刘贽
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙肝病毒蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件优化
- 2009年
- 目的优化乙肝蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件。方法选择急性自限性HBV感染者外周血,分离PBMC,体外用乙肝蛋白抗原表位多肽特异性刺激,特定天数后收集细胞,用CD8抗体与MHC-I类分子HBV抗原肽四聚体进行染色流式检测,检测扩增后乙肝蛋白抗原表位特异性CTL在CD8阳性细胞群中所占的频率。结果1)在不同多肽浓度刺激下,当浓度在20 ug/mL时,所测得特异性CTL占PBMC中CD8+T细胞的频率达到最高峰;2)固定刺激多肽浓度,在不同的刺激天数获得的特异性CTL频率第10天时最高;3)在不同的细胞因子培养条件中,当加入的细胞因子IL-2,IL-7,IL-15组合时所获得的特异性CTL频率最高。结论在刺激肽浓度为20μg/mL,并加入适量的细胞因子(IL-2,IL-7,IL-15),刺激10天的条件下,所获得的乙肝蛋白抗原特异性CTL频率最高。
- 郝友华陈玲杨新星丁红晖冯雪梅朱帆刘贽杨东亮
- 关键词：体外扩增
- HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体的构建及初步检测应用被引量：3
- 2007年
- 目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)。方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Pol756-764和Core117-125在体外复性折叠成可溶性的HLA-A*2402抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成2种HBV抗原肽四聚体。最后进行流式细胞术检测。结果:Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了2种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物单体。结论:构建的2种四聚体可以检测乙型肝炎感染者体内特异性的CTL。
- 杨新星郝友华宋娜陈玲刘贽杨东亮
- 关键词：T淋巴细胞生物素化
- 三种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体的构建及初步检测应用被引量：2
- 2008年
- 目的体外构建三种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体,并初步用该三种四聚体对抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)进行了初步检测。方法原核高效表达的HLA-A*0201-BSP和β2m蛋白,分别和三种HBV抗原肽(HBVCore18-27,Env335-343,Pol575-583)体外复性折叠成可溶性的HLA-A*0201抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成相应的三种抗原肽四聚体。最后进行流式细胞仪检测。结果Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了三种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体。构建的三种四聚体均可以检测到相应特异性的CTL,在自限性感染患者体内针对乙肝核心抗原(core18-27)的CTL细胞频数(0.18%)高于针对聚合酶抗原(pol575-583)(0.08%)和包膜抗原(env335-343)(0.06%)。结论成功构建了三种具有完整构象的生物素化HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体,所构建的三种四聚体都可以检测到抗原特异性的CTL。
- 杨新星郝友华丁红晖宋娜刘贽陈玲杨东亮
- 关键词：T淋巴细胞四聚体
