刘文斌
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京大学临床肿瘤学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金面向21世纪教育振兴行动计划国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定被引量：3
- 2004年
- 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人
- 姜北海刘文斌孟麟吴健寿成超
- 关键词：人-鼠嵌合抗体CHOHER2/NEU
- 四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础。方法构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响。结果转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外。四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白。四环素质量浓度在2mg/L并作用60h其表达水平即可达到最高峰。P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用。结论已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型。
- 龚曼曼孟麟刘文斌张建芝寿成超
- 关键词：四环素支原体属细胞系
- 猪鼻支原体膜蛋白p37酶切修饰的质谱分析被引量：1
- 2006年
- p37是猪鼻支原体的膜脂蛋白,有潜在的致癌活性.在对真核表达的p37蛋白分析时发现,p37表现为不同大小的分子片段,提示其存在蛋白质修饰.为了对p37的确切修饰进行分析,进而为其功能研究奠定基础,在构建不同融合蛋白表达质粒并证明其存在修饰蛋白的基础上,通过飞行质谱及N端氨基酸序列测定,分析了p37蛋白的精确分子量和酶切修饰的大致部位,发现3种形式的p37蛋白的精确分子量分别为47 644、46 105和43 984.p37蛋白在其N端被信号肽酶切去1个21肽,在其C端被蛋白酶切去1个18～26小肽后,成为分子量为43 984的成熟p37蛋白.对p37不同酶切修饰片段的分析将有助于对p37蛋白生物学功能及意义的研究.
- 刘文斌孟麟姜北海寿成超
- 关键词：信号肽质谱
