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滑膜抗原特异性调节性T细胞的诱导扩增: 2017年; 目的诱导扩增BALB/C小鼠滑膜抗原特异性调节性T细胞(antigen specific regulatory T cells,sTregs)的产生,为探索滑膜抗原sTregs在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用提供实验基础。方法体外诱导培养小鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)并负载Ⅱ型胶原蛋白肽,在白细胞介素-2(IL-2)的协同作用下,与小鼠脾CD4^+CD25^+自然发生的调节性T细胞(nTregs)混合培养,以刺激产生滑膜抗原sTregs,并用混合淋巴细胞抑制实验评估扩增的sTregs抑制CD4^+CD25^-T细胞增殖的功能是否具有抗原特异性。结果经DCs刺激1周后,小鼠CD4^+CD25^+Tregs扩增了6倍,并且增殖的sTregs在混合淋巴细胞抑制试验中较多克隆Tregs(Poly-Tregs)具有较强的抑制作用(P<0.01),显示抗原特异性抑制的特点。结论以自身DCs负载滑膜源性抗原(Ⅱ型胶原蛋白肽)可以从小鼠脾CD4^+CD25^+nTregs中诱导扩增滑膜抗原sTregs。; 何晓红周海涛黄清春; 关键词：调节性T细胞抗原特异性树突状细胞

RA患者外周血CD141^+DCs数量的变化及其与Tregs的关系被引量：1: 2017年; 目的探讨RA患者外周血各DCs亚群数量的变化,为进一步阐明RA的发病机制奠定基础。方法选取63例RA患者和30例相匹配的健康体检者作为正常对照组,将入选的RA患者根据疾病活动性评分(DAS28)分为3个亚组。采用流式细胞术检测所有受试者外周血DCs、Treg细胞比例并分析各DC亚群与Treg的相关性。结果 RA患者外周血总的DCs数量低于正常对照组(P<0.05);RA患者pDCs的比例与正常对照组无差异(P>0.05);CD1C^+DCs比例降低,但无统计学意义(P>0.05);CD141^+DCs比例明显下降(P<0.01),并与Tregs的变化一致,r=0.51,P<0.01。结论 RA患者的CD141^+DCs比例下降与Tregs的下降有关,可能在RA的发病中起到一定的作用。; 周海涛柯培锋何晓红黎小琼; 关键词：树突状细胞类风湿性关节炎调节性T细胞

小鼠骨髓DCs的高效扩增及其表型特征: 2013年; 目的:建立体外大量扩增骨髓树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,Bm-DCs)的方法,并分析其免疫表型特征。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)从C57BL/6小鼠骨髓细胞中诱导产生骨髓未成熟树突状细胞(immol/Lature DCs,imDCs),6 d后以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)进一步刺激产生成熟树突状细胞(mature DCs,mDCs)。以流式细胞技术检测imDCs、mDCs的CD11c、MHCⅡ、CD86、B220的表达。同时检测imDCs、mDCs刺激近交系BALB/c小鼠CD4+T淋巴细胞增殖的功能。结果:(1)每只小鼠的双侧股骨可以得到(4.0～6.0)×106个DCs;(2)CD11c、MHCⅡ、CD86、B220的表达率在imDCs和mDCs分别为(71.67±1.53)%、(25.67±2.08)%、(7.67±1.53)%、(9.00±1.00)%;(81.67±1.53)%、(55.67±3.06)%、(45.33±2.08)%、(8.00±1.00)%,其中imDCs、mDCs的CD11c、MHCⅡ、CD86的表达差异具有统计学意义(P<0.01);两组DCs的B220均为低表达;(3)成熟DCs具有很强的刺激近交系小鼠T淋巴细胞增殖的能力。结论:联合应用GM-CSF、IL-4可从小鼠骨髓中诱导扩增大量DCs;诱导产生的DCs的免疫表型特征为CD11chiMHC-Ⅱ+B220-,总体与常规DCs(conventional DCs,cDCs)相似。; 周海涛何敏柯培锋林海标欧财文; 关键词：树突状细胞免疫表型细胞培养小鼠

巨幼细胞性贫血患者粒细胞分化抗原表达特征被引量：1: 2013年; 本研究探讨巨幼细胞性贫血(megaloblastic anemia,MA)患者骨髓(bone marrow,BM)粒细胞的分化抗原(cell differentiation antigen,CD)变化。结合骨髓象、血象、血清叶酸、Vit B12含量、细胞遗传学以及有关分子生物学检查等资料,对13例MA患者骨髓细胞的流式细胞术检测结果进行回顾分析,总结MA患者骨髓粒细胞相关特异性分化抗原CD13、CD33、CD15的表达及粒细胞前向散射光(forward scattering light,FSC)、侧向散射光(side scat-ter light,SSC)的信号强度变化特点并与正常人群比较。结果表明:MA患者和正常人的粒细胞表面CD13、CD15、CD33的表达率分别为(44.53±16)%、(96.16±2.67)%、(80.81±14.71)%和(62.33±11.02)%、(99.53±0.46)%、(70.00±7.81)%,其中MA粒细胞CD13、CD15表达率下降(P<0.01),CD33表达率增高(P<0.01)。MA患者和正常人的粒细胞CD13、CD15、CD33、SSC、FSC的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)分别是3.39±1.41、14.29±6.59、1.95±0.94、478.78±70.43、633.46±75.53和5.12±1.15、20.67±5.13、1.04±0.17、332.00±38.16、537.00±16.70,其中MA粒细胞CD13、CD15的MFI值下降(P<0.01);而FSC、SSC和CD33的MFI值增高(P<0.01和P<0.05)。结论:MA患者粒细胞不仅在形态学上表现为成熟障碍,而且其分化抗原的表达也呈现成熟障碍的特征,这对于临床上诊断MA具有一定的意义。; 周海涛柯培锋沈文红陈苏宁王国征; 关键词：巨幼细胞性贫血粒细胞分化抗原

骨髓源性而非脾源性树突状细胞能够诱导产生调节性T细胞被引量：4: 2013年; 越来越多的证据表明,树突状细胞(DC)能够通过刺激CD4+T细胞产生调节性T细胞(Treg)而参与免疫耐受。本研究旨在探索骨髓源性DC(bone marrow-derived DC,BM-DC)或脾源性DC(spleen derived DC,spDC)诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg产生的可能性。以GM-CSF和IL-4从C57BL/6小鼠骨髓前体细胞诱导产生骨髓未成熟DC(immature DC,imDC);6 d后,imDC经脂多糖(LPS)进一步刺激16 h得到成熟树突状细胞(mature DC,mDC);同时用免疫磁珠从小鼠脾脏分选得到spDC,以这3种DC分别与新鲜分离的BALB/c小鼠脾CD4+T细胞混合培养,诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg的产生;用流式细胞仪检测CD4+T细胞中FOXP3的表达,对比分析3种DC诱导产生CD4+CD25+FOXP3+Treg的能力。结果表明:经C57BL/6小鼠骨髓imDC、mDC的刺激,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的FOXP3表达率从(8.57±1.14)%分别提高到(15.80±1.35)%、(17.93±1.45)%(P<0.01);经spDC的刺激,BALB/c小鼠的CD4+T细胞中的FOXP3表达率则从(8.57±1.14)%下降到(3.95±0.79)%(P<0.05)。结论:体外诱导的BM-DC而非spDC能够诱导Treg的产生,具有介导免疫耐受的作用。; 周海涛黄宪章吴新忠陈炜烨吴晓宾; 关键词：调节性T细胞树突状细胞 FOXP3

血β-羟丁酸诊断2型糖尿病酮症酸中毒阈值的建立被引量：6: 2014年; 目的探索建立血β-羟丁酸(βOHB)诊断2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)的阈值及βOHB水平与DKA严重程度的关系。方法对急症科收治的2型糖尿病患者的血βOHB与[HCO3-]进行相关分析,同时利用回归方程计算出[HCO3-]为18.0、15.0、10.0 mmol/L时的βOHB值,并以与[HCO3-]为18.0 mmol/L对应的βOHB值作为DKA诊断的阈值,并结合临床评估其诊断性能。结果血βOHB水平与[HCO3-]浓度具有良好的相关性,R2=0.7023,P<0.001。[HCO3-]为18.0、15.0和10.0 mmol/L时的βOHB值分别为3.0、4.70和7.5 mmol/L,并与DKA病情严重程度相符;结合血糖浓度≥13.9 mmol/L,当血βOHB≥3.0 mmol/L时,诊断DKA的灵敏度为99.0%,特异性为86.0%,总有效性为92.81%。结论血βOHB≥3.0 mmol/L可作为DKA诊断的阈值,并且βOHB可作为DKA病情严重程度的判断指标。; 柯培锋周海涛万泽民吴晓宾林海标黄宪章; 关键词：Β-羟丁酸糖尿病酮症酸中毒阈值

糖尿病肾病患者血清降钙素原水平及与其它指标间的关系被引量：9: 2014年; 目的了解无感染的糖尿病肾病（DN）患者与健康志愿者间炎症标志物降钙素原（PCT）水平是否存在差异，并探讨其临床意义。方法检测76例单纯糖尿病患者[DM组，24h尿微量白蛋白（mALB）〈30nag／24h]、81例早期DN患者（EDN组，mALB30～300mg／24h）、87例临床DN患者（DN组，mALB≥300mg／24h）、以及82例年龄和性别匹配的健康志愿者血清PCT水平，并检测炎症相关分子、肝、肾功能相关指标，分析DN患者血清PCT与其它检测指标间的关系。结果DN组患者的PCT[（0．55±0．61）μg／L]高于健康对照组、DM组和EDN组（P〈0．001或P〈0．05）。Spearman相关分析显示，DN患者血清PCT与血清乳酸脱氢酶（LDH，r=0．541，P〈0．01）、血清尿酸（UA，r=0．320，P〈0．01）、血清尿素（Urea，r=0．324，P〈0．01）、血清肌酐（Cr，r=0．403，P〈0．01）、血清α-羟丁酸脱氢酶（α=HBD，r=0．791，P〈0．01）和血清C-反应蛋白（CRP，r=0．694，P〈0．010）呈正相关，进一步行多重线性回归，发现LDH和cr均与PCT水平相关，标准偏回归系数分别为0．591和0．329。与其它检测指标间尚未发现相关性。结论与健康志愿者相比，无明显感染迹象的DN患者血清PCT水平增高，这可能与微小炎症灶的存在以及肾脏功能受损相关。; 万泽民陈伟烨卢妙莲周海涛高云龙张成韩光唐小龙黄旭东; 关键词：糖尿病肾病降钙素原炎症 C反应蛋白

富血小板血浆制备后不同时间点检测的血小板聚集率比较被引量：2: 2013年; 目的在离心制备富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）的过程中,血小板的聚集活性会下降,但PRP在室温条件下静置一定时间后,其聚集活性会逐步得到恢复,通过比较PRP制备后不同时间段检测的血小板最大聚集率（maximum aggregate rate,MAR）,确定PRP制备后检测的最适时间.方法随机收集40例临床标本,分成5组,分别在PRP制备后即时（15 min）,30 min,1,2,3 h等5个不同时间点检测其MAR,并对不同时间点检测的MAR进行方差分析,以检出最大MAR的时间点作为检测的最佳时间.结果 PRP制备后即时（15 min）,30 min,1,2,3 h检测的MAR分别为（33.49±18.60）%,（41.08±23.45）%,（41.13±23.60）%,（38.80±22.24）%和（35.10±19.64）%,其中30 min及1 h检测的MAR差异无统计学意义（P〉0.05）;而即时,2 h,3 h组检测的MAR均较低,同30 min和1 h检测结果相比,差异具有统计学显著性意义（P〈0.01）.结论宜在PRP分离后30 min～1 h内检测血小板聚集率.; 周海涛吴新忠郑智明; 关键词：比浊法

Bio-Rad Variant^(TM) Ⅱ血红蛋白分析仪对糖尿病患者的筛选价值: 2014年; 目的探讨Bio-Rad Variant TMⅡ血红蛋白分析仪在地中海贫血(简称"地贫")检测模式中P2峰面积对糖尿病患者的筛选价值。方法选择高、低2个不同浓度水平的新鲜血样本对Bio-Rad Variant TMⅡ血红蛋白分析仪P2峰面积进行精密度评价。选取84例EDTA-K2抗凝血样本,以HLC-723G7糖化血红蛋白分析仪作为参比仪器,以Bio-Rad Variant TMⅡ血红蛋白分析仪作为试验仪器,将Bio-Rad Variant TMⅡ测定的P2峰和(P2+X)峰的面积比例分别与HLC-723G7糖化血红蛋白分析仪测定的HbA1c结果进行回归分析,计算线性方程和相关系数,在不同医学决定水平处判断2台仪器测量结果的偏差是否可以接受。结果批内不精密度分别为0.91%和0.94%,批间不精密度分别为1.03%和2.22%。参比仪器与试验仪器HbA1c结果的回归方程分别为Y1=0.975 8 X-0.332(r2=0.963 8)、Y2=1.002 9 X-0.105 7(r2=0.958 0),相关性良好。单独P2峰的面积与HLC-723G7糖化血红蛋白分析仪检测HbA1c结果的回归方程在医学决定水平处的偏差超出允许误差范围,而(P2+X)峰得到的回归方程在医学决定水平处的偏差在临床允许误差范围内。结论 Bio-Rad Variant TMⅡ血红蛋白分析仪测定(P2+X)峰面积的结果与HLC-723G7糖化血红蛋白分析仪检测HbA1c的结果具有较好的可比性,在地贫检测模式中通过观察(P2+X)峰的结果对糖尿病患者具有一定的筛选价值。; 吴晓宾李倩珺林海标周海涛欧财文柯培锋徐建华吴新忠; 关键词：地中海贫血糖尿病血红蛋白

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周海涛

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