刘爽
- 作品数：80 被引量：373H指数：10
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：科技基础性工作专项国家科技支撑计划广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 一株猪细小病毒7群的鉴定和分离被引量：1
- 2019年
- 猪细小病毒7群(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为弄清我国猪群中是否存在PPV-7,本文用PPV-7特异性的实时荧光定量PCR和常规PCR方法对采集的10份猪流产胎儿和10份保育仔猪病料分别进行检测,结果发现其中1份保育仔猪样品的常规PCR和实时荧光定量PCR检测结果均为阳性,常规PCR扩增出的246 bp特异性条带测序和分子遗传演化时发现,该序列与PPV-7参考毒株KU5637332和KY996757的同源性分别为99.6%和98.0%,表明该样品中含有PPV-7,进一步用PK-15细胞分离病毒,连续传代5次后PK-15细胞都没有出现典型的细胞病变,但其上清液用实时荧光定量PCR方法都可以检测到该病毒。本研究结果证实我国猪群中存在PPV-7的感染,且检测到的PPV-7毒株能在PK15细胞中增殖。
- 张志张丽丽刘爽吴发兴李晓成王树双
- 关键词：实时荧光定量PCR常规PCR
- 猪塞尼卡病毒TaqMan探针荧光RT-PCR方法的建立和应用被引量：7
- 2020年
- 塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)为小核糖RNA病毒科塞尼卡病毒属的单股正链RNA病毒,可引起猪的水泡样病变、跛行和新生仔猪突然死亡等,我国已经有多个省市检测到了本病毒。为建立一种快速高效、适应范围广的SVA检测方法,本研究以分离到的1株SVA流行病毒株GXT91作为参考毒株,设计合成了TaqMan探针和1对引物建立了SVA的荧光RT-PCR方法,并分别进行该方法的敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:该方法的敏感性达到了17.4个分子拷贝/μL,与口蹄疫病毒、猪瘟病毒等病原无交叉反应,表明它具有较高的特异性,组间和组内重复性试验的变异系数均小于2%,表明其重复性较好。进一步运用该方法对48份临床样本进行检测,从中发现了12份阳性样品。这表明本研究建立的荧光RT-PCR是一种良好的诊断SVA的方法,可用于待测样本中SVA的诊断和流行病学调查监测等。
- 张志张丽丽吴发兴吴发兴刘爽董雅琴张慧崔进李晓成
- 关键词：荧光RT-PCR
- 2012年我国部分省市规模化猪场副猪嗜血杆菌分离鉴定及菌株血清分型被引量：22
- 2014年
- 为掌握2012年我国猪场副猪嗜血杆菌(Hps)感染的发病状况,在我国部分省市规模化猪场采集疑似副猪嗜血杆菌病猪的心包积液及发生纤维素性浆膜炎的肺脏等病料共168份,通过病原分离培养、形态及培养特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,最终分离出51株副猪嗜血杆菌,分离率约为30.4%。对51株副猪嗜血杆菌用琼脂扩散法进行血清分型,得到4型的6株(11.8%),5型的9株(17.6%),13型9株(17.6%),12型、14型各2株,1型、6型、10型、11型各1株,未能确定血清型19株,4型、5型、13型占总比例的47.1%,占有毒力血清型(强毒和中等毒力血清型)比例80.0%,表明副猪嗜血杆菌4型、5型、13型菌株是我国的优势血清型。
- 王建邵卫星吕占军王超董雅琴刘爽王博扬吴发兴张志刘自立王佳李晓成
- 关键词：副猪嗜血杆菌聚合酶链反应血清分型
- 2021年我国部分省份猪圆环病毒2型流行病学调查和基因分析
- 2023年
- 为了解2021年我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行情况,本试验于7个地区16个省采集1685份组织样品,采用实时荧光定量PCR检测方法检测PCV2,对其中45份阳性样品进行全基因组序列扩增和遗传演化分析。结果显示,被检样品PCV2总阳性率为9.85%(166/1685),场总阳性率为32.71%(35/107);各地区样品阳性率介于4.29%~19.00%,东北地区样品阳性率最高;各地区场阳性率介于6.90%~60.00%,华中地区场阳性率最高。PCV2a、PCV2b和PCV2d亚型分离毒株占比分别为31.11%、4.44%和64.44%,其中PCV2d亚型为优势流行株,未发现PCV2e和PCV2c亚型。有24株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个赖氨酸(K)延伸,另有1株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个蛋氨酸(M)延伸。结果表明,2021年我国PCV2感染范围广,污染程度高,且正在不断发生遗传变异,需要持续跟踪监测PCV2的流行情况,以便及时制定有效的防控措施。
- 黄正波崔进张慧尼博刘爽刘爽董雅琴魏荣董雅琴吴发兴
- 关键词：猪圆环病毒2型流行病学调查基因序列分析
- 猪伪狂犬病毒野毒株套式PCR检测方法的建立和应用被引量：3
- 2015年
- 为建立能鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒株和疫苗株的实用方法,本文以疫苗株缺失的3.5kb片段为靶基因,设计了2对PCR引物,建立了能够特异性检测PRV野毒株的套式PCR方法。与常规PCR相比,该方法检测极限可达10个病毒拷贝/μL,是常规PCR的1000倍,并与猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒等不存在交叉反应现象。在对临床150份样品检测时,套式PCR的阳性率为21.33%,常规PCR的阳性率为10%。这表明该方法具有特异性高、敏感性强的特点,是一种值得基层推广应用的快速诊断技术,可用于PRV的诊断和流行病学调查等。
- 张志樊雅婷吴发兴刘爽董雅琴邵卫星段纲王树双李晓成
- 关键词：猪伪狂犬病病毒野毒株套式PCR
- 健康屠宰猪中博卡病毒的检测及遗传演化分析被引量：4
- 2012年
- 为了解我国健康猪群中猪博卡病毒(PBoV)的感染状况,从屠宰场内采集猪淋巴结、脾脏和扁桃体等组织,分别采用套式PCR进行猪博卡病毒1型和2型的检测。结果表明,28份样品中有2份样品用猪博卡病毒2型引物可扩增出439 bp的特异性条带;结构蛋白VP1基因序列分析表明,这2份样品均为猪博卡病毒2型感染,且其VP1序列与猪博卡病毒参考株HM053694的同源性最高,分别达93.8%和93.3%,同属PBoV1/PBoV2进化分支;而与另一个猪博卡病毒V6/V7进化分支的同源性仅为35.1%～39.2%,距离较远。
- 张志王赛赛李岚刘爽李蕾郑辉吴发兴张燕霞李晓成
- 关键词：套式PCR
- 我国10株猪细小病毒7型全基因组遗传与重组分析被引量：3
- 2020年
- 猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为进一步了解PPV-7的分子流行病学特征,采用分段扩增的方法对来自我国不同省份的10份PPV-7阳性样品进行全基因组扩增和测序,并利用DNAStar、MEGA等软件对这10株PPV-7流行毒株进行分子遗传和重组分析。结果表明,10株PPV-7流行毒株与PPV-7参考毒株的核苷酸序列同源性为92.2%~95.9%,与其他同属的田鼠细小病毒2(KX272741)等参考毒株的同源性为46.1%~50.8%,与细小病毒亚科其他属参考毒株的同源性为29.4%~33.1%;因此作者建议重新将PPV-7归于一个新的病毒属。用RADP软件进一步分析PPV-7流行毒株重组时发现,不同流行毒株的重组位点和父系病毒的来源均不相同,表明这些流行毒株仍在不断发生变异和重组,且这种变异具有不确定性。这无疑增加了PPV-7致病性增强的风险,提示我们应持续重视和关注PPV-7的分子流行病学监测。
- 张志张丽丽刘爽董雅琴张慧张峰崔进吴发兴李晓成
- 关键词：全基因组同源性
- 猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量RT—PCR检测方法的建立被引量：9
- 2014年
- 本为快速特异地检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),根据猪流行性腹泻病毒N基因序列设计合成引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT—PCR检测PEDV的方法。用阳性质粒10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,结果显示,该方法的标准曲线的相关系数为0.99,检测敏感性达到26.1拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,对猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测结果均为阴性,批内和批间变异系数均小于2.5%。对43份现地病料的检测结果也表明该方法(检出28份)比常规RT—PCR方法(检出12份)敏感性更高,为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段。
- 张志刘自立董雅琴于美芳刘爽吴发兴邵卫星李晓成王树双
- 关键词：猪流行性腹泻病毒TAQMAN探针
- 2019年我国部分省份猪群塞内卡病毒流行病学调查被引量：6
- 2021年
- 为了了解我国部分地区猪群塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的流行情况,试验采用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法对2019年在华东、华南、华中、华北、西北、东北6个地区16个省、市、自治区屠宰场与非健康猪场采集的1310份猪组织样品和828份猪血清样品进行病原学与血清学调查,并结合2016—2018年数据,分析SVA在空间、时间和群间的分布情况。结果表明:从空间分布来看,华东、华南、华中、华北、西北、东北地区组织样品阳性率分别为4.07%、17.06%、29.27%、0、2.65%、0,场阳性率分别为26.67%、57.14%、50.00%、0、30.00%、0;华东和西北地区血清学样品阳性率分别为6.98%、15.17%,场阳性率分别为66.67%、93.33%。从时间分布来看,2019年屠宰场和非健康猪场组织样品阳性率分别为7.53%和3.24%,与2018年(11.21%和22.62%)比较明显下降;2019年下半年组织样品阳性率呈上升趋势,其中西北地区由上半年未检出增长为4.40%,华南地区由上半年的7.30%增长至28.70%。从群间分布来看,表观健康猪群(屠宰场)的组织样品阳性率(7.53%)与场阳性率(25.00%)均高于非健康猪群(3.24%和18.75%)。说明2019年SVA的流行强度有所下降,但流行范围仍较广、感染率仍较高且存在大量隐性感染,需加强猪群SVA流行状况的监测,以便及时调整防控措施。
- 高春柳董雅琴周晓翠刘爽郑辉张锋崔进张慧武瑞李晓成尼博魏荣
- 关键词：流行病学调查三间分布
- 兔源猪瘟脾淋苗与牛源猪瘟细胞苗的鉴别引物和鉴别方法
- 本发明提供了一种兔源猪瘟脾淋苗和牛源猪瘟细胞苗的鉴别引物和鉴别方法，本发明利用兔和牛线粒体具有种属特异性的特点，筛选出特异性的4种引物序列，建立相应的PCR方法，鉴别方法如下：提取猪瘟疫苗样品的DNA；PCR反应体系为2...
- 李晓成张志吴发兴刘爽董雅琴邵卫星
- 文献传递
