刘淑丹
- 作品数：17 被引量：23H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氧化苦参碱改善缺氧缺血引起的HaCaT细胞氧化应激损伤被引量：4
- 2021年
- 目的探讨氧化苦参碱(OMT)对缺氧缺血环境下角质形成细胞损伤的保护作用。方法选择体外培养的人角质形成细胞系HaCaT细胞,分为正常对照组(NC组)、模型组(HI组)、OMT低剂量组(0.05 g/L OMT组)、OMT高剂量组(0.1 g/L OMT组)4组。采用活细胞数量检测试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖抑制率和活力,磷脂结合蛋白V(Annexin V)染色检测凋亡率,线粒体膜电位探针JC-1检测HaCaT细胞线粒体膜电位变化,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测HaCaT细胞活性氧(ROS)水平,比色法检测HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)活力,Western blotting检测凋亡基因天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)、Cleaved-Caspase 3、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及TGF-β1/SMAD3通路蛋白的表达量。结果与NC组相比,HI组HaCaT细胞Ki67阳性率[(13.52±2.89)%,P<0.001)[和线粒体膜电位降低(0.54±0.03,P<0.001),凋亡细胞数量(13.83±0.81,P<0.001)、ROS水平(164.31±16.93,P<0.001)升高,细胞中GSH-Px(0.96±0.05,P<0.001)、SOD(0.67±0.06,P<0.001)和T-AOC(1.90±0.02,P<0.001)水平下降。0.05 g/L OMT干预后,HaCaT细胞Ki67阳性率[(57.98±9.81)%,P<0.001)]和线粒体膜电位升高(0.81±0.04,P<0.001),凋亡细胞数量(8.10±0.53,P<0.001)、ROS水平(175.94±15.75,P<0.001)降低,细胞中GSH-Px(1.04±0.05,P<0.001)、SOD(0.86±0.04,P<0.001)和T-AOC(2.08±0.03,P<0.001)水平升高;Western blotting结果显示:HI处理使HaCaT细胞中TGF-β1信号通路蛋白TGF-β1(1.15±0.14,P=0.010)、p-SMAD3(0.13±0.03,P=0.112)表达上调,凋亡信号蛋白Caspase-3(0.37±0.045,P=0.001)、Cleaved-Caspase 3(0.54±0.03,P=0.108)蛋白相对表达量较正常培养组均上调;添加0.05 g/L OMT处理后,与HI模型组相比,HaCaT细胞中TGF-β1(0.69±0.13,P=0.005)、p-SMAD3(0.07±0.01,P<0.001)、Caspase-3(0.21±0.041,P=0.006)、Cleaved-Caspase 3(0.29±0.054,P=0.016)蛋白相对表达量均下降,Bcl-2蛋白相对表达量升高(0.35±0.013,P=0.0
- 刘淑丹张飞燕郭松林梁雪云陈冬梅
- 关键词：氧化苦参碱角质形成细胞氧化应激
- 一种低免疫原性组织工程皮肤构建方法
- 本发明公开了一种低免疫原性组织工程皮肤构建方法，属于生物工程技术领域，该方法方法采用人表皮干细胞和胎儿来源的胎盘间充质干细胞作为种子细胞，以牛I型胶原构建的3D基质作为支架，利用气液界面分离培养法复合构建为一种有活性的低...
- 陈冬梅杨银学魏军刘晓明刘淑丹梁雪云杨婷婷张耀林马晓娜马海滨严秀蕊刘婷
- 文献传递
- 肿瘤环境下脂肪间充质干细胞旁分泌因子促进结肠癌细胞侵袭被引量：7
- 2016年
- 目的确定肿瘤环境下人类脂肪间充质干细胞(h AMSCs)的旁分泌特征变化与肿瘤细胞侵袭的关系。方法体外分离培养AMSCs,收集培养上清液制备条件培养基,用于培养HCT116细胞。利用Transwell培养板共培养AMSCs与HCT116细胞。通过检测穿透人工基底胶(Matrigel胶)的能力比较两种培养条件下HCT116细胞侵袭能力的差异。实时荧光定量PCR检测HCT116细胞上皮间质转化(EMT)相关基因的表达变化。ELISA法检测共培养后AMSCs基因表达和旁分泌因子表达变化。结果结肠癌细胞系HCT116与AMSCs的Transwell共培养系统中,HCT116细胞的侵袭能力较AMSCs条件培养液培养显著增强。同时结肠癌细胞系HCT116构成的肿瘤微环境也影响了AMSCs旁分泌因子表达的变化,其中成纤维生长因子10(FGF10)、血管内皮生长因子C(VEGFC)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)的表达较正常培养条件下显著上调。结论肿瘤微环境影响下的AMSCs旁分泌因子表达改变,这些变化能够增强结肠肿瘤细胞的侵袭能力。
- 陈冬梅刘淑丹马会明刘晓明梁雪云魏军
- 关键词：脂肪间充质干细胞结肠癌
- 氧化苦参碱-胎盘间充质干细胞水凝胶、制备方法及应用
- 本申请公开一种氧化苦参碱‑胎盘间充质干细胞水凝胶、制备方法及应用。氧化苦参碱‑胎盘间充质干细胞水凝胶包括：胎盘间充质干细胞、含有氧化苦参碱的胶原以及水凝胶。本申请采用含有氧化苦参碱的水凝胶作为细胞基质，胎儿来源的胎盘间充...
- 陈冬梅夏鹤春梁雪云施惠娟刘淑丹马会明马晓娜马海滨张飞燕郭松林
- 文献传递
- 去甲基化酶腺病毒载体构建及其在人颌下腺细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建去甲基化酶(methyl-CpG binding domain 2,MBD2)基因腺病毒载体,并观测其在人颌下腺(human submandibular gland,HSG)细胞中的表达。方法以HSG细胞总RNA为模板,RT-PCR法扩增MBD2基因全长编码序列,克隆入载体pMD18-T后,亚克隆入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体,构建pAdTrack-MBD2重组体。该重组体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1于BJ5183菌中同源重组,产生重组腺病毒质粒Ad-MBD2,该质粒经293细胞包装,获得具有感染力的Ad/MBD2重组腺病毒颗粒,将该病毒颗粒感染HSG细胞,倒置显微镜检测转染后HSG细胞生长变化及MBD2在其中的表达等情况。图像分析法计算感染效率。RT-PCR法检测MBD2基因在该细胞中的表达变化。结果成功克隆到909 bp大小的MBD2基因,构建了其腺病毒载体Ad/MBD2,该腺病毒载体经293细胞成功包装,并获具感染力的Ad/MBD2重组腺病毒颗粒,其感染效率约70%。感染的HSG高表达MBD2。结论成功克隆到MBD2基因,构建了其重组腺病毒载体Ad/MBD2,并证实了其感染HSG细胞的有效表达。
- 李莹刘淑丹杨彦春董世武熊剑李方周继祥
- FGF10通过GSK3依赖的SMAD途径促进结肠肿瘤的转移
- 肥胖群体中结肠癌的发生和不良预后均高于正常体重指数的群体.脂肪间充质干细胞(AMSCs)作为重要的肥胖相关肿瘤微环境细胞，可能在促进肿瘤细胞增殖和迁移中起了重要作用.AMSCs 旁分泌因子FGF10 是脂肪发育和胚胎支形...
- 刘淑丹
- 关键词：结肠癌
- 不同年龄人角化细胞的衰老特征评价被引量：1
- 2018年
- 目的评价年龄对衰老细胞模型的影响,以建立体外培养的衰老细胞模型。方法本研究根据供者年龄分为4组,每组3例生物学重复,<10岁、10～20岁、20～30岁和>30岁组。酶消化法体外分离培养不同年龄供体的表皮角化细胞。体外培养至P2代,进行以下检测:β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞数量;CCK-8和克隆形成试验检测细胞生长和增殖能力;磷酸化γ-H2A.X免疫荧光染色检测细胞DNA损伤;Western blot法检测分析细胞中周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白表达。结果各组衰老细胞数占总细胞数百分比分别为0.864%、0.789%、5.472%、8.765%,差异有统计学意义(P=0.000)。随着年龄的增加,HKCs细胞倍增能力下降,倍增时间延长。<10岁组中细胞核Phospho-Histone H2A.X表达细胞数量少,>30岁组人正常角化细胞内DNA双链断裂大量产生。同时,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))、p21、p53的表达随年龄增加而上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常人角化细胞的增殖与衰老与人类年龄呈显著正相关,可以作为研究人类衰老的细胞模型。
- 杨婷婷陈冬梅刘淑丹马海滨马晓娜梁雪云
- 关键词：角化细胞细胞模型DNA损伤
- miR-124a通过抑制TGF-β通路促进人胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化被引量：4
- 2014年
- 目的研究miR-124a参与抑制TGFBR1和BMPR1B的转录后调控,及其对人胎盘间充质干细胞(PMSCs)向胰腺祖细胞分化的影响。方法用慢病毒过表达miR-124a前体,建立PMSCs中过表达miR-124a细胞模型;转染miR-124a反义寡核苷酸,抑制miR-124a表达;real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达调控关系;real-time PCR、Western blot和免疫荧光化学染色检测miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特征基因和蛋白表达变化。结果 PMSCs中过表达和抑制表达miR-124a,能反向调控其靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达;miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特异性基因PDX-1、Nkx6.1、NGN3和β细胞特征基因Insulin的表达量显著上升(P<0.05),PDX-1和Insulin的蛋白表达水平也同样升高。结论 miR-124a可能通过抑制TGFBR1的表达,阻断TGF-β/TGF-βR信号,使细胞发生间质上皮转化,并可能通过抑制BMPR1B的表达阻碍细胞向成骨方向分化,从而指导胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化。
- 陈冬梅马海滨刘淑丹王立斌李玉奎魏军
- 关键词：胎盘间充质干细胞分化
- 聚肌胞苷酸对人胎盘胎儿源性间充质干细胞细胞因子产生的影响
- 2014年
- 胎盘来源的间充质干细胞（plancenta derived mesenchymal stem cells,PMSC）越来越多的用于临床治疗[1]。PMSC免疫调节功能可能与抑制树突状细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞功能,同时释放多种免疫调控因子相关[2]。其中一些免疫调控因子的分泌受到Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）信号通路的调控。
- 刘淑丹陈冬梅朱永朝魏军
- 关键词：间充质干细胞TOLL样受体免疫调节聚肌胞苷酸
- 氧化苦参碱水凝胶通过激活角化细胞Nrf2/HO-1通路促进创面愈合
- 2024年
- 背景:慢性创面炎症和氧化应激阻碍了角化细胞的再生,氧化苦参碱具有抗氧化、抗炎等多种生物活性,可能具有促进创面愈合的潜在效应。目的:探讨氧化苦参碱对创面愈合的作用,以及对H_(2)O_(2)诱导人角质形成细胞系HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:①体内实验:分别制备含0,0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的甲基丙烯酰化透明质酸(HAMA)水凝胶。在75只糖尿病小鼠背中部制作直径12 mm的全层皮肤缺损模型,随机分5组干预,每组15只:模型组创面包扎固定,单纯水凝胶组以HAMA水凝胶覆盖创面,低、中、高剂量氧化苦参碱组分别以含0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的HAMA水凝胶覆盖创面,光固化后包扎固定,14 d内进行相关指标的检测。②体外实验:将人角质形成细胞系HaCaT分5组培养,正常组常规培养,H_(2)O_(2)组及低、中、高浓度氧化苦参碱组均加入H_(2)O_(2)干预4 h,然后分别更换为含0,0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的培养基,培养24 h后进行相关指标的检测。结果与结论:①体内实验:与模型组比较,单纯水凝胶组小鼠创面愈合率无明显变化,低、中、高剂量氧化苦参碱组治疗后7,14 d的创面愈合率升高(P<0.05)。治疗后14 d的创面样本切片病理观察显示,与模型组相比,中、高剂量氧化苦参碱组再生表皮层厚度、显微血管数量与胶原沉积均增加(P<0.05)。术后7 d的创面样本Western blotting检测显示,与模型组相比,中、高剂量氧化苦参碱组肿瘤坏死因子α与白细胞介素6的蛋白表达降低(P<0.05)。②体外实验:CCK-8检测、EdU及Ki67染色显示,与H_(2)O_(2)组相比,中、高浓度氧化苦参碱组细胞增殖能力明显升高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,中、高浓度氧化苦参碱组线粒体膜电位升高(P<0.05)、活性氧含量降低(P<0.05)。Western blotting检测显示,与H_(2)O_(2)组相比,高浓度氧化苦参碱组Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白、HO-1蛋白及超氧化
- 刘璐刘淑丹刘晓丹杨丽凌晨海小明马会明陈冬梅
- 关键词：氧化苦参碱水凝胶创面愈合
