转移过程。
- 陈伊雯刘敏姚兴川王殊睿孟延发
- 关键词：绒毛膜癌增殖金属蛋白酶
- 抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。
- 孟尧姚兴川王殊睿刘敏王红宁孟延发赵晓军
- 关键词：酶联免疫吸附试验单克隆抗体WESTERNBLOT检测
- 苦瓜籽α-苦瓜素的分离纯化及其生物活性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的建立一种快速、高效制备α-苦瓜素的方法 ,并初步研究其部分生物活性。方法用硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Sephacryl S-100分子筛层析以及Macrocap SP离子交换层析等方法 ,从苦瓜籽中纯化出苦瓜蛋白(α-MMC);通过MTT实验,研究了α-MMC的抗肿瘤活性;测定HepG2.2.15 cell的培养上清液中HBsAg和HBeAg的含量,研究了α-MMC的抗HBV活性。结果与结论α-MMC具有抑制HBV和肿瘤细胞增殖的作用,呈时效和量效依赖性。
- 刘盛邦吴民沪黄文虎杨梅强邓缅姚兴川孟延发
- 关键词：分离纯化抗肿瘤活性抗病毒活性
